澤瀉不同提取部位對大鼠的利尿作用

黃小強，張雪，李小艷，趙萬里，許文，吳水生

（1．福建中醫藥大學藥學院，福建福州350122；2.中國藥科大學中藥學院，江蘇南京210009）

澤瀉不同提取部位對大鼠的利尿作用

黃小強1，張雪1，李小艷1，趙萬里2，許文1，吳水生1

（1．福建中醫藥大學藥學院，福建福州350122；2.中國藥科大學中藥學院，江蘇南京210009）

目的研究澤瀉不同提取部位對大鼠的利尿作用。方法用代謝籠法比較澤瀉不同提取部位對水負荷大鼠在0～6 h排尿量，用HPLC測定澤瀉各提取部位中的化學成分。結果澤瀉水提取部位、石油醚提取部位給藥2 h具有利尿作用，乙酸乙酯提取部位、正丁醇提取部位給藥后6 h有顯著的利尿作用，澤瀉三萜類化合物主要集中在乙酸乙酯提取部位。結論澤瀉乙酸乙酯提取部位是澤瀉利尿的主要部位，澤瀉三萜類化合物是其利尿的主要化學成分。

澤瀉；利尿；不同提取部位；三萜類化合物

澤瀉為澤瀉科植物澤瀉Alisma orientale（Sam.）Juzep.的干燥塊莖［1］，具有利水滲濕、泄熱、化濁降脂的功效。文獻報道澤瀉醇提物具有利尿和抗利尿的功效［2］，但澤瀉中起利尿作用的有效部位及主要化學成分尚不清楚。我們用大鼠水負荷模型，對澤瀉不同提取部位利尿的功能進行藥理學考察，用HPLC分析澤瀉利尿的主要化學成分。

1　儀器與試藥

1.1儀器LC-20AT高相液相色譜儀、LC solution工作站（日本島津公司）；RE-2000旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）；BS-3000A系列電子天平（上海友聲衡器有限公司）；YP202N分析天平（上海精密科學儀器有限公司）；HC-9885電解質分析儀（深圳市航創醫療設備有限公司）。

1.2材料澤瀉（福建金山醫藥集團）；氫氯噻嗪（山西云鵬制藥有限公司，批號：A120804）；吐溫-80（天津市福晨化學試劑廠，批號：20120320）；乙腈（德國Merck公司，色譜純）；水為超純水，其它試劑為分析級。

1.3動物SPF雄性SD大鼠110只，體質量180～220 g，由上海斯萊克公司提供，合格證號：SCXK（滬）2012-0002。

2　方法與結果

2.1色譜條件色譜柱：UItimate XB-C18（4.6 mm ×150 mm，5μm）；流動相：水-乙腈（35∶65）；流速：1mL／min；檢測波長：208 nm、254 nm；柱溫：30℃；進樣量：10μL。

2.2氫氯噻嗪藥液制備取氫氯噻嗪2 500 mg研成細粉，用2%吐溫-80配制成濃度為0.5 mg／mL藥液，備用。

2.3澤瀉水溶性部位的制備取澤瀉粉末70 g，過60目，6倍量水回流提取3次，合并提取液，減壓濃縮制成50 mg／mL。

2.4澤瀉脂溶性部位的制備取澤瀉粉末70 g，過60目，依次用6倍量石油醚、乙酸乙酯、正丁醇超聲提取3次，每次0.5 h。將石油醚提取液、乙酸乙酯提取液、正丁醇提取液進行抽濾，減壓濃縮至溶劑被完全回收。將所得浸膏分別用2%吐溫-80制成100 mg／mL溶液，即得石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。取各提取物液1 m L，過0.45μm膜，取濾液，按2.1項色譜條件進行分析，結果見圖1。

2.5澤瀉乙酸乙酯提取物制備取澤瀉生品粉末400 g，過60目，放入2 L三角瓶中，加入6倍量乙酸乙酯，超聲提取3次，每次1 h。過濾，過濾液減壓、濃縮至干燥，得澤瀉浸膏20.96 g（浸膏總三萜量＞80%）。取澤瀉浸膏10 g，用2%吐溫-80配制成濃度100 mg／mL的灌胃液，備用。

2.6利尿實驗

2.6.1澤瀉不同部位利尿活性篩選SD大鼠適應性喂養1周，實驗前禁食12 h，每只大鼠按20 mL／kg灌服生理鹽水，收集2 h尿液，選用尿量達灌服量40%以上水負荷者為合格動物。篩選出水負荷尿量合格的48只大鼠，隨機分為正常對照組、水提物部位組（100mg／mL）、石油醚部位組（100mg／mL）、乙酸乙酯部位組（100 mg／mL）、正丁醇部位組（100 mg／mL）和氫氯噻嗪組（0.5 mg／mL），每組8只，模型篩選30 min后按20 mL／kg體質量灌胃相應劑量藥物溶液，立即放入代謝籠內，每籠1只。每小時收集尿液1次，連續收集6 h。記錄每小時5組每只大鼠的尿量，計算5組6 h總排尿量，結果見表1。

2.6.2澤瀉三萜類利尿活性研究篩選出水負荷尿量合格的40只大鼠，隨機分為正常對照組、氫氯噻嗪組、澤瀉乙酸乙酯提取部位低、中、高劑量組，每組8只。5組動物禁食12 h，不禁水，按20 mL／kg給予生理鹽水，造成鹽水負荷模型。擠壓膀胱排盡余尿，按20 m L／kg灌胃相應的藥液，澤瀉乙酸乙酯提取部位中劑量組等效于臨床成年人每次用量，低劑量為中劑量0.5倍，高劑量為中劑量2倍，正常對照組給予等量的2%吐溫-80。給藥后，將大鼠置于代謝籠內，收集0～3、3～6、0～6 h的尿量，檢測0～6 h大鼠尿液的Na+、K+、Cl－含量，結果見表2。

2.7統計學處理計量資料用x±s表示，用SPSS 18.0軟件對數據進行分析，組間比較用單因素方差分析，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2.8結果見圖1、圖2，表1、表2。

表1　澤瀉4種不同提取部位對水負荷大鼠的排尿影響（x±s）

表2　澤瀉乙酸乙酯提取物對水負荷大鼠的排尿影響（x±s）

3　討論

3.1中藥澤瀉具有利尿作用，廣泛用于治療各種水腫。利尿有2個方面因素，即增加尿量和電解質缺失［3］。陽性藥氫氯噻嗪可以明顯增加尿量，通過抑制Na+／K+／Cl－轉運子增加尿Na+排出。給予水負荷大鼠模型澤瀉不同提取部位發現，乙酸乙酯部位和正丁醇部位利尿作用最明顯。趙宇輝等［4］研究報道24-乙酰澤瀉醇A和澤瀉醇B是澤瀉利尿作用的主要成分。我們通過HPLC對澤瀉不同提取部位進行化學分析，發現三萜類化合物主要集中于乙酸乙酯部位。因此，初步判斷澤瀉中起利尿作用的是三萜類化合物。實驗提示澤瀉水提物可增加水負荷大鼠尿量，HPLC比較發現水提物中幾乎不含有任何脂溶性成分，說明水提物的利尿作用幾乎與澤瀉萜類化合物無關。澤瀉電解質分析，澤瀉的K+含量較高［5］，這是澤瀉利尿的主要成分之一。

3.2通過給予不同劑量的澤瀉乙酸乙酯提取部位發現，澤瀉乙酸乙酯提取部位低、中劑量組大鼠在0～3 h、0～6 h的尿量與正常對照組比較顯著增加（P＜0.01），澤瀉乙酸乙酯提取部位高劑量組大鼠在各個時間點的尿量均未見統計學差異（P＞0.05）。這與文獻報道的澤瀉利尿具有雙向調節功能相符。澤瀉乙酸乙酯提取部位在利尿的同時，還增加電解質Na+的排出，減少K+的排出，使尿液中的Na+／K+比值升高，表明澤瀉乙酸乙酯提取部位是Na+排利尿，其機制是抑制了腎遠曲小管和集合管Na+-K+交換，產生了類似于低效利尿藥螺內酯的保鉀排鈉作用。

實驗結果表明澤瀉乙酸乙酯部位是澤瀉發揮利尿藥效的部位，通過HPLC分析發現其主要化學成分為三萜類化合物。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2015：229.

［2］FENG Y L，CHEN H，TIAN T，et al.Diuretic and anti-diuretic activities of the ethanol and aqueous extracts of Alismatis rhizome［J］.Journal of Ethnopharmacology，2014，154：386-390.

［3］楊靜，趙慧英，陸永新，等.17β-雌二醇對去卵巢大鼠子宮Bax和Bcl-2表達的影響［J］.西北農業學報，2008，17（4）：42-46.

［4］趙宇輝，唐丹丹，陳丹倩，等.利尿藥茯苓、茯苓皮、豬苓和澤瀉的化學成分及其利尿作用機制研究進展［J］.中國藥理學與毒理學雜志，2014，28（4）：594-599.

［5］吳啟南.中藥澤瀉微量元素的研究［J］.世界元素醫學，2003，10（2）：48-49.

R284.2

B

1000-338X（2016）05-0021-03

2016-07-14

國家自然科學基金資助課題（U1205022）

黃小強（1988—），男，2014級中藥學碩士研究生，主要從事中藥藥效物質基礎及作用機制研究。

吳水生（1965—），男，教授。E－mail：wushuishengwss@163. com