高效液相色譜法測定復方魚腥草合劑中連翹苷的含量

王湘妍，翟雪東

（河南應用技術職業學院，河南鄭州 450000）

高效液相色譜法測定復方魚腥草合劑中連翹苷的含量

王湘妍，翟雪東

（河南應用技術職業學院，河南鄭州 450000）

建立高效液相色譜法測定復方魚腥草合劑中連翹苷的含量。采用Agela Promosil C18（250mm×4mm，5μm）分析柱，流動相為乙腈-0.2%冰醋酸（24∶76），流速為1.0mL/min，檢測波長為277nm。結果：連翹苷在0.051 2μg～0.512 0μg范圍內線性關系良好（r=0.999 4），平均回收率為99.0%（n=6）。本方法專屬性強，準確、快速，適用于復方魚腥草合劑的質量控制。

高效液相色譜法；復方魚腥草合劑；連翹苷

復方魚腥草合劑是由魚腥草、連翹、黃芩和板藍根等5味中藥組成的復方制劑，用于外感風熱引起的咽喉疼痛；急性咽炎、扁桃腺炎有風熱證候者。處方中連翹的有效成分連翹苷有具有清熱、解毒、散結排膿等功效。其質量標準收載于文獻［1］中，但無連翹苷的含量測定方法，為了有效控制藥品質量，確保該制劑的療效，本實驗采用HPLC法測定復方魚腥草合劑中連翹苷的含量。

1 儀器與試藥

儀器高效液相色譜儀戴安U3000：Sartorias電子天平（CPA-225D）；

連翹苷（110821-200610），中國藥品生物制品檢定所提供。

2 方法與結果

2.1 色譜條件色譜柱

Agela Promosil C18（4.6mm×100mm，5μm）；流動相：乙腈-0.2%冰醋酸（24∶76），流速為1.0mL·min-1，檢測波長為277 nm，柱溫為30℃；進樣量10μl。

2.2 標準曲線的繪制

在上述條件色譜下，精密吸取上述對照品溶液5、10、20、30、50μL，注入液相色譜儀，測得峰面積。以對照品峰面積為縱座標，以進樣量為橫坐標作標準曲線，并以最小二乘法計算得回歸方程：Y=12.942 X-3.556 8，R2=0.999 4連翹苷在0.051 2μg～0.512 0μg范圍內有良好線性關系。

2.3 精密度試驗

取同供試品溶液溶液，連續進樣6次，結果連翹苷RSD為0.75%（n=6）。實驗結果見表1。

2.4 穩定性試驗

取供試品溶液分別在2h、4h、8h、12h、16h、20h、24h進樣1次，結果連翹苷RSD為0.95%（n=7）。

2.5 加樣回收試驗

精密量取已知含量的復方魚腥草合劑6份2mL，精密加入對照品溶液0.5mL、0.5mL、1mL、1mL、1.5mL、1.5mL，照本法制備供試品溶液，按本法進行含量測定并計算回收率。

2.6 樣品的測定

精密量取3個批號的樣品各2份，按本法制得供試品溶液，按本法進行含量測定結果批號為 20120911，20130108，20130304的樣品連翹苷含量分別為3.24μg/mL，2.98μg/mL，3.62μg/mL。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

使用二極管陣列檢測器，波長掃描范圍設定190～300nm，結果連翹苷在200nm，227nm，277nm 波長處有強吸收，考慮200nm，227nm供試品溶液雜質峰較多不易分離，且冰醋酸在小于240nm波長范圍內吸收度較大，故選擇277nm為檢測波長。

3.2 流動相的選擇

本品含有較多蔗糖和蜂蜜，黏度較大，若直接進樣，不利于分析；若稀釋后進樣，樣品中連翹苷含量較低，信噪比偏小，誤差較大。故采用樣品過聚酰胺柱，甲醇洗脫的方法進行凈化和富集，結果準確。曾用甲醇-水，甲醇-1%乙腈-水和乙腈-0.2%冰醋酸溶液比較，乙腈-0.2%冰醋酸溶液分離效果較好，保留時間適當，故本實驗使用乙腈-0.2%冰醋酸（24∶76）作為流動相。

3.3 分析方法

連翹苷的含量測定方法有薄層掃描法［2］，本實驗采用高效液相色譜法，試驗結果表明，所建立的方法簡單，操作方便，專屬性強、重復性好、結果可靠，可作為該制劑的質量控制方法。

［1］ WS-10821（ZD-0821）—2002.國家中成藥標準匯編內科肺系（一）分冊［S］，2002.

［2］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部［M］.北京：化學工業出版社，2010.

［3］ 何紹萍，陳華龍.高效液相色譜法測定小兒清解沖劑中連翹苷含量［J］.中國藥業，2011，（3）：21.

［4］ 姬雪禮，李文烈，鄭曉杰，等.高效液相色譜法同時測定連翹葉中連翹酯苷A和連翹苷含量［J］.中國藥業，2014，（7）：33.

［5］ 陸紅柳，譚喜瑩，趙陸華，等.連翹中連翹苷HPLC測定方法的改進［J］.中草藥.2007，38（06）：936-937.

［6］ 楊棣華，黃蘭，鄭顯輝.不同產地連翹葉中連翹苷和連翹酯苷A的含量測定［J］.臨床醫學工程，2013，（3）：288.

［7］ 王昌利.高效液相色譜法測定連膠素膠囊中連翹苷的含量［J］.陜西中醫學院學報.2005（05），35.

［8］ 曹曉燕，王東浩，思培峰，等.連翹不同部位連翹苷含量的比較［J］.中成藥，2009，（4）.

［9］ 史大軍，邱海蘊，康紅英.HPLC法測定清喉咽顆粒中連翹苷的含量［J］.中國藥事，2012，（1）.

［10］ 閔宇航.中藥柴胡、何首烏、連翹、枸杞子的質量標準提高研究［D］北京中醫藥大學，2014.

表1 樣品中連翹苷回收率試驗結果（n=6）

Determination of Phillyrin in Compound Herba Houttuyniae Mixture by HPLC

Wang Xiang-yan，Zhai Xue-dong

Objective To establish a HPLC method for determination of phillyrin in Compound Herba Houttuyniae mixture.Methods Agela Promosil C18（250mm × 4mm，5μm）column，the mobile phase was Acetonitrile-0.2% glacial acetic acid（24∶76），the fl ow rate was 1.0mL/min，the detection wavelength was 277 nm.Results：phillyrin was 0.051 2～0.512 0μg good linear relationship（r=0.999 4），the average recovery rate was99.0%（n=6）.Conclusion：the method is specific，accurate，rapid，and suitable for quality control of compound Houttuynia cordata Houttuynia mixtur

HPLC；compound Houttuynia cordata mixture；phillyrin

R286.0

A

1003-6490（2016）07-0061-02

2016-07-22

王湘妍（1982—），女，河南開封人，講師，主要研究方向為中藥新制劑研發。