市售梔子藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

王　曉，黃　南（臺(tái)州市第一人民醫(yī)院，浙江臺(tái)州　318020）

市售梔子藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

王曉＊，黃南（臺(tái)州市第一人民醫(yī)院，浙江臺(tái)州318020）

目的：建立市售梔子藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：測定藥材的水分、總灰分和浸出物。采用高效液相色譜法測定藥材中梔子苷、蘆丁、西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ的含量：色譜柱為Waters Xbridge-C18，流動(dòng)相為乙腈-0.2%磷酸（梯度洗脫，梔子苷、蘆丁）、甲醇-水（45∶55，V/V，西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ），流速為1.0 ml/min，檢測波長為256 nm（梔子苷、蘆丁）、440 nm（西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ），柱溫為30℃，進(jìn)樣量為10μl（梔子苷、蘆丁）、5 μl（西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ）。結(jié)果：梔子藥材的水分、總灰分和浸出物分別為5.8%～8.4%、3.7%～5.9%和29.5%～37.9%。梔子苷、蘆丁、西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ檢測質(zhì)量濃度線性范圍分別為162.08～1 620.84 μg/ml（r=0.999 9）、2.07～20.72 μg/ml（r=0.999 9）、8.04～80.41 μg/ml（r=0.999 9）、1.05～10.53 μg/ml（r=0.999 9）；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD＜2%；加樣回收率分別為98.65%～101.43%（RSD=1.09%，n=6）、97.97%～101.83%（RSD=1.39%，n=6）、97.97%～101.30%（RSD=1.36%，n=6）、98.49%～103.04%（RSD=1.84%，n=6）。結(jié)論：該研究所建標(biāo)準(zhǔn)可用于市售梔子藥材的質(zhì)量控制。

梔子；質(zhì)量控制；梔子苷；蘆丁；西紅花苷Ⅰ；西紅花苷Ⅱ；高效液相色譜法

梔子為茜草科植物梔子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果實(shí)，性味苦、寒，歸心、肺、三焦經(jīng)，具有內(nèi)服瀉火除煩、清熱利濕、涼血解毒、外用消腫止痛等功效，主要用于熱病心煩、濕熱黃疸、血熱吐衄、火毒瘡瘍、扭挫傷痛等癥的治療［1］。現(xiàn)代研究表明，梔子有利膽、止血、鎮(zhèn)靜、降溫、抗病原微生物、抗炎、降血壓作用［2］。市售梔子藥材主要存在染色、摻雜偽品、增重、硫磺熏等質(zhì)量問題，為對浙江省內(nèi)流通的梔子藥材進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，本研究抽取不同廠家生產(chǎn)的各批次市售梔子藥材，采用2015年版《中國藥典》方法對梔子的水分和總灰分進(jìn)行測定，并增加醇溶性浸出物項(xiàng)目，同時(shí)新建高效液相色譜法（HPLC）測定梔子苷和蘆丁以及西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ的含量。

1　材料

1.1儀器

1260型HPLC儀，包括二極管陣列檢測器（美國Agilent公司）；恒溫水浴鍋（上海梅香儀器有限公司）；UNE400型自然對流烘箱（德國Memmert公司）；DHG-9031A型電熱恒溫干燥箱、SXL-1008型程控箱式電爐（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；XS105DU型電子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；DL-360D型智能超聲波清洗器（上海之信儀器有限公司）。

1.2試藥

梔子苷對照品（批號(hào)：110749-201316，純度：97.5%）、蘆丁對照品（批號(hào)：100080-200707，純度：92.5%）、西紅花苷Ⅰ對照品（批號(hào)：111588-201202，純度：91.1%）、西紅花苷Ⅱ?qū)φ掌罚ㄅ?hào)：111589-201304，純度：92.4%）均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈、磷酸均為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

1.3藥材

梔子藥材（見表1）經(jīng)筆者鑒定為真品。

表1　梔子藥材來源Tab 1　Source of G.jasminoides

2　方法與結(jié)果

2.1梔子藥材檢查

2.1.1水分測定［3］取各批樣品2～4 g，平行2份，精密稱定，按2015年版《中國藥典》（四部）“水分測定法第一法”項(xiàng)下方法測定樣品水分，結(jié)果見表2。

2.1.2總灰分測定取各批樣品約2 g，平行2份，精密稱定，按2015年版《中國藥典》（四部）“灰分測定法”項(xiàng)下方法測定樣品總灰分，結(jié)果見表2。

2.1.3浸出物測定取各批樣品2～4 g，平行2份，精密稱定，按2015年版《中國藥典》（四部）“浸出物測定法”項(xiàng)下方法測定樣品浸出物，結(jié)果見表2。

2.2梔子苷和蘆丁含量測定

2.2.1色譜條件色譜柱：Waters Xbridge C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.2%磷酸（B），梯度洗脫（0～12 min，11%→14%A；12～30 min，14%→16%A）；流速：1.0 ml/ min；檢測波長：256 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μl。

表2　樣品水分、總灰分、浸出物和有效成分含量測定結(jié)果（n=2，%）Tab 2　Results of moisture，total ash，extract and contents of effective constitents（n=2，%）

2.2.2對照品溶液的制備精密稱取梔子苷、蘆丁對照品適量，分別各置于15 ml量瓶中，加50%甲醇定容，搖勻，制成單一對照品溶液。分別吸取上述單一對照品溶液適量，置于同一量瓶中，加50%甲醇定容，制成梔子苷、蘆丁質(zhì)量濃度分別為1 620.84、20.72 μg/ml的混合對照品溶液。

2.2.3供試品溶液的制備精密稱取樣品粉末（過4號(hào)篩）0.5 g，置于具塞錐形瓶中，加50%甲醇25 ml，稱定質(zhì)量，超聲（功率：250 W，頻率：40 kHz，下同）處理0.5 h，取出放冷，以50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4系統(tǒng)適用性試驗(yàn)取“2.2.2”“2.2.3”項(xiàng)下對照品溶液、供試品溶液適量，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜，詳見圖1。結(jié)果，理論板數(shù)以梔子苷和蘆丁峰計(jì)均＞20 000；分離度＞1.5，各成分基線分離良好。

圖1　梔子苷、蘆丁的高效液相色譜圖A.對照品；B.供試品；1.梔子苷；2.蘆丁Fig 1　HPLC chromatograms of gardenia and rutinA.reference substance；B.test sample；1.geniposide；2.rutin

2.2.5線性關(guān)系考察精密量取“2.2.2”項(xiàng)下混合對照品溶液1、2、4、6、8、10 ml，分別置于10 ml量瓶中，加50%甲醇定容，制成系列對照品溶液。精密量取上述系列對照品溶液各10 μl，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以梔子苷、蘆丁質(zhì)量濃度（x，μg/ml）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程分別為y=6.766 6x+19.195 6（r=0.999 9）、y=18.996 0x－3.450 4（r=0.999 9）。結(jié)果表明，梔子苷、蘆丁檢測質(zhì)量濃度線性范圍分別為162.08～1 620.84、2.07～20.72 μg/ml。

2.2.6精密度試驗(yàn)取“2.2.2”項(xiàng)下對照品溶液適量，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果，梔子苷、蘆丁峰面積的RSD分別為0.46%、0.78%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取“2.2.3”項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)：141209）適量，分別于室溫下放置0、4、8、12、24、36 h時(shí)按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，梔子苷、蘆丁峰面積的RSD分別為0.79%、1.18%、（n=6），表明供試品溶液在36 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.8重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一批樣品（編號(hào)：141209）適量，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，共6份，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，梔子苷、蘆丁峰面積的RSD分別為0.98%、1.24%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.2.9加樣回收率試驗(yàn)取已知含量樣品（編號(hào)：141209）適量，共6份，分別加入一定質(zhì)量的梔子苷、蘆丁對照品，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表3。

表3　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）Tab 3　Results of recovery test（n=6）

2.3西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ含量測定

2.3.1色譜條件色譜柱：Waters Xbridge C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（45∶55，V/V）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：440 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：5μl。

2.3.2對照品溶液的制備精密稱取西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ?qū)φ掌愤m量，分別各置于25 ml量瓶中，加50%乙醇定容，搖勻，制成單一對照品溶液。分別量取上述單一對照品溶液適量，置于同一量瓶中，加50%乙醇定容，制成西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ質(zhì)量濃度分別為80.41、10.53 μg/ml的混合對照品溶液。

2.3.3供試品溶液的制備精密稱取樣品粉末（過4號(hào)篩）0.1 g，置于50 ml棕色量瓶中，加50%乙醇適量，置冰浴中超聲處理20 min，放至室溫，加稀乙醇補(bǔ)足質(zhì)量，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4系統(tǒng)適用性試驗(yàn)取“2.3.2”“2.3.3”項(xiàng)下對照品溶液、供試品溶液適量，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜，詳見圖2。結(jié)果，理論板數(shù)以西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ峰計(jì)均＞5 000；分離度＞1.5，各成分基線分離良好。

圖2　西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ的高效液相色譜圖A.對照品；B供試品；1.西紅花苷Ⅰ；2.西紅花苷ⅡFig 2　HPLC chromatograms of crocinⅠand crocinⅡA.reference substance；B.test sample；1.crocinⅠ；2.crocinⅡ

2.3.5線性關(guān)系考察精密量取“2.3.2”項(xiàng)下混合對照品溶液1、2、4、6、8、10 ml，分別置于10 ml量瓶中，加50%乙醇定容，制成系列對照品溶液。精密量取上述系列對照品溶液各5 μl，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ質(zhì)量濃度（x，μg/ml）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程分別為y=26.193 3x－5.218 7（r=0.999 9）、y=28.928 6x+1.798 9（r=0.999 9）。結(jié)果表明，西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ檢測質(zhì)量濃度線性范圍為8.04～80.41、1.05～10.53 μg/ml。

2.3.6精密度試驗(yàn)取“2.3.2”項(xiàng)下對照品溶液適量，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果，西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ峰面積的RSD分別為0.53%、0.89%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取“2.3.3”項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)：141209）適量，分別于室溫下放置0、4、8、12、24、36 h時(shí)按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ峰面積的RSD分別為0.98%和1.26%（n=6），表明供試品溶液在36 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.10樣品中梔子苷、蘆丁含量測定取3批樣品各適量，分別按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，計(jì)算樣品中梔子苷、蘆丁的含量，結(jié)果見表2。

2.3.8重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一批樣品（編號(hào)：141209）適量，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，共6份，再按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ峰面積的RSD分別為0.86%、1.35%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.3.9加樣回收率試驗(yàn)取已知含量樣品（編號(hào)：141209）適量，共6份，分別加入一定質(zhì)量的西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ?qū)φ掌罚础?.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表3。

2.3.10樣品中西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ含量測定取3批樣品各適量，分別按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，計(jì)算樣品中西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ的含量，結(jié)果見表2。

3　討論

梔子中含有大量的環(huán)烯醚萜類化合物，同時(shí)還存在一些有機(jī)酸、香豆素、藏紅花素、黃酮、皂苷、揮發(fā)油、木脂素、多糖及其他類化合物［4-5］，目前研究較多的為梔子苷和藏紅花素［6］，關(guān)于黃酮類成分的研究則相對較少。黃酮類化合物具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、降血脂和抗氧化自由基等多種藥理活性［7-8］，與梔子的現(xiàn)代藥理作用相符，對其進(jìn)行研究具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。故本研究在測定梔子苷的同時(shí)對蘆丁的含量進(jìn)行了測定，并在此基礎(chǔ)上對西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ的含量進(jìn)行考察［9-10］。此外，本研究在2015年版《中國藥典》梔子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，增加了醇溶性浸出物項(xiàng)，以期更有效、更全面地控制該藥材的質(zhì)量。

經(jīng)優(yōu)選，結(jié)果顯示采用超聲提取法，以50%甲醇為提取溶劑對梔子中梔子苷和蘆丁的提取效果最好，以5%乙醇為提取溶劑對梔子中西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ的提取效果最好。經(jīng)二極管陣列檢測器掃描，發(fā)現(xiàn)梔子苷的最大吸收波長為239 nm，蘆丁的最大吸收波長為256 nm和354 nm，考慮到梔子中蘆丁含量較低，且在256 nm時(shí)梔子苷的響應(yīng)仍較高，故選用256 nm作為檢測波長以同時(shí)測定上述兩種成分。西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ的最大吸收波長均在440 nm處，故選用440 nm作為檢測波長同時(shí)測定上述兩種成分。

測定結(jié)果顯示，梔子藥材的水分、總灰分和醇溶性浸出物分別為5.8%～8.4%、3.7%～5.9%和29.5%～37.9%。梔子苷、蘆丁、西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ的含量分別為4.7%～8.4%、0.018%～0.070%、0.48%～1.26%和0.05%～0.23%，總西紅花苷（西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ之和）含量為0.53%～1.45%。2015年版《中國藥典》中梔子含量測定項(xiàng)下規(guī)定梔子苷的含量限度是1.8%，由本研究測定結(jié)果可見，16批梔子藥材中含量最低的亦可達(dá)4.7%，高于限度的2倍，且各批次差異相對較小，故可相應(yīng)提高標(biāo)準(zhǔn)；相對而言，梔子中蘆丁的含量差異較大，且與梔子苷的含量不成比例，故其可以作為梔子藥材質(zhì)量控制的輔助性指標(biāo)。綜上所述，本研究所建標(biāo)準(zhǔn)可用于市售梔子藥材的質(zhì)量控制。

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部［S］.2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：248.

［2］王恩里，董方，姚景春.梔子苷藥理學(xué)和毒理學(xué)研究進(jìn)展［J］.中國藥房，2015，26（19）：2 730.

［3］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：四部［S］.2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：103、202、204.

［4］梅蕾蕾，胡曉.梔子中藏花素的藥理學(xué)和藥動(dòng)學(xué)研究進(jìn)展［J］.中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2013，18（7）：837.

［5］唐娜娜，張靜.藥用梔子化學(xué)成分研究［J］.中國藥師，2014，17（3）：381.

［6］陳陽，趙璨，張浩，等.梔子黃OD值、色價(jià)與西紅花苷和梔子苷的相關(guān)性研究［J］.食品科技，2010，35（5）：262.

［7］陳白靈.黃酮類化合物的藥理活性研究新進(jìn)展［J］.海南醫(yī)學(xué)，2012，23（9）：119.

［8］薛梅，李炳奇，王自軍，等.梔子中總黃酮和多糖的微波提取與含量測定［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2006，23（5）：402.

［9］石鳳鳴，王文君，陳雛，等.梔子指紋圖譜及不同生長期西紅花苷和梔子苷含量的研究［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2011，22（8）：1 874.

［10］羅光明，陳巖，李霞，等.不同居群品系梔子中梔子苷和西紅花苷Ⅰ含量的比較研究［J］.中藥材，2010，33（9）：1 376.

Study on the Quality Standard for Gardenia jasminoides CommerciallyAvailable

WANG Xiao，HUANG Nan（Taizhou First People's Hospital，Zhejiang Taizhou 318020，China）

OBJECTIVE：To establish the quality standard for Gardenia jasminoides.METHODS：The moisture，total ash and extract were determined.HPLC was used for contents determination of geniposide，rutin，crocinⅠand crocinⅡ：the column was Waters Xbridge-C18with mobile phase of acetonitrile-0.2%phosphoric acid（gradient elution，gardenia and rutin），methanol-water（45∶55，V/V，crocinⅠ，crocinⅡ）at a flow rate of 1.0 ml/min；detection wavelength was 256 nm for gardenia and rutin，440 nm for crocinⅠ，crocinⅡ；column temperature was 30℃；injection volume was 10 μl for gardenia and rutin，5 μl for crocinⅠ，crocinⅡ.RESULTS：The moisture total ash and ethanol-soluble extract of G.jasminoides were 5.8%-8.4%，3.7%-5.9%and 29.5%-37.9%，respectively.The linear range was 162.08-1 620.84 μg/ml for geniposide（r=0.999 9），2.07-20.72 μg/ml for rutin（r= 0.999 9），8.04-80.41 μg/ml for crocinⅠ（r=0.999 9）and 1.05-10.53 μg/ml for crocinⅡ（r=0.999 9）；RSDs of precision，stability and reproducibility test were lower than 2%；recoveries were 99.33%-101.43%（RSD=1.09%，n=6），97.97%-101.83%（RSD=1.39%，n=6），97.97%-101.30%（RSD=1.36%，n=6）and 98.65%-103.04%（RSD=1.84%，n=6）.CONCLUSIONS：The established standard can be used for the quality control of G.jasminoides commercially available.

Gardenia jasminoides；Quality control；Geniposide；Rutin；CrocinⅠ；CrocinⅡ；HPLC

R927

A

1001-0408（2016）27-3857-04

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.27.38

＊中藥師。研究方向：中成藥、中藥材（飲片）質(zhì)量控制。電話：0576-4016903