鉤吻的指紋圖譜

2016-11-18 11:46:30諶賽男王河山曾靖舒周也蒞雷仙武吳水生

福建中醫藥 2016年5期

諶賽男，王河山，曾靖舒，周也蒞，雷仙武，吳水生

（福建中醫藥大學藥學院，福建福州350122）

鉤吻的指紋圖譜

諶賽男，王河山，曾靖舒，周也蒞，雷仙武，吳水生

（福建中醫藥大學藥學院，福建福州350122）

鉤吻；指紋圖譜；高效液相色譜法

鉤吻Gelsemium elegans Benth.是馬錢科胡蔓藤屬植物，其主要化學成分為吲哚類生物堿［1］，目前多采用鉤吻素子和鉤吻素甲作為藥材的質量控制指標［2-3］，不能完全反映藥材中其它成分的情況。指紋圖譜是評價藥材質量的有效方法，我們對16批不同產地的鉤吻藥材進行考察，以建立鉤吻的HPLC指紋圖譜，為鉤吻的質量控制提供實驗依據。

1　儀器與試藥

1.1儀器Agilent Technologies 1260高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；Agilent Chem Station工作站、CPA225D型十萬分之一分析天平（德國Sartorius公司）；KQ-500E型臺式超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；DFY－500型中藥粉碎機（溫嶺市林大機械有限公司）；Milli－Q超純水儀（美國Millipore公司）。

1.2試藥鉤吻素子、胡蔓藤堿乙對照品（北京市賽百草科技有限公司）；甲醇、乙腈（德國Merck公司，色譜純）；甲酸（阿拉丁試劑上海有限公司，色譜純）；其它試劑為分析純。

1.3藥材16批鉤吻樣品產地信息見表1。經福建中醫藥大學藥學院范世明高級實驗師鑒定為馬錢科胡蔓藤植物鉤吻Gelsemium elegans Benth.的干燥根莖。不同產地鉤吻曬干，粉碎，過40目篩，備用。

表1　鉤吻樣品產地

2　方法與結果

2.1色譜條件色譜柱：Agilent ZORBAX Bonus-RP Analytical柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相：甲醇（A）-0.1%甲酸水（B），按表2進行梯度洗脫；檢測波長：254 nm；柱溫：30℃；進樣量：10μL。

表2　梯度洗脫條件%

2.2對照品溶液制備稱取鉤吻素子對照品11.60 mg、胡蔓藤堿乙10.10 mg，分別置于50 mL瓶中，用50%甲醇稀釋到刻度，搖勻，得到232、202μg／mL的混合對照品貯備液。吸取混合對照品貯備液200 μL至5 mL瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，得到濃度為9.28、8.08μg／mL的鉤吻素子、胡蔓藤堿乙的混合對照品溶液。

2.3供試品溶液制備稱取鉤吻粉末0.2 g，過40目篩，置具塞錐形瓶中，加50%甲醇水（含0.1%甲酸）25 mL，密塞，稱定重量，超聲提取30 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇水（含0.1%甲酸）補足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液，0.45μm濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.4方法學考察

2.4.1精密度試驗取同一批次鉤吻樣品（S16），按2.1項色譜條件連續重復進樣5次檢測，以胡蔓藤堿乙（11號峰）為基準峰計算各共有色譜峰相對保留時間RSD＜0.18%，相對峰面積RSD＜2.54%，表明儀器精密度良好。

2.4.2重復性試驗取產地S16鉤吻樣品6份，按2.3項方法制備供試品溶液，以11號峰為基準峰計算各共有色譜峰相對保留時間RSD＜0.13%，相對峰面積RSD＜3.11%，表明方法重復性良好。

2.4.3穩定性試驗取同一供試品溶液（S16）于0、2、4、8、10、12、24 h進樣測定，以11號峰為基準峰計算共有色譜峰相對保留時間RSD＜0.21%，相對峰面積RSD＜3.15%，表明供試液在24 h內穩定。2.5指紋圖譜的建立根據2.1項色譜條件，對16批鉤吻樣品進行檢測，將測定數據導入中國藥典委員會推薦使用的中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件（2004A），設定S16色譜圖為參照圖譜，利用中位數法，時間窗寬度設置0.2，多點校正后進行峰自動匹配，計算生成對照譜圖，生成的對照圖譜和峰自動匹配后的HPLC指紋圖譜見圖1。

比較各樣品色譜圖，標定了17個共有峰，以11號峰為基準峰，計算各樣品共有峰的相對保留時間和相對峰面積，結果見表2、表3。共有峰面積占所有峰面積的百分比為75.43%～89.77%。16批樣品相似度計算結果見表4。