西藏林芝地區(qū)豬瘟流行的抗原及免疫抗體檢測(cè)

羅潤(rùn)波，王剛，云旦平措，益西旺扎，索朗斯珠

（西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，西藏林芝860000）

西藏林芝地區(qū)豬瘟流行的抗原及免疫抗體檢測(cè)

羅潤(rùn)波，王剛，云旦平措，益西旺扎，索朗斯珠

（西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，西藏林芝860000）

豬瘟（CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）感染引起的豬的急性、熱性、高度致死性傳染病，是嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)發(fā)展的主要疫病之一。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為A類16種傳染病之一，我國(guó)亦將其列為一類傳染病，是發(fā)生最多、危害最大、流行最廣的動(dòng)物傳染病之一。

按照農(nóng)業(yè)部國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃和省屬要求，豬瘟免疫抗體檢測(cè)采用正向間接血凝試驗(yàn)（IHA）或者酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）2種方法［1-3］，其中，ELISA應(yīng)用最廣。針對(duì)我國(guó)目前豬瘟的流行現(xiàn)狀及特點(diǎn)做好免疫監(jiān)測(cè)，保持豬群處于較高的群體免疫水平，堅(jiān)決淘汰CSFV隱性感染種豬，是豬場(chǎng)有效防控豬瘟的重要手段［4-7］。為了解林芝地區(qū)豬場(chǎng)豬群的豬瘟病毒感染情況和疫苗免疫狀況，筆者分別采用PCR技術(shù)和ELISA方法對(duì)豬場(chǎng)300頭份豬的組織樣品和800頭份血清樣品進(jìn)行了豬瘟病毒和豬瘟抗體的檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料血清：隨機(jī)采集西藏林芝地區(qū)米林縣、墨脫縣、朗縣、察隅縣、工布江達(dá)縣5個(gè)縣的豬場(chǎng)和散養(yǎng)豬血清800頭份。

組織：隨機(jī)采集西藏林芝地區(qū)米林縣、墨脫縣、朗縣、察隅縣、工布江達(dá)縣5個(gè)縣的豬場(chǎng)和散養(yǎng)豬組織300頭份。

1.2試劑豬瘟病毒抗體（IgG）診斷試劑盒和豬瘟病毒抗原（CSFV-Ag）檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自深圳市綠詩(shī)源生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20140601。

1.3主要儀器隔水式恒溫培養(yǎng)箱，購(gòu)自上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)為為GNP-9050；酶標(biāo)分析儀，購(gòu)自深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司，型號(hào)為RT6100；高速離心機(jī)centrifuge5804由德國(guó)

Eppendorf生產(chǎn)；PCR儀my cycleTM、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)均由美國(guó)Bio-Rad生產(chǎn)；移液器由德國(guó)Eppendorf生產(chǎn)。均由西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院高原動(dòng)物疫病檢測(cè)中心實(shí)驗(yàn)室提供。

1.4方法

1.4.1ELISA法檢測(cè)豬瘟抗體對(duì)采集的全血樣本分離血清后，按照ELISA試劑盒診斷說(shuō)明書(shū)中的方法規(guī)范操作。

1.4.2PCR法檢測(cè)豬瘟對(duì)采集的組織病料進(jìn)行處理后，按照豬瘟病毒抗原（CSFV Ag）定量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求規(guī)范操作。

1.5判定標(biāo)準(zhǔn)

1.5.1ELISA法判定標(biāo)準(zhǔn)臨界值=0.4，在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔的OD值，試驗(yàn)成立的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔的平均OD值≥0.7，陰性對(duì)照孔的平均OD值必須＜0.1；樣品OD值≥0.4判斷為陽(yáng)性；樣品OD值＜0.35時(shí)判斷為陰性；0.35到0.4之間為可疑。

1.5.2PCR法判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行PCR檢測(cè)，電泳檢測(cè)結(jié)果在271 bp處出現(xiàn)條帶判斷為陽(yáng)性，反之判斷為陰性。

2結(jié)果與分析

2.1豬瘟ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果西藏林芝地區(qū)豬場(chǎng)和散養(yǎng)豬隨機(jī)采集的800份血清中CSF抗體陽(yáng)性率達(dá)86%，其中米林縣陽(yáng)性率為76%，墨脫縣陽(yáng)性率為97%，朗縣陽(yáng)性率88%，察隅縣陽(yáng)性率為78%，工布江達(dá)縣為91%。結(jié)果表明，林芝地區(qū)5個(gè)縣抗體水平較高，免疫效果較好。

2.2豬瘟PCR檢測(cè)結(jié)果從林芝地區(qū)5個(gè)縣中隨機(jī)采集300份組織病料，按照說(shuō)明書(shū)要求處理后進(jìn)行豬瘟病毒PCR檢測(cè)，300份樣品中只有2份樣品在271 bp處出現(xiàn)條帶（見(jiàn)圖1）。

3討論

3.1本次試驗(yàn)應(yīng)用ELISA法對(duì)西藏林芝地區(qū)米林、工布江達(dá)等5個(gè)縣的800頭份豬進(jìn)行了豬瘟抗體檢測(cè)，結(jié)果顯示，林芝地區(qū)豬場(chǎng)和散養(yǎng)豬中CSFV血清抗體陽(yáng)性率達(dá)86%，其中米林縣為76%，墨脫縣為97%，朗縣為88%，察隅縣為78%，工布江達(dá)縣為91%。說(shuō)明豬群抗體水平較高，免疫效果好，免疫工作做得較好。

圖1豬瘟PCR電泳圖

3.2利用PCR技術(shù)對(duì)西藏林芝地區(qū)米林、工布江達(dá)等5個(gè)縣的300頭份豬進(jìn)行了豬瘟病毒檢測(cè)，結(jié)果顯示，林芝地區(qū)豬場(chǎng)和散養(yǎng)豬中豬瘟抗原陽(yáng)性率達(dá)0.7%，說(shuō)明西藏林芝地區(qū)豬群中有少許豬瘟病例，存在暴發(fā)和擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)，要引起高度重視，加強(qiáng)日常檢疫與預(yù)防工作十分必要。

3.3定期開(kāi)展免疫監(jiān)測(cè)，評(píng)價(jià)豬瘟免疫效果，建立適合本場(chǎng)的免疫程序，抗體不合格及時(shí)補(bǔ)免。淘汰帶毒種豬，培育健康的無(wú)豬瘟帶毒豬的種豬和后備種豬群。

3.4堅(jiān)持自繁自養(yǎng)、全進(jìn)全出、減少應(yīng)激；加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，改善生態(tài)環(huán)境，搞好綜合防疫，提高豬群的抵抗力。

［1］龐然，張小敏，周斌，等.4種商品化試劑盒檢測(cè)豬瘟病毒抗體的比較分析［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2011，47（9）：40-42.

［2］涂長(zhǎng)春.我國(guó)豬瘟的流行原因與防制對(duì)策［J］.動(dòng)物保健，2004（4）：20-21.

［3］楊艷芹，樊福好.豬健康性能監(jiān)測(cè)與檢測(cè)數(shù)據(jù)的分析利用［J］.今日養(yǎng)豬，2006（6）：12-14.

［4］丘惠深.凈化是有效控制我國(guó)豬瘟的重要手段［J］.豬業(yè)科學(xué)，2010（3）：119.

［5］寧宜寶，王琴，趙耘.豬瘟病毒持續(xù)感染與豬瘟預(yù)防控制［J］.中國(guó)獸藥雜志，2005（5）：31-35.

［6］胡杰，磨龍春，黃夏，等.豬瘟間接血凝抗體與豬瘟病毒感染的相關(guān)性分析［J］.中國(guó)動(dòng)物檢驗(yàn)，2008，25（8）：40-41.

［7］王治方，郭成留，張清華，等.某規(guī)模化豬場(chǎng)豬瘟普查報(bào)告［J］.養(yǎng)豬，2007（1）：56.

S858.28

B

0529-6005（2016）08-0054-02

2015-05-26

西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院“動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)科建設(shè)”項(xiàng)目、“預(yù)防獸醫(yī)重點(diǎn)建設(shè)”項(xiàng)目

羅潤(rùn)波（1991-），男，碩士生，從事動(dòng)物疫病防治方面的研究工作，E-mail：626652016@qq.com

索朗斯珠，E-mail：xzslsz@163.com