復方小兒止咳口服溶液的質量標準提高研究Δ

張敏新，黃愛文，宋洪濤（南京軍區福州總醫院藥學科，福州　350025）

復方小兒止咳口服溶液的質量標準提高研究Δ

張敏新＊，黃愛文，宋洪濤#（南京軍區福州總醫院藥學科，福州350025）

目的：優化和提高復方小兒止咳口服溶液的質量標準。方法：采用薄層色譜法（TLC）對制劑中的甘草進行定性鑒別；采用化學反應法對制劑中吐根酊、氯化銨進行定性鑒別；采用高效液相色譜法（HPLC）測定制劑中甘草酸銨的含量：色譜柱為Agilent Zorbax XDB C18，流動相為乙腈-0.2 mol/L乙酸銨溶液（20∶80，V/V），流速為1.0 ml/min，檢測波長為250 nm，柱溫為30℃，進樣量為10 μl。結果：甘草的TLC斑點清晰，分離良好，陰性對照無干擾。吐根酊、氯化銨的鑒別反應陽性特征顯著。甘草酸銨檢測質量濃度線性范圍為6.08～72.96μg/ml（r=0.999 9）；精密度、穩定性、重復性試驗的RSD＜1.0%；加樣回收率為99.69%～100.28%（RSD=0.20%，n=6）。結論：經優化和提高的標準可有效控制復方小兒止咳口服溶液的質量。

復方小兒止咳口服溶液；質量標準；薄層色譜法；高效液相色譜法

復方小兒止咳口服溶液為本院小兒科驗方制劑，臨床主要用于小兒咳嗽、痰多。該藥原標準鑒別項只有甘草流浸膏、單糖漿、吐根酊和氯化銨的化學法鑒別，無相應的薄層色譜法（TLC）鑒別，且含量測定是以滴定法測定處方中的氯化銨，由于滴定結果顏色干擾大，難以判斷滴定終點，因此誤差較大。為有效控制本制劑的質量，筆者制定了本復方制劑中甘草（TLC法）、吐根、氯化銨（化學反應法）的鑒別方法，并采用高效液相色譜法（HPLC）測定有效成分甘草酸銨的含量。

1　材料

1.1儀器

1200型HPLC儀，包括G1316A型二極管陣列檢測器、Chemstation色譜工作站（美國Agilent公司）；AL204型分析天平［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］；KQ-800KDE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2藥品與試劑

復方小兒止咳口服溶液（本院制劑室自制，批號：20153161、20153162、20153163，規格：100 ml/瓶）；甘草流浸膏（寶雞金森制藥有限公司，批號：20150203）；甘草苷對照品（批號：111610-201106，純度＞98%）、甘草對照藥材（批號：120904-201318）、甘草酸銨對照品（批號：110731-201116，純度＞98%）均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2　方法與結果[1-2]

2.1甘草的TLC鑒別

取樣品20 ml，以水飽和的正丁醇提取2次，每次20 ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌3次，棄去水層，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液；取甘草苷對照品適量，加甲醇制成甘草苷質量濃度為1 mg/ml的對照品溶液；再取甘草對照藥材粉末1 g，加甲醇30 ml，超聲（功率：250 W，頻率：40 kHz，下同）處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40 ml使溶解，用水飽和的正丁醇提取3次，每次20 ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌3次，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇3 ml使溶解，作為對照藥材溶液；另取缺甘草流浸膏的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。按TLC法［2015年版《中國藥典》（一部）］［3］試驗，吸取上述4種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15∶1∶1∶2，V/V/V/V）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結果，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜對應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，詳見圖1。

圖1　甘草的薄層色譜圖1.對照品；2.對照藥材；3～5.供試品；6.陰性對照Fig 1　TLC chromatograms of G.uralensis1.reference substance；2.control medicines；3-5.test samples；6.negative control

2.2吐根酊的鑒別

取樣品10 ml，加水5 ml，加氨試液2 ml使成堿性；加二氯甲烷20 ml振搖，分取二氯甲烷層，揮干，殘渣加稀硫酸1～2滴，混勻，加硫酸2滴及鉬酸少許，靜置30 min，觀察樣品顏色。結果，樣品顯綠色，為陽性反應。

2.3氯化銨的鑒別

取樣品2份，每份10 ml，置于50 ml納氏比色管中。一份加硝酸銀試液1.0 ml，搖勻，放置10 min，反復濾過，至濾液完全澄清，加規定量的標準氯化鈉溶液，再加水稀釋至50 ml，搖勻，暗處放置5 min，作為對照溶液；另一份加硝酸銀試液1.0 ml，再加水稀釋至50 ml，搖勻，暗處放置5 min，與對照溶液比較。結果，樣品呈陽性反應。

2.4含量測定

2.4.1色譜條件色譜柱：Agilent Zorbax XDB C18（150 mm× 4.6 mm，5μm）；流動相：乙腈-0.2mol/L乙酸銨（20∶80，V/V）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：250 nm；柱溫：30℃；進樣量：10 μl。

2.4.2對照品溶液的制備精密稱取甘草酸銨對照品適量，加流動相制成甘草酸銨質量濃度為300μg/ml的對照品貯備液。精密量取上述對照品貯備液適量，加流動相制成甘草酸銨質量濃度為20μg/ml的對照品溶液。

2.4.3供試品溶液的制備 （1）復方小兒止咳口服溶液供試品精密量取樣品1 ml，置于50 ml量瓶中，加甲醇30 ml，超聲處理30 min，取出，放冷，用甲醇定容，搖勻，濾過，精密量取續濾液5 ml，置于25 ml量瓶中，加流動相定容，搖勻，即得。（2）甘草流浸膏供試品溶液 精密量取甘草流浸膏2 ml，置于100 ml量瓶中，加甲醇40 ml，超聲處理30 min，取出，放冷，用甲醇定容，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 ml，置于50 ml量瓶中，加流動相定容，搖勻，即得。

2.4.4陰性對照溶液的制備按復方小兒止咳口服溶液處方和制備工藝制備缺甘草流浸膏的陰性樣品，并按“2.4.3”項下方法制成陰性對照溶液。

2.4.5專屬性試驗取上述對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液適量，按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜，詳見圖2。結果，在陰性對照溶液色譜圖上甘草酸銨出峰相應位置未見色譜峰，表明本方法專屬性良好。

2.4.6線性關系考察分別精密量取“2.4.2”項下對照品貯備液適量，置于10 ml量瓶中，用流動相定容，搖勻，得質量濃度為6.08～72.96μg/ml的系列對照品溶液。精密量取上述系列對照品溶液各10 μl，按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以甘草酸銨質量濃度（x，μg/ml）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程為y=5 188.40x－2.67（r= 0.999 9）。結果表明，甘草酸銨檢測質量濃度線性范圍為6.08～72.96μg/ml。

圖2　高效液相色譜圖A.對照品；B.供試品；C.陰性對照；1.甘草酸銨Fig 2　HPLC chromatogramsA.reference substance；B.test sample；C.negative control；1.ammonium glycyrrhizinate

2.4.7精密度試驗取“2.4.2”項下對照品溶液適量，按“2.4.1”項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果，甘草酸銨峰面積的RSD=0.74%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.4.8穩定性試驗取“2.4.3”項下供試品溶液（批號：20153161）適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、12 h時按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，甘草酸銨峰面積的RSD=0.76%（n=6），表明供試品溶液在12 h內基本穩定。

2.4.9重復性試驗精密稱取同一批樣品（批號：20153161）適量，按“2.4.3”項下方法制備供試品溶液，共6份，再按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算樣品含量。結果，甘草酸銨含量為3.55 mg/ml，RSD=0.78%（n=6），表明本方法重復性良好。

2.4.10加樣回收率試驗取已知含量樣品（批號：20153161）適量，共9份，每份1 ml，分別加入低、中、高質量的甘草酸銨對照品，按“2.4.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結果見表1。

2.4.11樣品含量測定取3批樣品各適量，分別按“2.4.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，計算樣品含量，結果見表2。

3　討論

2015年版《中國藥典》中甘草流浸膏鑒別用的薄層板為1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板，經試驗發現，上述薄層板與本試驗所用薄層板的展開效果比較，除了比移值不同外，分離效果基本相同。故最終選擇了硅膠G薄層板。

由于吐根對照藥材、吐根堿、吐根次堿等為毒性對照品，皆無法購得，故其只能以化學反應法進行鑒別。同時，陰性溶液不顯綠色反應，而受試品顯綠色，表明本方法可用于本制劑中吐根的鑒別。

表1　加樣回收率試驗結果（n=9）Tab 1　Results of recovery test（n=9）

2015年版《中國藥典》（二部）中氯化銨原料、氯化銨片皆是以硝酸銀滴定法對其含量測定，但經反復試驗發現，本制劑中的甘草流浸膏中的某成分可與銀離子結合，使含量測定值偏高（約為120%）。故最終不將其列入質量標準中。

表2　樣品含量測定結果（n=3）Tab 2　Results of content determination of samples（n=3）

綜上所述，經優化和提高的標準可有效控制復方小兒止咳口服溶液的質量。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［S］.2015年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：399.

［2］鞏偉，趙豫，趙慶華，等.十一味參龍口服液的質量標準研究［J］.中國藥房，2014，25（35）：3 323.

［3］衛生部藥政局.中國醫院制劑規范：西藥制劑［S］.2版.北京：人民衛生出版社，1995：55.

（

（編輯：張靜）

Study on the Improving the Quality Standard for Compound PediatricAnticough Oral Solution

ZHANG Minxin，HUANG Aiwen，SONG Hongtao（Dept.of Pharmacy，Fuzhou General Hospital of Nanjing Military Command，PLA，Fuzhou 350025，China）

OBJECTIVE：To optimize and improve the quality standard for Compound pediatric anticough oral solution.METHODS：TLC was adopted for the qualitative identification of Glycyrrhiza uralensis；chemical reaction was adopted for the qualitative identification of ipecac tincture，ammonium chloride；and HPLC was adopted for the content determination of ammonium glycyrrhizinate：the column was Agilent Zorbax XDB C18with mobile phase of acetonitrile-0.2 mol/L ammonium acetate（20∶80，V/V）at a flow rate of 1.0 ml/min，the detection wavelength was 250 nm，column temperature was 30℃，and the injection volume was 10 μl.RESULTS：TLC spots of G.uralensis were clear and well-separated，negative control without interference.Differential response of ipecac tincture and ammonium chloride showed significant positive characteristics.The linear range of ammonium glycyrrhizinate was 6.08-72.96μg/ml（r=0.999 9）；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 1.0%；recovery was 99.69%-100.28%（RSD=0.20%，n=6）.CONCLUSIONS：Optimizing and improving the standard are helpful for the quality control of Compound pediatric anticough oral solution.

Compound pediatric anticough oral solution；Quality standard；TLC；HPLC

R917；R927

A

1001-0408（2016）27-3855-03

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.27.37

軍隊醫療機構制劑標準提高科研專項課題（No.14ZJZ17）

＊藥師。研究方向：藥物分析。電話：0591-22859169。E-mail：280361089@qq.com

主任藥師，教授，博士生導師，博士。研究方向：藥物新劑型與制劑新技術。電話：0591-22859459。E-mail：sohoto@vip.163.com

2015-09-14

2015-11-08）