丹參注射液對急性壞死性胰腺炎大鼠肺組織ICAM-1表達的影響

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丹參注射液對急性壞死性胰腺炎大鼠肺組織ICAM-1表達的影響

徐文會 楊敏

急性胰腺炎(AP)是外科常見急腹癥之一，重癥急性胰腺炎(SAP)常伴有全身炎癥反應綜合征及器官功能衰竭[[1]]，病死率極高。SAP合并的其他臟器損傷中尤以肺損傷為主，主要的致病因子之一是細胞間黏附因子(intercellular adhesion molecule 1, ICAM-1)及其配體中性粒細胞表面抗原(lymphocyte function-associated antigen-1，LFA-1)[[2]]。有研究結果表明，丹參注射液中的水溶性酚酸類有活血化瘀的良好藥效[[3]]，不僅在心閉胸悶的疾病中應用，還對多種心血管疾病，肝、腎功能損傷等有良好的治療效果[[4]]。本研究應用丹參注射液治療急性壞死性胰腺炎(ANP)大鼠，觀察其對ANP引起的肺損傷的治療作用。

一、材料與方法

1．實驗動物及分組：SD大鼠60只購自山西醫科大學動物中心，按隨機數字法將大鼠分為對照組、ANP組、丹參注射液治療組(治療組)，每組20只。ANP組采用膽胰管內逆行注入1%牛磺膽酸鈉0.2 ml/kg體重的方法制備ANP模型；治療組在ANP模型制備前30 min腹腔注射丹參酮溶液25 mg/kg體重；對照組大鼠在開腹后僅觸碰與翻動十二指腸及胰腺。ANP組與對照組大鼠在術前30 min腹腔注射等容積生理鹽水。術后3、6、12、24 h分批處死大鼠。采取血液標本，分離血漿置-20℃冰箱備用。取胰腺及肺組織。

2．血漿LFA-1水平檢測：參考楊學良等[5]報道的方法，應用流式細胞儀檢測大鼠血漿LFA-1水平。

3．大鼠肺組織病理學檢查及ICAM-1蛋白表達檢測：取大鼠左側肺稱濕重，再將其置160℃烘烤48 h，充分脫水直至恒重，再稱左肺干重，計算濕重與干重的比值(W/D值)。取右肺置10%甲醛浸泡過夜，常規行病理學檢查，并采用免疫組化染色法檢測ICAM-1蛋白表達。兔抗大鼠ICAM-1抗體購自武漢博士德公司，工作濃度1∶5，羊抗兔多抗購自上海彩音生物科技公司，工作濃度1∶5。隨機選取3個高倍視野，參考劉明東等[6]的方法進行評分。陽性積分=(陽性細胞數/總細胞數)×著色強度。淺黃色為著色強度1分，黃色為2分，深黃至棕色為3分。

二、結果

1．各組大鼠血漿LFA-1水平變化：對照組大鼠血漿LFA-1水平無明顯變化。ANP組大鼠血漿LFA-1水平隨時間的延長逐漸升高，各時間點均較對照組顯著升高，差異均有統計學意義。治療組血漿LFA-1水平亦隨時間的延長逐漸升高，但均顯著低于同時間點ANP組，仍顯著高于對照組，差異均有統計學意義(表1)。

表1 3組大鼠血漿LFA-1水平的變化

注：與對照組比較，aP<0.05，與ANP組比較，bP<0.05

2．各組大鼠肺組織病理改變及ICAM-1表達的變化：對照組大鼠肺組織無明顯病理學改變。ANP組及治療組大鼠制模后3 h起肺組織出現明顯的水腫與充血，6 h起組織間多形核白細胞數量增多，廣泛浸潤，與血管內皮黏附明顯，組織間隔變性增厚，且隨時間的延長而加重。

對照組大鼠肺組織ICAM-1表達較少，且隨時間的延長無明顯變化。ANP組、治療組大鼠肺組織ICAM-1表達均隨時間延長而升高，且均顯著高于同時間點對照組，治療組又顯著低于同時間點ANP組，差異均有統計學意義(表2，圖1)。

3．各組大鼠肺的W/D值變化：對照組大鼠肺的W/D值無明顯變化。ANP組、治療組大鼠肺的W/D值均隨時間延長而升高，且6 h后均顯著高于對照組(表3)。

表2 各組大鼠胰腺組織ICAM-1表達

注：與對照組比較，aP<0.05；與ANP組比較，bP<0.05

表3 3組大鼠肺W/D比值的比較

注：與對照組比較，aP<0.05，與ANP組比較，bP<0.05

討論

肺損傷是SAP的一個主要并發征，其機制主要是胰腺腺泡釋放的大量胰酶激活單核細胞吞噬系統，導致中性粒細胞分泌大量細胞因子，產生級聯的炎癥反應，引發嚴重的SIRS，造成多器官，尤其是肺臟的損害[[8]。Zhou等[[9]]的研究結果顯示，炎癥因子濃度的升高往往導致炎癥反應與器官損傷的加劇，抑制炎癥因子產生可有效改善預后，顯著提高患者治愈率。

ICAM-1及其配體LFA-1作為炎性因子可隨血流運抵全身，兩者結合可產生廣泛的黏附聚集，導致毛細血管機械性堵塞，機體微循環障礙，嚴重影響組織的血液循環及氧氣供應，造成不可逆轉的損傷。ICAM-1作為一種細胞膜表面的跨膜糖蛋白，在多種細胞，尤其在血管內皮細胞中的表達，對細胞內外間質間和細胞與細胞間的黏附運動起著重要的作用。當其高表達時，大量炎癥細胞如白細胞、中性粒細胞等會隨之趨附至病變部位，從而引起并加重炎癥反應。

圖1 大鼠術后3、6、12、24 h對照組(1A～1D)、ANP組(1E～1H)、治療組(1I～1l)肺組織ICAM-1蛋白表達(免疫組化， ×200)

丹參本身具有活血化瘀的功效，可顯著改善人體微循環狀態，消除炎癥反應，有助于保持超氧化物歧化酶的活性，另外可抑制血小板凝集，抑制器官缺血再灌注對人體的損害，使體內細胞維持相對穩定的狀態[[10]]。本研究結果顯示，接受丹參注射液腹腔注射的治療組大鼠血漿LFA-1水平、肺組織病理損傷及ICAM-1蛋白表達均較ANP組顯著下降，提示丹參注射液可抑制ANP大鼠體內炎癥因子的釋放，進而減輕ANP并發的肺損傷。

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[5] 楊學良,王廣義. 重癥急性胰腺炎肺損傷大鼠ICAM-1和LFA-1變化及丹參注射液的干預作用[J].中國老年學雜志，2010,30(8):1108-1110.DOI: 10.3969/j.issn.1005-9202.2010.08.038.

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(本文編輯：呂芳萍)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2016.05.012

030001 太原，山西醫科大學第二醫院麻醉科(徐文會)；山西省兒童醫院麻醉科(楊敏)

徐文會，Email: 80849969@qq.com

2014-03-22)