葛根虎杖丸的提取工藝研究

王瑛蘭 劉元昆 崔翠翠

（威海市中醫院，山東 威海264200）

葛根虎杖丸的提取工藝研究

王瑛蘭 劉元昆 崔翠翠

（威海市中醫院，山東 威海264200）

目的：篩選葛根虎杖丸的最佳提取工藝。方法：以提取次數、時間、加水量為考察因素，以葛根素、出膏率含量為指標，采用正交設計L9（34），優選葛根虎杖丸的最佳提取工藝條件。結果：最佳提取工藝為：藥材加10倍量水，煎煮提取2次，每次1.5小時。結論：優選出的提取工藝合理可行，為實際生產及其質量控制提供了依據。

葛根虎杖丸；提取工藝；出膏率；葛根素；正交設計

葛根虎杖丸為我院自制制劑，處方由葛根、虎杖、茵陳、黨參、白術、丹參、砂仁、豆蔻等十二味中藥組成，功能主治解酒毒，化瘀滯，健脾助運，降酶護肝。適用于酒毒瘀滯的酒精性肝病，癥見倦怠乏力，脅脹不舒，脘脹便滯等酒精引起的肝功能損害（主要表現丙氨酸氨基轉移酶、天冬氨酸氨基轉移酶和γ-谷氨酰轉肽酶的異常升高）。原臨床用藥的制備主要是粉劑入藥，針對個體患者，制劑規模小，制備方法不規范、不統一。為保證生產工藝的科學性，對提取工藝條件進行正交試驗設計，優選出最佳提取工藝，為臨床提供更有效的藥品。

本方來源于嚴用和的“葛花解酲湯”，在此基礎上進行了大量的臨床研究，確定了本方劑。其中葛根解酒之毒，虎杖、茵陳清濕熱、降酶護肝，三者解毒降酶以恢復肝功能，共為君藥。因此本試驗將葛根素確定為考察指標，根據提取工藝將其與出膏率作為共同的考察指標。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀（DAD二極管陣列檢測器，四元泵），CP 214型電子分析天平（奧豪斯儀器上海有限公司）。

葛根素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110752-200912）；甲醇（色譜純，美國 Tedia公司）；其余試劑均為分析純。

試驗所用藥材均購于山東菏澤泰山中藥飲片有限公司，符合2015年版《中國藥典》（一部）有關規定。所用樣品均為威海市中醫院制劑室生產。

2 方法與結果

2.1 試驗設計

根據預試驗結果，確定以出膏率、葛根素含量為考察指標。以加水量、提取時間、提取次數作為考察因素進行水平試驗［1］。每個因素3個水平，見表1。

表1 因素與水平表

2.2 出膏率的測定

取處方量的1/10，共計21 g，分別取9份，按照正交試驗L9（34）進行提取，濾過，合并濾液并濃縮至100 mL。再取上述9份濃縮液各25 mL，濃縮，干燥，精密稱定，計算出膏率。

出膏率=（干膏質量×4/原藥材質量）×100%。

2.3 葛根素的含量測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Agilent 1100型高效液相色譜儀（DAD二極管陣列檢測器，四元泵）；流動相：甲醇-水（25∶75），檢測波長 250 nm；柱溫30℃；流速：1 mL/min。

2.3.2 供試品溶液制備 取正交試驗提取的藥液樣品各1 mL，用甲醇稀釋溶解至5 mL，0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.3.3 對照品溶液制備 參照2015年版《中國藥典》方法［2］取葛根素對照品適量，精密稱定，加 30%乙醇制成每l mL含6.026 4 mg的溶液，即得。

2.3.4 陰性對照樣品溶液制備 取除葛根外其他藥材處方量的1/10，共計17 g，加8倍量水煎煮2次，每次煎煮 1 h，濾過，合并濾液，作為陰性對照溶液。見圖1。

圖1 葛根素HPLC圖

2.3.5 專屬性試驗［3］

2.3.5.1 標準曲線的繪制 取葛根素對照品溶液分別用30%的乙醇稀釋，分別進樣10 μL，以進樣濃度X與峰面積Y進行線性回歸處理，在0.188 3～ 6.026 4 mg/mL范圍內，葛根素進樣量與峰面積呈良好的線性關系，回歸方程為：

Y=298.14X+0.041 74，

r=0.999 9，見圖2。

圖2 葛根素標準曲線

2.3.5.2 精密度試驗 精密吸取“2.3.3”項下葛根素對照品溶液 10 μL，按“2.3.1”項下色譜條件，測定葛根素峰面積值，重復進樣測定6次，計算得對照品峰面積值RSD為0.63%，表明測定方法的精密度良好。

2.3.5.3 穩定性試驗 按“2.3.1”項下色譜條件，分別在 0，1，3，5，7，9，12，24 h，精密吸取照“2.3.2”項下制備的供試品溶液 10 μL，測定供試品溶液中葛根素峰面積值，計算供試品葛根素峰面積值的RSD為0.92%，表明供試品溶液在24 h內基本穩定。

2.3.5.4 重復性試驗 取本品適量，研細，按“2.3.2”項下制成6份供試品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件測定，RSD為1.42%，表明方法重現性良好。

2.3.5.5 加樣回收率試驗 精密稱定本品6份，每份約1 g，分別精密加入葛根素對照品溶液（濃度為0.188 3 mg/mL）10 mL，精密稱定質量，照“2.3.2”項下制備供試品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件測定，計算加樣回收率。結果見表3。樣品中葛根素平均回收率為98.00%，RSD為1.13%（n=6），表明葛根素加樣回收良好。

2.4 結果與分析

依據出膏率和葛根素的含量的權重比（1∶1）計算綜合評分，有關試驗數據及其計算分析結果見表4～5。

表3 葛根素加樣回收率

表4 葛根虎杖丸正交試驗設計與結果

表5 結果的方差分析

綜合評分 = （葛根素含量/最大葛根素含量）×50+ （出膏率/最大出膏率）×50。

最佳工藝的確定：由方差分析表可以看出，本實驗中，因素 A（加水量）、C（提取時間）對出膏率、葛根素的影響比較顯著，且A＞C，因素B（提取次數）的影響不顯著。通過極差大小分析，可以得出結論，影響水提取效果的順序為A＞C＞B，以加水量影響為最大。綜合直觀分析及生產實際，確定水提取最佳工藝為 A3B2C3，即加10倍量水，提取2次，每次1.5小時。

2.5 驗證試驗

根據上述確定的工藝參數，分別測定葛根素含量、出膏率，計算結果見表6。

表6 三批樣品的測定結果

3 討論

3.1 本次試驗前期對該處方中葛根素含量、出膏率進行醇提考察［4-5］，結合生產成本、臨床應用等實際需要，選擇水作為該制劑提取溶劑。本次試驗中，以提取次數、加水量和提取時間為考察因素，以出膏率、葛根素的含量作為指標，采用正交試驗L9（34）設計法，優選葛根素的提取工藝，結果其最佳工藝為加10倍量水，煎煮提取2次，每次1.5小時。加水量是影響煎出液質量的主要因素。驗證試驗說明優選的工藝條件穩定可行。

3.2 本次試驗后，又對葛根虎杖丸的相對密度、粉碎細度、濕丸干燥溫度、濕丸干燥時間長短等方面進行了相關方面的考察，結果表明采用本生產工藝進行生產，工藝簡單、科學、合理，可以有效地提高生產效率，降低生產成本，并且生產出來的產品完全符合葛根虎杖丸質量標準（草案）的要求，說明本工藝切實可行。

［1］劉起華，文謹，王菲，等.葛參丸提取和干燥工藝研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2010，16（10）：19-21.

［2］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2015年版）一部 ［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2015：333.

［3］賴杰仁.HPLC測定葛根溫膽顆粒中葛根素的含量［J］.中國執業藥師，2015，12（7）：17-18.

［4］ 張庭，吳麗華，肖丹，等.不同提取方法對葛根中葛根素提取率的影響［J］.云南中醫中藥雜志，2013，34（5）：62-63.

［5］ 張彤，徐蓮英，陶建生，等.多指標綜合評分法優選葛根提取工藝［J］.中草藥，2004，35（1）：38-40.

Optimization of Extraction Process of Gegen Huzhang Granules

Wang Yinglan，Liu Yuankun，Cui Cuicui（Weihai TCM Hospital，Shandong Weihai 264200，China）

Objective：To optimize the extraction process of gegen huzhang granules.Methods：Serving the extracting rate and puerarin content as indexes，while the times and time duration for extraction as well as water volume as factors，the extraction process was optimized by orthogonal experiment L9（34）.Results：The optimal extraction process was as follows：the drug materials were added with 10 volumes of water and extracted for 2 times，1.5 h for each.Conclusion：The optimized extraction process is reasonable and feasible，which provides a basis for the actual production and quality control.

Gegen Huzhang Granules；Extraction Process；Extraction Rate；Puerarin；Orthogonal Experiment

10.3969/j.issn.1672-5433.2016.10.007

2016-05-18）

王瑛蘭，女，主管藥師。研究方向：中藥新藥與中藥炮制原理研究。通訊作者E-mail：wyinglan336@126.com