臨床常見分離菌對不同配比頭孢哌酮/舒巴坦的藥敏差異

趙 越，張莉滟，陳 蓮，葉倩君

(1 廣東省醫學科學院 廣東省人民醫院，廣東 廣州 510080； 2 廣州中醫藥大學附屬骨傷科醫院，廣東 廣州 510240； 3 廣州醫科大學金域檢驗學院，廣東 廣州 510182)

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·論著·

臨床常見分離菌對不同配比頭孢哌酮/舒巴坦的藥敏差異

趙 越1，張莉滟1，陳 蓮2，葉倩君3

(1 廣東省醫學科學院 廣東省人民醫院，廣東 廣州 510080； 2 廣州中醫藥大學附屬骨傷科醫院，廣東 廣州 510240； 3 廣州醫科大學金域檢驗學院，廣東 廣州 510182)

目的 了解臨床常見病原菌對不同配比頭孢哌酮/舒巴坦藥敏紙片的耐藥性，為臨床合理選擇頭孢哌酮/舒巴坦提供依據。方法 收集某院2014年上半年臨床分離病原菌1 141株，采用紙片擴散法檢測不同病原菌對頭孢哌酮/舒巴坦兩種藥敏紙片(70/35 μg與75/75 μg)的抗菌活性。結果 1 141株病原菌中腸桿菌科細菌675株(59.16%)，非發酵菌447株(39.18%)，其他革蘭陰性桿菌19株(1.66%)。對頭孢哌酮/舒巴坦兩種藥敏紙片(70/35 μg、75/75 μg)的耐藥率：超廣譜β-內酰胺酶(ESBLs)陽性大腸埃希菌(eco，221株)分別為7.69%、2.26%,肺炎克雷伯菌(kpn，92株)分別為10.87%、3.26%；亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌(IRAB 295株)分別為54.92%、11.19%；兩種藥敏紙片抗菌活性比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。ESBLs陰性腸桿菌科細菌(eco，135株；kpn，98株)、亞胺培南敏感鮑曼不動桿菌(51株)、銅綠假單胞菌(48株)、嗜麥芽窄食單胞菌(22株)對兩種頭孢哌酮/舒巴坦藥敏紙片的耐藥率比較，差異均無統計學意義(均P>0.05)。結論 ESBLs陽性腸桿菌科細菌與IRAB對不同配比頭孢哌酮/舒巴坦藥敏紙片的抗菌活性具有差異，臨床治療此類細菌引起的感染時要充分考慮頭孢哌酮/舒巴坦的劑型，以達到預期治療效果。

頭孢哌酮/舒巴坦； 超廣譜β-內酰胺酶； ESBLs； 腸桿菌科細菌； 亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌； 紙片擴散法； 耐藥性； 抗藥性，微生物； 合理用藥

[Chin J Infect Control，2016，15(10)：744-747]

現代臨床醫療中隨著抗菌藥物的大量應用，超廣譜β-內酰胺酶(ESBLs)陽性大腸埃希菌(eco)與肺炎克雷伯菌(kpn)、產碳青霉烯酶腸桿菌科細菌、多重耐藥銅綠假單胞菌、泛耐藥鮑曼不動桿菌等日趨增多，及時有效控制并治愈其引起的感染刻不容緩[1-2]。頭孢哌酮/舒巴坦(cefoperazone/sulbactam，SCF)是第三代頭孢菌素頭孢哌酮與酶抑制劑舒巴坦的復合制劑，兩者合用可出現協同效應，臨床注射藥頭孢哌酮/舒巴坦主要有兩種配比[3]，近年來已被廣泛應用于對β-內酰胺類抗生素耐藥的病原菌，尤其是針對革蘭陰性菌所引起的中重度感染患者的治療[4]。藥敏試驗中頭孢哌酮/舒巴坦有70/35 μg與75/75 μg兩種藥敏紙片，本文旨在研究臨床常見病原菌對兩種頭孢哌酮/舒巴坦藥敏紙片的耐藥性，為臨床針對性選擇不同劑型提供依據。

1 材料與方法

1.1 菌株來源 收集本院2014年上半年不同標本分離革蘭陰性桿菌共1 141株(已剔除重復菌株)，其中腸桿菌科細菌675株，以eco (356株)和kpn (190株)為主；非發酵菌447株，以鮑曼不動桿菌(aba，346株)、銅綠假單胞菌(pae，48株)為主；其他革蘭陰性桿菌19株。

1.2 試劑與儀器 M-H瓊脂培養基購自廣州市迪景微生物科技有限公司，頭孢哌酮/舒巴坦 70/35 μg與75/75 μg藥敏紙片均為OXOID公司產品。本研究所用菌株均采用法國生物梅里埃VITEK 2 Compact全自動微生物鑒定儀與其配套試劑鑒定。

1.3 質控菌株 大腸埃希菌ATCC 25922和陰溝腸桿菌ATCC 700323由法國生物梅里埃公司提供。

1.4 菌株復活與藥敏試驗 菌株用哥倫比亞血瓊脂培養基進行復蘇并傳代，藥敏試驗依據美國臨床實驗室標準化協會(CLSI)需氧菌紙片擴散藥敏法(M02-A11)標準[5]進行，同一菌株分別貼兩種頭孢哌酮/舒巴坦紙片,置于35 °C，5%CO2培養箱中培養18～24 h，檢測菌株抑菌環直徑大小并記錄。藥敏折點值參照食品藥品監督管理局(FDA)批準的頭孢哌酮折點值：≤15 mm為耐藥，16～20 mm為中介，≥21 mm為敏感。ESBLs通過VITEK 2 AST-GN13卡中的ESBLs反應孔檢測，該反應孔中含有藥物濃度分別為頭孢吡肟1 μg/mL，頭孢噻肟0.5 μg/mL，頭孢他啶0.5 μg/mL，頭孢吡肟/克拉維酸1/10 μg/mL，頭孢噻肟/克拉維酸0.5/4 μg/mL，頭孢他啶/克拉維酸0.5/4 μg/mL，確證試驗根據CLSI的紙片擴散法進行[6]。

1.5 數據分析 應用WHONET 5.6軟件與SPSS 17.0統計軟件對數據進行分析，采用χ2檢驗進行分析，P≤0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 ESBLs陽性腸桿菌科細菌藥敏結果 ESBLs陽性腸桿菌科細菌(其中eco 221株，kpn 92株)對頭孢哌酮/舒巴坦兩種藥敏紙片的耐藥率：70/35 μg、75/75 μg分別為8.63%、2.55%，兩種藥敏紙片的抗菌活性比較，差異有統計學意義(P<0.05)。對70/35 μg和75/75 μg藥敏紙片的耐藥率：ESBLs陽性eco、kpn分別為7.69% VS 2.26%,10.87% VS 3.26%，兩種藥敏紙片的抗菌活性比較，差異均有統計學意義(均P<0.05)。見表1。

2.2 ESBLs陰性腸桿菌科細菌藥敏結果 ESBLs陰性腸桿菌科細菌(其中eco 135株，kpn 98株)對頭孢哌酮/舒巴坦兩種藥敏紙片的耐藥率：70/35 μg和75/75 μg分別為9.44%與8.58%，抗菌活性差異無統計學意義(P>0.05)。ESBLs陰性eco對70/35 μg和75/75 μg藥敏紙片的耐藥率分別為2.22%、2.22%，ESBLs陰性kpn的耐藥率分別為19.39%、17.35%，兩種菌對不同配比藥敏紙片的耐藥率比較，差異均無統計學意義(均P>0.05)。見表1。

2.3 非發酵細菌 447株非發酵細菌中，亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌(IRAB)295株，亞胺培南敏感鮑曼不動桿菌(ISAB)51株，銅綠假單胞菌(pae)48株，嗜麥芽窄食單胞菌(pma)22株。IRAB對頭孢哌酮/舒巴坦70/35 μg紙片和75/75 μg紙片的耐藥率分別為54.92%和11.19%，兩種不同配比頭孢哌酮/舒巴坦的抗菌活性差異有統計學意義(P<0.05)。ISAB、pae、pma對兩種不同配比頭孢哌酮/舒巴坦的抗菌活性差異無統計學意義(均P>0.05)。見表1。

表1 常見臨床分離菌對不同配比頭孢哌酮/舒巴坦紙片的藥敏檢測結果(%，株)

Table 1 Susceptibility testing result of different ratios of cefoperazone/sulbactam to clinically isolated pathogens(%, No. of isolates)

病原菌頭孢哌酮/舒巴坦(70/35μg)RIS頭孢哌酮/舒巴坦(75/75μg)RISχ2#P#χ2*P*腸桿菌科細菌 ESBLs陽性8.63(27)20.12(63)71.25(223)2.55(8)8.63(27)88.82(278)14.000.0030.240.00 eco7.69(17)13.12(29)79.19(175)2.26(5)5.88(13)91.86(203)7.990.0114.320.00 kpn10.87(10)36.96(34)52.17(48)3.26(3)15.22(14)81.52(75)6.90.0117.880.00 ESBLs陰性9.44(22)3.43(8)87.13(203)8.58(20)1.29(3)90.13(210)0.160.691.040.31 eco2.22(3)3.70(5)94.08(127)2.22(3)0(0)97.78(132)0.001.002.370.12 kpn19.39(19)3.06(3)77.55(76)17.35(17)3.06(3)79.59(78)0.140.710.120.73非發酵細菌 IRAB54.92(162)42.71(126)2.37(7)11.19(33)52.88(156)35.93(106)170.770.00107.280.00 ISAB1.96(1)7.84(4)90.20(46)0(0)1.96(1)98.04(50)-0.49a1.590.21 pae16.67(8)6.25(3)77.08(37)12.50(6)6.25(3)81.25(39)0.340.560.250.62 pma54.55(12)27.27(6)18.18(4)54.55(12)27.27(6)18.18(4)0.001.000.001.00

#：不計中介株，僅對耐藥株與敏感株進行分析；*：將中介株與耐藥株歸為非敏感株，對非敏感株與敏感株進行統計分析；a :采用Fisher 精確概率法

3 討論

近年來，隨著抗菌藥物的大量使用，細菌耐藥率逐年升高，因此產酶抑制劑在感染性疾病的治療過程中被廣泛應用，尤其是頭孢哌酮/舒巴坦在臨床治療革蘭陰性菌所引起的中重度感染時備受青睞。目前，實驗室對頭孢哌酮/舒巴坦進行體外藥敏試驗時通常采用105(70/35 μg)與150(75/75 μg)兩種藥敏紙片，后者含有舒巴坦劑量為前者的2.14倍。采用K-B法對病原菌進行體外藥敏試驗，不同病原菌對兩種不同配比抗菌藥物的耐藥性是否存在差異，鮮有文獻報道。

本研究中ESBLs陽性腸桿菌科細菌(eco、kpn)和IRAB對頭孢哌酮/舒巴坦兩種藥敏紙片的耐藥率比較，差異有統計學意義，可能因為舒巴坦與β-內酰胺酶形成不可逆結合，從而強效抑制β-內酰胺酶,這種保護作用使頭孢哌酮的β-內酰胺環逃逸β-內酰胺酶分解,從而產生強大的抗菌活性[7]；其還可與青霉素結合蛋白(PBP)結合，避免由PBP與抗菌藥物親和力下降引起的耐藥[4]。舒巴坦對不動桿菌屬細菌具有抗菌作用，故頭孢哌酮/舒巴坦對鮑曼不動桿菌擁有良好的抗菌活性和直接殺滅作用，所以需要選用含有足夠劑量舒巴坦的復合制劑治療鮑曼不動桿菌引發的感染[8-9]。對于一般感染，國內舒巴坦應用劑量≤4 g/d，而國外對于治療多重耐藥不動桿菌屬細菌的劑量可達6～8 g/d[10-11]。 舒巴坦對產不同類型酶的鮑曼不動桿菌(如廣泛耐藥與非廣泛耐藥鮑曼不動桿菌)效果不同，ESBLs亦存在不同的基因型，因此兩種配比頭孢哌酮/舒巴坦對不同ESBLs基因型菌株的抗菌活性是否存有差異還需進一步研究[12]。

本研究中ESBLs陰性腸桿菌科細菌、亞胺培南敏感鮑曼不動桿菌、銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌等其他病原菌對頭孢哌酮/舒巴坦兩種藥敏紙片的抗菌活性差異無統計學意義，說明兩種配比頭孢哌酮/舒巴坦紙片對不同類別細菌的抗菌活性不同，臨床要區別對待不同種屬細菌感染，合理選擇抗菌藥物。ESBLs陽性腸桿菌科細菌和多重耐藥鮑曼不動桿菌實驗室有必要選用不同配比頭孢哌酮/舒巴坦進行藥敏試驗，其他菌株需與臨床進行溝通后再決定。

綜上所述，在檢測ESBLs陽性eco和kpn、多重耐藥鮑曼不動桿菌等耐藥菌對頭孢哌酮/舒巴坦的耐藥性時，應當在藥敏檢測報告中加注所選用頭孢哌酮/舒巴坦配比情況，正確指導臨床用藥，達到預期治療效果，遏制耐藥菌的廣泛播散。

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(本文編輯：豆清婭)

Difference in antimicrobial susceptibility of common clinical pathogens to different ratios of cefoperazone / sulbactam antimicrobial disks

ZHAOYue1,ZHANGLi-yan1,CHENLian2,YEQian-jun3

(1GuangdongAcademyofMedicalSciences/GuangdongGeneralHospital,Guangzhou510080,China; 2AffiliatedOrthopedicHospitalofGuangzhouUniversityofChineseMedicine,Guangzhou510240,China; 3KingMedDiagnosticsInstituteofGuangzhouMedicalUniversity,Guangzhou510182,China)

Objective To understand the antimicrobial resistance of common clinical pathogens to antimicrobial disks containing different ratios of cefoperazone/sulbactam, so as to provide basis for rational application of cefoperazone /sulbactam in clinic. Methods 1 141 pathogens isolated from clinical specimens in a hospital in the first half year of 2014 were collected, disk diffusion method was adopted to detect antimicrobial activity of two kinds of cefoperazone/sulbactam disks (70/35 μg and 75/75 μg).Results Of 1 141 pathogenic strains, 675 (59.16%)were Enterobacteriaceae, 447 (39.18%) were non-fermentative bacteria, and 19 (1.66%) were other gram-negative bacilli. Resistance rates of pathogens to 70/35μg and 75/75 μg cefoperazone /sulbactam antimicrobial disks were as follows: extended-spectrum β-lactamases(ESBLs)-producingEscherichiacoli(n=221) were 7.69% and 2.26% respectively, ESBLs-producingKlebsiellapneumoniae(n=92) 10.87% and 3.26% respectively, imipenem-resistantAcinetobacterbaumannii(IRAB,n=295)54.92% and 11.19%respectively；there were significant differences in antimicrobial activity between two ratios of antimicrobial disks(P<0.05). While antimicrobial resistance rates of ESBLs-negativeEnterobacteriaceae(Escherichiacoli,n=135;Klebsiellapneumoniae,n=98), imipenem-sensitiveAcinetobacterbaumannii(ISAB,n=51),Pseudomonasaeruginosa(n=48 ), andStenotrophomonasmaltophilia(n=22) were not significantly different (allP>0.05). Conclusion Antimicrobial activity of two different ratios of cefoperazone/sulbactam antimicrobial disks to ESBLs-producing Enterobacteriaceae and IRAB is different, attention should be paid to ratios of cefoperazone/sulbactam during the treatment , so as to achieve the desired therapeutic effect.

cefoperazone/sulbactam; extended-spectrum β-lactamase; ESBLs； Enterobacteriaceae; imipenem-resistantAcinetobacterbaumannii; disk diffusion method; drug resistance; drug resistance, microbial; rational antimicrobial use

2015-12-24

趙越(1987-)，男(漢族)，黑龍江省牡丹江市人，檢驗師，主要從事臨床微生物檢驗研究。

張莉滟 E-mail:zlycml@126.com

10.3969/j.issn.1671-9638.2016.10.006

R181.3+2

A

1671-9638(2016)10-0744-04