結(jié)腸癌組織Syk基因表達程度與其臨床意義

曹躍鵬，龐洪雙，袁旦平

結(jié)腸癌組織Syk基因表達程度與其臨床意義

曹躍鵬，龐洪雙，袁旦平

目的通過檢測結(jié)腸癌組織中Syk基因表達程度，探討其臨床意義。方法收集58例結(jié)腸癌患者的腫瘤組織及癌旁組織，采用免疫組化SP法（鏈霉素抗生物素一過氧化物酶），檢測結(jié)腸癌組織及癌旁組織Syk基因表達程度，并分析其與年齡、性別、腫瘤分化及分期等臨床病理、術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及5年生存率的關(guān)系。結(jié)果結(jié)腸癌組織中Syk基因表達率低于正常癌旁組織（＜0.01）。不同TNM分期中Syk基因的表達程度差異有統(tǒng)計學意義（＜0.01）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的表達差異有統(tǒng)計學意義（＜0.01）；不同分化程度、性別、年齡的Syk基因表達差異均無統(tǒng)計學意義（均＞0.05）。結(jié)腸癌復(fù)發(fā)23例，陽性表達4例（17.4%），陰性19例（82.6%）；無復(fù)發(fā)35例，陽性表達20例（57.1%），陰性15例（42.9%）。Syk基因在術(shù)后有復(fù)發(fā)和無復(fù)發(fā)的患者中表達程度差異有統(tǒng)計學意義（＜0.01）。Syk基因表達組5年生存率為79.2%，Syk未表達組5年生存率為58.8%；兩者整體生存率比較差異有統(tǒng)計學意義（=0.044）。結(jié)論Syk基因的失表達與結(jié)腸癌的發(fā)生、TNM分期、術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和5年生存率顯著相關(guān)。

結(jié)腸腫瘤；癌；Syk基因

結(jié)腸癌是常見惡性腫瘤中排行第三的腫瘤，是導(dǎo)致腫瘤相關(guān)性死亡的首要原因之一［1］。結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展是由于結(jié)腸上皮細胞遺傳及表觀遺傳的累積改變導(dǎo)致的。而脾酪氨酸激酶（Syk）基因的表達程度在多種正常組織、腫瘤組織及腫瘤細胞中有顯著差異［2］。本研究主要對于Syk基因在結(jié)腸癌及癌旁正常組織中的表達程度與臨床、病理、分期、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率及5年生存的關(guān)系進行探討。現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集浙江大學寧波醫(yī)院2007年1月至2009年12月的結(jié)腸癌患者腫瘤組織及對應(yīng)正常結(jié)腸組織標本各58份（患者58例）。并收集患者基本臨床病理資料，包括年齡、性別、分化程度及TNM分期等。所有病例均為首次診治患者，并且術(shù)后進行定期復(fù)診隨訪5年。58例患者中男28例，女30例；年齡33～81歲；高、中分化20例，低、未分化38例；I期、II期共24例，III期、IV期34例。

1.2 方法

1.2.1 取材術(shù)中分別取結(jié)腸癌瘤體及距瘤體5 cm以上的正常組織，并且病理證實為結(jié)腸癌。術(shù)前均未行放療、化療或免疫治療。并將新鮮組織標本均保存于-183℃液氮中以備用，且取材時間不超過20 min。

1.2.2 實驗方法采用免疫組化SP法（鏈霉素抗生物素一過氧化物酶），Syk兔抗人多克隆抗體（工作濃度1∶100），用PBS代替一抗作陰性對照，公司提供陽性對照。SP試劑盒及DAB染色劑購自邁新生物公司。組織用10%的甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，厚4m。切片脫蠟水化，高壓鍋抗原修復(fù)（pH6.10），檸檬酸緩沖液水浴加熱95℃，放入切片噴氣3min，然后室溫下靜置20min，取出切片，PBS沖洗，待用。其余按說明書進行。

1.3 結(jié)果判定Syk陽性表達主要定位于細胞質(zhì)，表達結(jié)果以高倍鏡下（400倍）陽性細胞數(shù)≤10%為陰性，＞10%為陽性。

1.4 統(tǒng)計方法采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料采用2檢驗；生存資料利用生存曲線，并對生存率進行比較。＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)腸癌組織與癌旁正常組織Syk基因表達情況比較正常組織Syk基因陽性表達58例（100.0%），結(jié)腸癌組織中Syk基因陽性表達24例（41.4%），陰性表達34例（58.6%）。正常組織和結(jié)腸癌組織中Syk基因表達率差異有統(tǒng)計學意義（=48.098，＜0.01）。

2.2 結(jié)腸癌組織Syk基因表達程度在臨床及其他因素中的差異性不同TNM分期Syk基因表達程度差異有統(tǒng)計學意義（＜0.01）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Syk基因表達差異有統(tǒng)計學意義（＜0.01）；不同分化程度、性別、年齡Syk基因表達差異均無統(tǒng)計學意義（均＞0.05）。見表1。

2.3 結(jié)腸癌組織Syk基因表達程度與術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)結(jié)腸癌復(fù)發(fā)23例，陽性表達4例（17.4%），陰性19例（82.6%）；無復(fù)發(fā)35例，陽性表達20例（57.1%），陰性15例（42.9%）。術(shù)后有復(fù)發(fā)和無復(fù)發(fā)患者Syk基因表達程度差異有統(tǒng)計學意義（=9.042，＜0.01）。Syk基因表達組5年生存率為79.2%；Syk未表達組5年生存率為58.8%。兩者整體生存率比較差異有統(tǒng)計學意義（=0.044）。見圖1。

3 討論

Syk基因編碼的蛋白，即脾酪氨酸激酶，是一種非受體型酪氨酸激酶。它是B淋巴細胞信號受體的一個關(guān)鍵組成部分［3］，可以調(diào)控B淋巴細胞的多種生物學功能，并且在T細胞和B細胞的活化和成熟過程中起重要的作用［4］。其表達產(chǎn)物脾酪氨酸激酶的缺失會致免疫細胞發(fā)育、成熟障礙，重者會導(dǎo)致重癥聯(lián)合免疫缺陷病（SCID）。從而對突變、異常增生的細胞失去免疫力，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生［5］。Carter等［6］認為，Syk與HER2/neu是一對功能相反的抑癌/癌基因。HER2/ neu的過度表達可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞的收縮，從而使腫瘤細胞易于穿過血管屏障，易于發(fā)生轉(zhuǎn)移。而Syk可抑制HER2/ neu收縮血管內(nèi)皮細胞的作用，從而抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移。Coopman等［7］發(fā)現(xiàn)正常乳腺組織中有Syk基因的表達，而浸潤性乳腺癌組織中沒有Syk基因表達，并且近年來的多項研究陸續(xù)檢測到乳腺癌［8］、肺癌［9］及黑色素瘤［10］等多種腫瘤細胞中Syk基因的表達缺失，并根據(jù)實驗結(jié)果推斷Syk基因可能是一種候選抑癌基因。

結(jié)腸癌是威脅人類健康的的常見惡性腫瘤之一。研究結(jié)腸癌的發(fā)病機制，尋找其預(yù)后的標志，是目前的研究熱點［11］。本研究將2007年1月至2009年12月于本院行結(jié)腸癌根治術(shù)治療的結(jié)腸癌患者均納入，液氮保存其切除的腫瘤組織及對應(yīng)正常結(jié)腸組織標本各58份（58例）。并收集基本臨床病理資料，包括年齡、性別、分化程度及TNM分期等。術(shù)后復(fù)診隨訪5年，評估其生存質(zhì)量，并進行更長期的定期電話或信件隨訪。根據(jù)實驗及隨訪結(jié)果，筆者得出以下幾個結(jié)論：（1）結(jié)腸癌組織中Syk基因表達程度顯著低于正常癌旁組織（＜0.05）。可得出結(jié)腸癌的發(fā)生與Syk基因的表達缺失有關(guān)系。但是本研究無法判斷是由于Syk基因的表達缺失導(dǎo)致的結(jié)腸癌，還是結(jié)腸癌的發(fā)生導(dǎo)致的Syk基因表達缺失。（2）結(jié)腸癌組織中Syk基因表達程度與結(jié)腸癌患者的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（＜0.05）：TNM分期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移表達的差異，體現(xiàn)了Syk基因失表達與結(jié)腸癌的侵襲性相關(guān)，而與年齡、性別及腫瘤細胞的分化程度未體現(xiàn)明確差異。（3）Syk基因失表達的結(jié)腸癌組織的患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率明顯高于正常表達的患者，且5年生存率低于正常表達患者：術(shù)后對于患者的定期復(fù)診隨訪發(fā)現(xiàn)，Syk基因表達缺失的患者復(fù)發(fā)率顯著高于正常表達者；Syk基因正常表達者的5年生存率顯著高于失表達者。筆者認為，雖然其生存率很大程度上與術(shù)者進行手術(shù)時的根治程度，及術(shù)后進行適當?shù)幕熞灿忻芮嘘P(guān)系；但整體趨勢受Syk基因表達程度影響，故認為以上實驗結(jié)果可靠。

綜上所述，Syk基因的表達程度在結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展中有著重要作用。其與腫瘤的分期密切相關(guān)，能為結(jié)腸癌患者的預(yù)后提供重要信息，也可能成為結(jié)腸癌治療的重要靶點，為結(jié)腸癌的治療提供新的思路。

表1 不同分化程度、TNM分期、性別、年齡，有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中Syk基因表達情況比較

圖1 5年生存率分析

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10.3969/j.issn.1671-0800.2016.03.025

R735.3+5

A

1671-0800（2016）03-0328-02

2016-01-02

（本文編輯：姜曉慶）

315010寧波，寧波市第一醫(yī)院（浙江大學寧波醫(yī)院）

袁旦平，Email：yuandanping1964@163.com