半枝蓮多糖對H22荷瘤小鼠組織蛋白質的影響

許曉義 武蕾蕾 李 麗 張曉莉 關利新 遲硯軍 宋高臣

(牡丹江醫學院，黑龍江 牡丹江 157011)

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半枝蓮多糖對H22荷瘤小鼠組織蛋白質的影響

許曉義 武蕾蕾 李 麗 張曉莉 關利新 遲硯軍1宋高臣

(牡丹江醫學院，黑龍江 牡丹江 157011)

目的 比較半枝蓮多糖(SBPS)對H22荷瘤小鼠組織蛋白質雙向凝膠電泳圖譜的影響。方法 建立H22荷瘤小鼠動物模型，分別取H22荷瘤小鼠和SBPS組小鼠瘤組織，利用雙向電泳技術分離兩組瘤組織的蛋白質，獲得圖譜后通過ImageMaster 5.0軟件分析兩組蛋白表達的差異性。結果 兩組差異明顯的蛋白點有14個，其中SBPS組6個點高表達，8個低表達；14個點僅在荷瘤組表達，12個點在SBPS組特異表達。結論 SBPS可以通過調節H22肝癌瘤組織中部分蛋白質的表達，實現對肝癌的治療作用。

半枝蓮多糖；肝癌

半枝蓮多糖(SBPS)是中藥半枝蓮重要的化學組分，具有提高免疫力以及一定的抗腫瘤作用，并對抗腫瘤藥物起到增效減毒作用〔1,2〕。本文擬利用雙向凝膠電泳技術，探討SBPS治療肝癌在蛋白質組水平的機制。

1 材料與方法

1.1 動物與廇株 昆明種小鼠20只，18～22 g，黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供，小鼠轉移性腹水型肝癌細胞株H22由中國醫學科學院腫瘤研究所引進。

1.2 主要試劑與儀器設備 SBPS(寧波德康生物制品有限公司)，AgNO3(和光純業工業株式會社)，IPG Buffer(GE)，Tris(Sigma)，DTT(Sigma)，固相pH梯度干膠條(GE)，Ettan DALT twelve電泳系統(GE)，IPGphor3等電聚焦儀(GE)，ImageMaster 5.0分析軟件(GE)等。

1.3 方法

1.3.1 H22荷瘤小鼠模型建立 無菌條件下抽取接種第6～7天生長良好的H22肝癌小鼠的腹水(活癌細胞數>97%)，無菌生理鹽水1∶3稀釋，調整細胞濃度約2×107個/ml，0.2%臺盼藍染色，計活細胞數大于95%，小鼠右前肢腋部皮下接種0.2 ml/只制備實體瘤模型。設立荷瘤組與SBPS組，每組10只，SBPS組在接種6 h后每天腹腔注射SBPS 100 mg/kg，荷瘤組給等體積生理鹽水，同條件飼養。

1.3.2 組織收集及樣品處理 將各組小鼠處死，分別取兩組瘤組織各約0.4 cm×0.4 cm，用無菌條件下生理鹽水反復清洗，液氮保存。取凍存組織，稱重30～90 mg，研磨勻漿后置于450 μl裂解液中混勻。37℃孵育1 h，10℃，40 000 r/min離心15 min，吸取上清液。

1.3.3 雙向凝膠電泳 取兩組小鼠組織樣品，按PI進行第一向固相pH梯度等電聚焦分離，再根據分子量進行第二向SDS-PAGE分離，獲得兩組蛋白質圖譜。

1.3.4 圖像掃描及分析 運用ImageMaster 5.0軟件對蛋白質圖譜進行分析，找出差異表達蛋白質點。

2 結 果

2.1 對照組和荷瘤組組織的2-DE圖譜 見圖1。

圖1 荷瘤組 (左)和SBPS組(右)蛋白表達圖譜

2.2 對照組與荷瘤組差異蛋白點分析 見圖2,表1，表2。

圖2 荷瘤組與SBPS組的差異蛋白點

表1 荷瘤組與SBPS組表達量相差3倍以上的蛋白質點

“+”表示在SBPS組高表達；“-”表示在SBPS組低表達

表2 荷瘤組與SBPS組特有的蛋白質點

3 討 論

半枝蓮作為一種常用的抗腫瘤中藥，已在臨床上應用于治療肝癌、胃癌、肺癌、直腸癌、鼻咽癌等，確切療效。SBPS作為半枝蓮抗腫瘤作用的主要成分已從不同角度得到證實，基于我們前期發現SBPS可明顯抑制小鼠HepA瘤(抑瘤率可達34.35%)〔3〕；其抗肝癌的作用機制體現在可控某些癌基因、抑癌基因和蛋白的表達〔4～6〕；對化療藥物有增效減毒作用〔7～9〕；對肝癌小鼠的免疫功能有調節作用〔10〕等，本研究通過雙向凝膠電泳技術分析差異蛋白表達圖譜，發現3倍以上變化的點有14個，在SBPS組中6個蛋白點表達上調，8個下調；12個蛋白點在SBPS組特異表達，14個表達缺失，說明SBPS的抗肝癌作用可能與這些異常表達的蛋白有關，這些蛋白為我們進一步研究其抗癌作用靶點提供了重要信息和技術支持。

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3 宋高臣，于英君，王喜軍.半枝蓮多糖的抗腫瘤作用及其調節免疫的實驗研究〔J〕.世界科學技術：中醫藥現代化，2011；13(4)：641-3.

4 宋高臣，張高坤，公長春，等.半枝蓮多糖對HepA荷瘤小鼠抑癌基因表達的影響〔J〕.中國醫藥導刊，2010；12(6)：1020-1.

5 宋高臣，于水瀾，曾 奇，等.SBPS對荷瘤小鼠癌基因表達的影響〔J〕.中國醫藥導刊，2010；12(5)：833-4.

6 于水瀾，于英君，許曉義，等.半枝蓮多糖對肝癌小鼠差異表達蛋白質影響的實驗研究〔J〕.中醫藥信息，2014；17(2)：15-8.

7 宋高臣，王桂云，劉洪鳳，等.半枝蓮多糖對環磷酰胺增效減毒作用的實驗研究〔J〕.中醫藥信息，2010；27(4)：107-9.

8 宋高臣，徐 薇，張 杰，等.半枝蓮多糖協同環磷酰胺治療肝癌的作用機制研究〔J〕.中醫藥學報，2010；38(4)：48-50.

9 于英君，贠可力，周 群，等.半枝蓮多糖輔助環磷酰胺對H22小鼠血清IL-2、IL-12含量的影響〔J〕.中醫藥信息，2009；26(6)：24-6.

10 于英君，周 群，贠可力，等.半枝蓮多糖輔助化療藥物對小鼠血清TNF-α、VEGF表達的影響〔J〕.中醫藥信息，2010；27(1)：29-31.

〔2016-06-13修回〕

(編輯 郭 菁)

牡丹江市科學技術計劃項目(Z2014s031)；黑龍江省普通高等學校青年學術骨干支持計劃項目(1251G066)

1 牡丹江市第一人民醫院

宋高臣(1971-)，男，教授，博士，主要從事中藥抗腫瘤分子生物學機制研究。

許曉義(1981-)，男，講師，碩士，主要從事中藥抗腫瘤分子生物學機制研究。

R735

A

1005-9202(2016)19-4709-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.19.016