血管緊張素轉(zhuǎn)換酶I/D基因多態(tài)性與老年非杓型高血壓及左心室肥厚的相關(guān)性

胡丙清 陳 森 陳娜麗

(蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院老年病科，安徽 蚌埠 233004)

?

血管緊張素轉(zhuǎn)換酶I/D基因多態(tài)性與老年非杓型高血壓及左心室肥厚的相關(guān)性

胡丙清 陳 森 陳娜麗

(蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院老年病科，安徽 蚌埠 233004)

目的 探討血管緊張素與轉(zhuǎn)換酶(ACE)I/D基因多態(tài)性與老年非杓型高血壓及左心室肥厚的相關(guān)性。方法 選取96例老年高血壓患者，根據(jù)24 h動態(tài)血壓監(jiān)測(ABPM)結(jié)果分為杓型和非杓型高血壓組；應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法檢測ACE I/D基因多態(tài)性，并檢測生化指標(biāo)和超聲心動圖，計算左室質(zhì)量指數(shù)(LVMI)，比較兩組的基因型及其相應(yīng)的LVMI的差異。結(jié)果 ①96例高血壓患者中非杓型高血壓比例為35%，II基因型頻率為24%；ID型為35%；DD型為41%；I等位基因頻率為41%；D等位基因頻率為59%。而杓型高血壓患者中II基因型頻率為47%；ID型為32%；DD型為21%；I等位基因頻率為63%；D等位基因頻率為37%。二組ACE基因型頻率及ACE等位基因頻率有顯著差異(P值分別為0.042、0.004)。②3種基因型LVMI相比有顯著差異(P=0.005)。結(jié)論 老年非杓型高血壓與ACE基因DD型相關(guān)；DD基因型的高血壓患者易出現(xiàn)左心室肥厚。

ACE基因多態(tài)性；動態(tài)血壓監(jiān)測；非杓型高血壓；左心室肥厚

隨著24 h動態(tài)血壓監(jiān)測(ABPM)技術(shù)在臨床中的應(yīng)用，非杓型高血壓逐漸引起人們的重視。流行病學(xué)和觀察性的研究均發(fā)現(xiàn)，非杓型高血壓比杓型高血壓更易引起靶器官損害及不良心腦血管事件的發(fā)生〔1～3〕。腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)在原發(fā)性高血壓及靶器官損害的發(fā)病中起著非常重要的作用，而血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)是該系統(tǒng)中的一個關(guān)鍵酶，ACE的合成受控于ACE基因，后者第16個內(nèi)含子中存在一段287 bp的插入或缺失(I/D)多態(tài)性。本研究通過對老年高血壓患者血清ACE基因多態(tài)性的分析，探討ACE基因多態(tài)性與老年非杓型高血壓及左心室肥厚的相關(guān)性。

1 對象與方法

1.1 對象 隨機(jī)選取我院2012年6月至2013年9月門診及住院的老年高血壓患者96例，男52例，女44例，年齡均在60歲以上。符合《中國高血壓防治指南(2010年修訂版)》診斷標(biāo)準(zhǔn)，連續(xù)3次非同日安靜狀態(tài)下測量收縮壓≥140 mmHg和(或)舒張壓≥90 mmHg，并排除繼發(fā)性高血壓，獲取知情同意參與本研究。

1.2 方法

1.2.1 臨床生化指標(biāo) 谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)，空腹血糖(FPG)，尿酸(UA)，肌酐(Cr)，尿素氮(BUN)，總膽固醇(TC)，甘油三酯(TG)，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)，C-反應(yīng)蛋白(CRP)，由本院檢驗科生化室測定。

1.2.2 超聲心動圖檢查 所有患者行超聲心動圖檢查，分別測定左室舒張末期內(nèi)徑(LVDd)、舒張期室間隔厚度(IVS)、舒張期左室后壁厚度(LVPWT)。根據(jù)Devereux 公式〔4〕計算：左室質(zhì)量LVM；左室質(zhì)量指數(shù)LVMI。若男性LVMI>134 g/m2；女性LVMI>110 g/m2，則為左心室肥厚。

1.2.3 ACE I/D基因多態(tài)性的檢測 采取清晨空腹外周靜脈血5 ml，2%EDTA抗凝，-20℃低溫保存?zhèn)溆谩０凑针x心柱型DNA提取試劑盒說明方法提取DNA(北京天根生化科技有限公司，目錄號：DP318)，提取的DNA-20℃低溫保存。應(yīng)用上海生工生物工程公司提供的PCR試劑盒及引物序列，引物序列為：上游：5′-CTG GAG ACC ACT CCC ATC CTT TCT-3′，下游5′-GAT GTG GCC ATC ACA TTC GTC AGA T-3′，PCR反應(yīng)體系50 μl：PCR Master Mix(2×)25 μl，上游引物2 μl，下游引物2 μl，DNA模板4 μl，Water(nuclease-free)17 μl。應(yīng)用PCR儀(廣州達(dá)安，型號：DA7600)進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增條件：預(yù)變性95℃，180 s，循環(huán)1次；變性95℃，30 s；退火60℃，30 s；延伸72℃，30 s；以上循環(huán)30次。總延伸72℃，600 s，循環(huán)1次。取5 μl PCR產(chǎn)物及1 μl上樣緩沖液在含有溴乙啶的2%瓊脂糖凝膠上電泳(電壓100 V，時間30 min)，以DNA Marker作為參照，紫外線燈下觀察并判斷基因類型。

1.2.4 24 hABPM 采用日本NISSEI公司的24 h動態(tài)血壓監(jiān)測儀進(jìn)行監(jiān)測(型號：DS-250)，從上午8：30點(diǎn)至次日8：30，06：00～22：00為白天，22：00～次日06：00為夜間，白天監(jiān)測血壓間隔時間為30 min，夜間為60 min。主要分析以下參數(shù)：全天最高、最低和平均收縮壓及舒張壓；白天及夜間的最高、最低、平均收縮壓和舒張壓。24 h動態(tài)血壓診斷高血壓的診斷標(biāo)準(zhǔn)：24 h血壓平均值≥130/80 mmHg，白天≥135/85 mmHg，夜間≥120/70 mmHg。夜間血壓下降百分率：(白天平均值-夜間平均值)/白天平均值。10%～20%：杓型；<10%：非杓型。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行t檢驗、單因素方差分析及χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 入選患者各臨床特點(diǎn)比較 見表1。三種基因型患者的各項生化指標(biāo)及病程無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，LVMI相比有顯著差異(P<0.05)，DD型LVMI數(shù)值明顯增高。

表1 研究對象的各項生化指標(biāo)及LVMI比較±s)

2.2 ACE I/D基因多態(tài)性的檢測結(jié)果 見圖1。位于ACE基因16內(nèi)含子I/D多態(tài)性經(jīng)PCR方法可擴(kuò)增出2種不同長度擴(kuò)增帶，僅有490 bp條帶者為插入純合子，II型；僅有190 bp為缺失純合子，DD型；同時有490 bp和190 bp的為插入/缺失雜合子，ID型。

M：DNA Marker；1,3:ID型；5：II型；2，4：DD型圖1 ACE I/D多態(tài)性檢測的電泳結(jié)果

2.3 24 hABPM結(jié)果 見表2。杓型高血壓夜間血壓下降超過日間平均血壓的10%，非杓型高血壓夜間血壓下降小于日間平均血壓的10%。

表2 24 hABPM結(jié)果

2.4 杓型和非杓型高血壓組ACE基因型比較 見表3。兩組ACE基因型頻率及ACE等位基因頻率有顯著差異(P<0.05)，非杓型高血壓主要與OD型相關(guān)。

表3 非杓型和杓型高血壓組ACE基因型比較〔n(%)〕

3 討 論

有關(guān)ACE基因多態(tài)性在高血壓左心室肥厚的研究，近年來有不少國內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行了探索。張猛等〔5〕通過PCR方法對356例高血壓患者及104例正常對照組進(jìn)行的ACE基因多態(tài)性與高血壓左室肥厚的關(guān)系探討，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ACE基因多態(tài)性與高血壓左室肥厚形成有關(guān)，DD基因型易發(fā)生左心室肥厚。Li等〔6〕也觀察到ACE DD基因型高血壓患者更易發(fā)生左心室肥厚。意大利學(xué)者DiMauro等〔7〕通過對74例健康耐力運(yùn)動員跟蹤隨訪5年發(fā)現(xiàn)ACE DD基因型者LVMI顯著增高。與本次研究結(jié)果相似。另外近年來有報道ACE DD基因型與冠心病〔8〕、高血壓腦卒中〔9〕亦有密切相關(guān)性。臨床研究表明，非杓型高血壓比杓型高血壓患者有更嚴(yán)重的靶器官損害傾向。左心室肥厚〔10〕、腎功能損害〔11〕等靶器官損害在非杓型高血壓患者中更明顯。但ACE基因多態(tài)性與非杓型高血壓之間有無相關(guān)性未見有報道。本研究通過對96例老年高血壓患者進(jìn)行ACE基因I/D多態(tài)性的分析，觀察到DD基因型及D等位基因的頻率在老年非杓型高血壓患者中明顯升高，而且DD基因型高血壓患者更易出現(xiàn)左心室肥厚。

ACE是一種外肽酶，是RAAS的重要成分，廣泛存在于毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞中，可催化十肽的血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化為八肽的血管緊張素Ⅱ，同時還具有滅活緩激肽的作用，二者共同作用引起血管收縮、細(xì)胞增生、組織結(jié)構(gòu)重塑、血栓形成，導(dǎo)致高血壓及靶器官損害。人體在正常條件下，白天交感神經(jīng)興奮占主導(dǎo)，RAAS激活，兒茶酚胺增多，血壓升高，夜間睡眠時，迷走神經(jīng)張力增高，血壓降低。而非杓型高血壓患者與正常情況不同，夜間交感神經(jīng)活性增強(qiáng)，血壓持續(xù)升高，使循環(huán)系統(tǒng)及其他各臟器長時間處于超負(fù)荷狀態(tài)，易導(dǎo)致靶器官損害。而靶器官功能受損又會促進(jìn)神經(jīng)體液分泌失調(diào)，又進(jìn)一步影響血壓調(diào)節(jié)，二者互為因果，互相影響。本研究證實非杓型高血壓患者多為ACE DD基因型，故這類患者一方面可以通過活化ACE基因表達(dá)，增加ACE活性和血管緊張素Ⅱ水平以及緩激肽的降解促使靶器官的損害；另一方面通過交感神經(jīng)活性持續(xù)增強(qiáng)加強(qiáng)靶器官損害。

本研究觀察到DD基因型與非杓型高血壓之間密切相關(guān)，可能是非杓型高血壓的遺傳基因，推測攜帶DD基因型的高血壓者具有更高的非杓型高血壓易感性。血漿ACE的水平受控于ACE基因，不同的ACE基因多態(tài)性血清ACE濃度不同，DD基因型血清ACE濃度約為II基因型的2倍〔12〕，因此推測D等位基因活化ACE基因的表達(dá)，I等位基因抑制其表達(dá)。這種變異通過增強(qiáng)RAAS系統(tǒng)活性，最終促使靶器官損害。

血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)通過抑制ACE活性，減少心肌局部血管緊張素Ⅱ合成及緩激肽滅活，從而減輕心肌重塑，抑制心室肥厚的發(fā)生。不同基因型的患者對ACEI藥物的反應(yīng)不同，因DD基因型高血壓患者ACE活性較高，ACEI對其有更強(qiáng)的抑制作用，療效好，而II、ID基因型ACE濃度低，活性差，ACEI的療效就差。因此在臨床上對已經(jīng)確診的原發(fā)性高血壓患者，盡早行ACE基因型檢測及24 h動態(tài)血壓監(jiān)測，對DD基因型的高血壓患者，盡早應(yīng)用ACEI，并且根據(jù)杓型或非杓型決定最佳的服用時間，提高高血壓患者的血壓達(dá)標(biāo)率。

雖然本研究發(fā)現(xiàn)老年非杓型高血壓的發(fā)生與ACE DD基因型有關(guān)聯(lián)，但原發(fā)性高血壓是多基因疾病，非杓型高血壓發(fā)生的影響因素也不是單一的，其他年齡的高血壓是不是有同樣的結(jié)論，還需要多角度大樣本來進(jìn)一步研究，最終達(dá)到根據(jù)每個患者的遺傳多態(tài)性合理用藥，真正實現(xiàn)高血壓的個體化治療。

1 Karakas MF，Buyukkaya E，Kurt M，etal.Assessment of left ventricular dyssynchrony in dipper and non-dipper hypertension〔J〕.Blood Press,2013;22(3)：144-8.

2 Hermida RC，Ayala DE，Mojón A，etal.Blunted sleep-time relative blood pressure decline increases cardiovascular risk independent of blood pressure level--the “normotensive non-dipper” paradox〔J〕.Chronobiol Int.2013;30(1-2)：87-98.

3 朱靈妍，姚成增.高血壓病血壓晝夜節(jié)律與靶器官損害〔J〕.江蘇大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2013;23(2)：180-4.

4 Kaur S，Singh P，Indu V，etal.Fibrinogen，Lp(a)，microalbuminuria and left ventricular mass index：cardiovascular disease risk factors in diabetes〔J〕.Indian J Clin Biochem,2012；27(1)：94-6.

5 張 猛，郭軍霞，甘立軍.ACE 基因多態(tài)性及MYBPC3 突變與高血壓左室肥厚的關(guān)系〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2013;33(7):3027-9.

6 Li X，Li Y，Jia N，etal.Angiotensin-converting enzyme gene deletion allele increases the risk of left ventricular hypertrophy：evidence from a meta-analysis〔J〕.Mol Biol Rep,2012；39(12)：10063-75.

7 Di Mauro M，Izzicupo P，Santarelli F，etal.ACE and AGTR1 polymorphisms and left ventricular hypertrophy in endurance athletes〔J〕.Med Sci Sports Exerc,2010；42(5)：915-21.

8 Zhou L，Xi B，Wei Y，etal.Meta-analysis of the association between the insertion/deletionpolymorphism in ACE gene and coronary heart disease among the Chinese population〔J〕.J Renin Angiotensin Aldosterone Syst,2012；13(2)：296-304.

9 李慧喬，李 瑛，王 春，等.口服避孕藥及血管緊張素轉(zhuǎn)化酶基因多態(tài)性與女性腦卒中發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系〔J〕.中華流行病學(xué)雜志，2012；33(1)：23-7.

10 Kim BK，Lim YH，Lee HT，etal.Non-Dipper pattern is a determinant of the inappropriateness of left ventricular mass in essential hypertensive patients〔J〕.Korean Circ J,2011；41(4)：191-7.

11 An HR，Park S，Yoo TH，etal.Non-dipper status and left ventricular hypertrophy as predictors of incident chronic kidney disease〔J〕.J Korean Med Sci,2011；26(9)：1185-90.

〔2014-12-06修回〕

(編輯 趙慧玲/曹夢園)

胡丙清(1979-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事老年心血管疾病研究。

R541.3

A

1005-9202(2016)19-4753-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.19.036