高效液相-蒸發光散射法檢測氟［18F］脫氧葡糖注射液中2-氯-2-脫氧-D葡萄糖含量

張強，謝新民，周

（1.中國人民解放軍廣州軍區廣州總醫院藥劑科，廣東廣州510010；2.中國人民解放軍廣州軍區廣州總醫院正電子藥物中心，廣東廣州510010）

高效液相-蒸發光散射法檢測氟［18F］脫氧葡糖注射液中2-氯-2-脫氧-D葡萄糖含量

張強1，謝新民1，周2

（1.中國人民解放軍廣州軍區廣州總醫院藥劑科，廣東廣州510010；2.中國人民解放軍廣州軍區廣州總醫院正電子藥物中心，廣東廣州510010）

目的建立測定氟［18F］脫氧葡糖注射液中2-氯-2-脫氧-D葡萄糖（CLDG）含量的高效液相-蒸發光散射（HPLC-ELSD）法。方法色譜柱為SB-C18柱（150 mm×2.1 mm，3.5 m），流動相為甲醇-0.1%三氟乙酸（10∶90），流速為0.2 mL/min，進樣量為10 L；Sedex 85型低溫型蒸發光散射檢測器，載氣（N2）壓力為3.0 bar，檢測池溫度為40℃，gain值為10。結果CLDG質量濃度在5.06～135.00 g/mL范圍內與峰面積同時取對數后呈良好線性關系，R2=0.999 0，檢測限為2 g/mL，定量限為5.0 g/mL。結論該方法簡便、快速，適用于氟［18F］脫氧葡糖注射液生產中的常規質量控制。

高效液相-蒸發光散射法；2-氯-2-脫氧-D葡萄糖；氟［18F］脫氧葡糖注射液

氟［18F］脫氧葡糖（［18F］-FDG）注射液的放射性核素半衰期很短，僅120 min，屬短壽命的正電子放射性藥物，且所含雜質極其微量，通常相當于納摩爾量級，迫使用于化學雜質檢查的方法需要快速且有更低的檢測下限，以及專門的安全性評價、質量保證和質量控制措施［1-6］。2015年版《中國藥典（二部）》開始收載氟［18F］脫氧葡糖注射液，在其檢查項下對合成催化劑氨基聚醚（KryPtofixTM2.2.2）作了限量規定，但未對合成中酸水解引入的2-氯-2-脫氧-D葡萄糖（CLDG）作限量要求［7］。目前，CLDG尚無半數致死量（LD50）數據［8］，但《美國藥典》（USP）明確規定CLDG應小于1.0 mg/dose，并推薦高效陰離子交換色譜-脈沖安培檢測法（HPAEC-PAD）。Nakao等［9］報道，可采用柱前衍生和高效液相色譜-紫外光譜（HPLC-UV）法，在210 nm波長處對CLDG進行測定。袁艷娟等［10］報道，采用高效液相色譜-質譜聯用技術（HPLC-MS）檢測氟［18F］脫氧葡糖注射液中的CLDG含量。MS和PAD檢測器昂貴，維護保養要求高。柱前衍生操作步驟煩瑣，均不利于氟［18F］脫氧葡糖注射液的快速常規質量分析，而價格相對低廉的低溫型蒸發光散射檢測器（ELSD）作為一種通用型質量檢測器，越來越多地被運用在無紫外吸收和紫外末端吸收物質的常規分析中［11-12］。有研究已成功應用HPLC-ELSD法對氟［18F］脫氧葡糖注射液中的氨基聚醚進行了測定［13］。在此基礎上，筆者采用HPLCELSD法測定氟［18F］脫氧葡糖注射液中CLDG的含量，旨在為應用該方法同時測定氟［18F］脫氧葡糖注射液中的氨基聚醚和CLDG含量提供依據。現報道如下。

1　儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀（包括G1313A型高壓二元泵，G1313A型自動進樣器，G1316A型柱溫箱，安捷倫科技公司）；Sedex 85型低溫型蒸發光散射檢測器（迪馬科技有限公司）；Agilent A.09.01型化學工作站（安捷倫科技公司）。2-氯-2-脫氧-D葡萄糖對照品（Sigma公司）；甲醇為色譜純（Merck公司），三氟乙酸為分析純，水為重蒸餾水。

2　方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱：Zorbax SB-C18柱（150 mm×2.1 mm，3.5 μm）；流動相：甲醇-0.1%三氟乙酸（10∶90）；流速：0.2 mL/min；進樣量：10 μL；N2壓力：3.0 bar；檢測池溫度：40℃；gain值：10；柱溫：25℃。

2.2溶液制備

對照品溶液：精密稱取CLDG對照品0.005 05 g，置容量瓶中，用乙腈稀釋成質量濃度為1.010 0 g/L的貯備液，置4℃條件下貯存備用。

樣品溶液：［18F］-FDG注射液（批號分別為20160311，20160322，20160330），在廣州軍區廣州總醫院正電子藥物中心，使用SiemensExploraFDG4裝置合成。2.3方法學考察

系統適用性與檢測靈敏度試驗：取對照品貯備液，用乙腈逐級稀釋，在擬訂色譜條件下試驗，CLDG的保留時間為3.41 min，其色譜圖見圖2。按信噪比（S/N）=3計算，得CLDG最小檢測限約為2.0 μg/mL，定量限為5.0 μg/mL。

線性關系考察：精密量取CLDG貯備液，用乙腈依次稀釋成質量濃度為135.00，67.50，33.75，16.88，5.06 μg/mL的梯度溶液。按擬訂色譜條件進樣試驗，記錄CLDG色譜峰面積。結果表明，CLDG質量濃度在5.06～135.00 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好，兩者在取對數后呈線性關系，線性方程為Y=0.882+ 1.461 X，R2=0.999 0。

精密度和準確度試驗：線性關系考察中取5個濃度梯度的CLDG對照品溶液，在擬訂色譜條件下試驗，每個濃度重復測定5次，連續測定3 d。分別用相對標準偏差（RSD）和相對誤差（RE）計算日內和日間的精密度與準確度。結果見表1。

2.4樣品含量測定

等滲調節劑氯化鈉會干擾上述色譜條件下氟［18F］脫氧葡糖注射液中CLDG的測定，故樣品測定應在調節注射液等滲前。結果，3個批次的氟［18F］脫氧葡糖注射液中CLDG含量均小于2 μg/mL。

圖2　氟［18F］脫氧葡糖注射液和CLDG色譜圖

3　討論

HPLC-ELSD法要求流動相組分在檢測時先被加熱蒸發，而后不揮發的溶質顆粒通過光散射池時產生的電信號被光傳感器測定［14］。CLDG的極性較大，故采用無極性的C18分析柱，極性溶劑和揮發性的酸性離子對試劑組成的流動相是最適合的HPLC-ELSD色譜條件。試驗中對有機溶劑（甲醇，乙腈）和揮發性的離子對試劑（甲酸，乙酸，三氟乙酸，七氟丁酸）進行了對比，選擇甲醇-0.1%三氟乙酸作為流動相，通過調整比例和流速，使CLDG達到基線分離。

氟［18F］脫氧葡糖注射液制備過程中，使用鹽酸對氟［18F］脫氧葡糖前體進行水解，引入的氯離子及水解純化后調節等滲的氯化鈉均會干擾該試驗方法下CLDG的測定，水解引入的副產物可通過氟［18F］脫氧葡糖注射液合成裝置（Siemens Explora FDG4）中的AG11A8離子交換樹脂柱（Waters公司）除去。

表1　日內和日間精密度的RSD及RE

本試驗中選擇HPLC-ELSD方法檢測氟［18F］脫氧葡糖注射液中CLDG的含量，靈敏度高，簡便快速，適用于生產過程的快速質量控制，符合藥品生產質量管理規范（GMP）對過程控制的理念。

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Content Determination of the Concentration of CLDG in［18F］-FDG by HPLC-ELSD

Zhang Qiang1，Xie Xinmin1，Zhou Zheng2
（1.DepartmentofPharmacy，GuangzhouGeneralHospitalofGuangzhouMilitaryCommand，Guangzhou，Guangdong，China510010；2.Positron Medicine Center，Guangzhou General Hospital of Guangzhou Military Command，Guangzhou，Guangdong，China510010）

ObjectiveTo establish an HPLC-ELSD method to determine the concentration of CLDG in［18F］-FDG.M ethodsThe C18column was used and the mobile phase was methanol-0.1%TFA（10∶90）at a flow rate of 0.2 mL/min.The auto-injection volume was set to 10 μL.The pressure of nebulizing gas（N2）was 3.0 bar.The drift tube temperature was 40℃.The gain was 10.Results Excellent linearity（R2=0.999 0）was obtained over the range of 5.06-135.00 μg/mL.The limit of detection was 2 μg/mL，and the quantification limit was 5.0 μg/mL.ConclusionThis method simple，rapid，quantitative and sensitive detection of CLDG in［18F］-FDG thus making it amenable to routine quality assurance testing.

HPLC-ELSD；CLDG；［18F］-FDG

R927.1；R979.1

A

1006-4931（2016）12-0069-03

廣東省醫學科研基金項目，項目編號：A2014493。

（2016-01-06；

2016-02-09）