脂餐負荷前后ox-LDL和PON1變化及其與動脈粥樣硬化關系的研究

杜沙沙，靳春榮，李思進，陳 武，梁建芳

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脂餐負荷前后ox-LDL和PON1變化及其與動脈粥樣硬化關系的研究

杜沙沙1，靳春榮2，李思進2，陳 武2，梁建芳2

目的 探討動脈粥樣硬化進展中脂餐負荷對氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)和對氧磷酶1(PON1)的影響。方法 高脂飼養新西蘭雄兔12周，初始及第4周、8周、12周給予脂餐負荷，負荷前后采血測定血清ox-LDL、PON1水平；同期超聲觀察動脈硬化。結果 血清ox- LDL：空腹水平呈升高趨勢，4周、8周、12周較初始升高(P<0.05)，8周最高。負荷后，初始先升后降，2 h最高(P<0.05)，8 h最低；4周、8周先升后降，4周時2 h末升高顯著(P<0.05)，6 h最低，8周時2 h升高，8 h降低顯著(P<0.05)；12周先升后降(P>0.05)。血清PON 1：空腹水平呈顯著升高(12周最高，P<0.05)。負荷后，初始先升后降，4 h顯著升高(P<0.05)，8 h最低；4周、12周呈降低-升高-降低趨勢(6 h升高、8 h最低，P<0.05)；8周先升后降(P>0.05)。結論 動脈硬化進展過程中，機體始終處于氧化應激狀態，脂餐負荷可能使氧化抗氧化應激反應增強。

動脈粥樣硬化；脂餐負荷；氧化低密度脂蛋白；氧磷酶1

我國心血管病病人達2.9億，其患病率逐年上升。動脈粥樣硬化(AS)是心血管病發生的共同基礎，也是危害人類生命的首因。血脂紊亂是AS發生的獨立危險因素。目前多種假說闡述AS發生發展，具體機制尚不清楚。2015年提出“堅持百年膽固醇學說不動搖”。 氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)使低密度脂蛋白(LDL)構象改變，更易進入血管壁，從而促進AS進程，是常用氧化損傷標記物。Palavra等[1]發現ox-LDL可預測早期心血管病風險。近年來，氧磷酶(PON1)的抗氧化作用引起廣泛關注。本研究通過高脂喂養實驗動物兔，不同期給予脂餐負荷，分別測定負荷前后ox-LDL、PON1濃度，以研究其與AS的關系。

1 材料與方法

1.1 材料 健康新西蘭雄兔10只，體重2.4 kg～3.0 kg，太原市小店區科鑫畜牧養殖場提供，分籠飼養，不限飲水。膽固醇由北京索萊寶公司提供，兔ox-LDL、PON1試劑盒購于上海西唐生物科技公司。

1.2 方法

1.2.1 動物模型建立 所有實驗動物高脂(1%膽固醇，10%蛋黃，89%普通飼料)喂養12周，初始及第4周、8周、12周禁食水8 h后給予脂餐負荷(2%膽固醇，20%蛋黃，78%普通飼料)。

1.2.2 研究指標測定和超聲檢查 全部實驗動物在研究不同階段，分別于空腹及負荷后2 h、4 h、6 h、8 h經耳緣靜脈采血2 mL，離心(3 000 r/min，15 min)分離血清，-80 ℃保存。研究結束時，用ELISA試劑盒測定血清ox-LDL、PON1水平。靜脈采血同時應用超聲觀察腹主動脈硬化情況。

2 結 果

研究結束時，實驗動物經超聲觀察均出現了動脈硬化。動脈硬化進展中，空腹及脂餐負荷后ox-LDL和PON1變化情況詳見表1、表2。

表1 動脈硬化過程中空腹及脂餐負荷后ox-LDL變化(±s) mU/L

表2 動脈硬化過程中空腹及脂餐負荷后PON 1變化(±s) ng/mL

3 討 論

餐后高脂血癥是心血管事件的一個強有力危險因素，餐后脂質水平可誘導增強氧化應激，從而參與動脈粥樣硬化形成[2]。氧化應激參與AS發生發展的基本過程，餐后狀態增加機體氧化損傷的易感性。富含多不飽和脂肪酸的LDL極易被氧化修飾，形成ox-LDL，使LDL的生物活性發生改變，呈現明顯的劑量依賴性細胞毒性[3]、化學趨向性和免疫原性，參與AS發生發展的眾多過程。血清ox-LDL水平可反映機體脂質過氧化程度。Violi等[4]認為：在攝入不加10 g橄欖油的地中海飲食2 h后，血清ox-LDL水平顯著升高；攝入麥當勞餐者血清ox-LDL較基線水平顯著增加[5]。本研究中，動脈硬化不同階段ox-LDL水平升高，提示AS過程中氧化反應增加，負荷后2 h血清ox-LDL水平較高，與上述研究相似。

PON1是一種與高密度脂蛋白相關的酯酶，具有內酯酶、芳香酯酶活性。PON1可通過抑制LDL的氧化修飾及巨噬細胞向泡沫細胞的轉化，從而發揮抗動脈粥樣硬化的保護作用。冠心病病人血清PON1活性降低[6]，有學者建議將PON1作為心血管病的獨立危險因素，但仍需進一步研究證實。Kim等發現：血清PON1活性隨膳食中膽固醇的攝入量增加而升高[7]。本研究發現：動脈硬化進展過程中血清PON1水平逐漸升高，與上述研究結果相符。

膳食膽固醇的攝入可能影響apoA1，改變血清PON1的活性。高脂飲食初始給予脂餐負荷，血清PON1活性升高，可能與膽固醇攝入增加有關。Ayub 等[8]認為心肌梗死病人在癥狀出現2 h后血清PON1活性開始降低。本研究中，動脈硬化不同階段，脂餐負荷2 h后血清PON1活性下降，血清ox-LDL水平升高，與上述結果一致，提示脂餐負荷后機體氧化應激反應增強，且可能因為PON1抑制體內LDL的進一步氧化[9]而被消耗，PON1進一步降低；此后血清PON1開始升高，PON1芳香酯活性增加，這可能與餐后PON1內酯酶活性下降、PON1內酯酶和芳香酯活性轉變有關[10]，提示可選擇其他種類的PON1作為餐后狀態的標記。

此外，本研究發現：AS進展中空腹血清ox-LDL、PON1均呈增高趨勢，且脂餐負荷后ox-LDL升高，PON1下降，提示高脂飲食過程中，機體始終處于氧化應激狀態，脂餐負荷使氧化抗氧化反應加強。

關于動脈硬化進程中脂餐負荷對氧化應激標記物的影響和具體機制，本次研究受實驗動物數量及研究期限所限，尚需繼續深入研究。

[1] Palavra F，Marado D，Mascarenhas-Melo F，et al.New markers of early cardiovascular risk in multiple sclerosis patients：oxidized-LDL correlates with clinical saging[J].Dis Markers，2013，34(5)：341-348.

[2] Nakamura A，Monma Y，Kajitani S，et al.Effect of glycemic state on postprandial hyperlipidemia and hyperinsulinemia in patients with coronary artery disease[J].Heart Vessels，2015，31(9)：1446-1455.

[3] Saneipour M，Ghatreh-Samani K，Heydarian E，et al.Adiponectin inhibits oxidized low density lipoprotein-induced increase in matrix metalloproteinase 9 expression in vascular smooth muscle cells[J].ARYA Atheroscler，2015，11(3)：191-195.

[4] Violi F，Loffredo L，Pignatelli P，et al.Extra virgin olive oil use is associated with improved post-prandial blood glucose and LDL cholesterol in healthy subjects[J].Nutr Diabetes，2015，5：e172.

[5] Di Renzo L，Marsella LT，Carraro A，et al.Changes in LDL oxidative status and oxidative and inflammatory gene expression after red wine intake in healthy people：a randomized trial[J].Mediators Inflamm，2015(5)：317-348.

[6] Maturu VN，Gupta N，Singh G，et al.Serum paraoxonase (PON1) Activity in North-West Indian Punjabi’s with acute myocardial infarction[J].Indian J Clin Biochem，2013 ，28(3)：248-254.

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[8] Ayub A，Mackness M，Arrol S，et al.Serum paraoxonase after myocardial infarction [J].Arterioscler Thromb Vasc Biol，1999，19(1)：330-335.

[9] Rajkovic MG，Rumora L，Barisic K.The paraoxonase 1，2 and 3 in humans[J].Biochemia Medica，2011，21(2)：122-130.

[10] Kameyama N，Maruyama C，Kotani K，et al.Postprandial paraoxonase 1 activity following consumption of recommended amounts of mixed meals in healthy males[J].J Atheroscler Thromb，2016，23(2):225-232.

(本文編輯郭懷印)

山西省自然科學基金項目(No.2014011040-6)

1.山西醫科大學研究生(太原030001)；2.山西醫科大學第一醫院

靳春榮，E-mail：519349183@qq.com

R543.5 R256.2

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2016.19.012

1672-1349(2016)19-2246-02

2016-03-05)

引用信息：杜沙沙，靳春榮，李思進，等.脂餐負荷前后ox-LDL和PON1變化及其與動脈粥樣硬化關系的研究[J].中西醫結合心腦血管病雜志，2016，14(19)：2246-2247.