洛索洛芬鈉脂質(zhì)體凝膠的制備工藝優(yōu)化及經(jīng)皮滲透動(dòng)力學(xué)研究

張呂釗，吳麗萌，劉瑩珍

（廣東省深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院，廣東深圳518101）

洛索洛芬鈉脂質(zhì)體凝膠的制備工藝優(yōu)化及經(jīng)皮滲透動(dòng)力學(xué)研究

張呂釗，吳麗萌，劉瑩珍

（廣東省深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院，廣東深圳518101）

目的研究洛索洛芬鈉脂質(zhì)體凝膠的制備方法及經(jīng)皮滲透學(xué)特點(diǎn)。方法通過(guò)優(yōu)化洛索洛芬鈉脂質(zhì)體的處方達(dá)到理想的包封率，通過(guò)優(yōu)化脂質(zhì)體凝膠的處方改善經(jīng)皮滲透速率。結(jié)果通過(guò)優(yōu)化的方法制備洛索洛芬鈉脂質(zhì)體凝膠的包封率為78.76%經(jīng)皮滲透速率為854.84 g/h。結(jié)論洛索洛芬鈉脂質(zhì)體凝膠制備工藝可行，質(zhì)量穩(wěn)定，通過(guò)優(yōu)化處方可以改善經(jīng)皮滲透速度和包封率。

洛索洛芬鈉；脂質(zhì)體；經(jīng)皮滲透

洛索洛芬鈉為非甾體類抗炎藥（NSAIDs），其通過(guò)抑制前列環(huán)素環(huán)氧化酶而影響眾多炎性因子合成，起到鎮(zhèn)痛、抗炎、抗風(fēng)濕作用，鎮(zhèn)痛作用比吲哚美辛、酮洛芬強(qiáng)6～8倍，臨床主要用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨性關(guān)節(jié)炎、腰痛癥、肩關(guān)節(jié)周圍炎等疾病的鎮(zhèn)痛和消炎［1］。其口服劑型一般需1日3次給藥且忌空腹食用，降低了治療依從性。該藥常見(jiàn)不良反應(yīng)主要為消化道癥狀，如腹痛、惡心、嘔吐、腹瀉等。改變劑型，對(duì)于增加依從性及減少不良反應(yīng)非常有意義。脂質(zhì)體凝膠劑型是近年研究的重點(diǎn)，脂質(zhì)體以其良好的生物相容性、生物膜相似性、無(wú)毒、促進(jìn)藥物透皮吸收、在皮膚內(nèi)形成藥物儲(chǔ)庫(kù)而維持其恒定的有效濃度［2］，而脂質(zhì)體凝膠可維持藥物的穩(wěn)定性。本試驗(yàn)中將洛索洛芬鈉制成脂質(zhì)體凝膠，考察其制備工藝、處方及穩(wěn)定性。現(xiàn)報(bào)道如下。

1　儀器、試藥與動(dòng)物

1.1儀器

UV-755B型紫外分光光度計(jì)（上海分析儀器總廠）；3k30型冷凍離心機(jī)（德國(guó)Sigma公司）；RE-52C型旋轉(zhuǎn)蒸餾儀（上海亞榮生化儀器廠）；FRANZ擴(kuò)散池（PermeGear水平測(cè)試擴(kuò)散池，上海玉研儀器有限公司）；FS-100T型超聲波處理器（上海生析超聲儀器有限公司）。

1.2試藥

已知主藥含量為88.0%的洛索洛芬鈉（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為100638-201502，規(guī)格為每支50 mg）；洛索洛芬鈉片（第一三共制藥＜上海＞有限公司，批號(hào)為SN016LA）；膽固醇（山東生物科技公司）；卵磷脂，聚乙二醇辛基苯基醚（Tritonx-100，Sigma公司）；泊洛沙姆-407（BASF公司）；葡聚糖凝膠G-50（Pharmacia公司）。

1.3動(dòng)物

健康Wistar雄性大鼠，10周齡，體重150～200 g，普通級(jí)，由深圳大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

2　方法與結(jié)果

2.1脂質(zhì)體的制備及處方優(yōu)化

2.1.1含量測(cè)定方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：取洛索洛芬鈉片10片，精密稱定，研磨均勻后再精密稱定25 mg置250 mL量筒中，加入磷酸鹽緩沖液（PBS）充分溶解，450 μm濾膜濾過(guò)，備用。分別精密吸取1.0，2.0，4.0，5.0，8.0，10.0 mL，置50 mL量筒中搖勻。以PBS為空白對(duì)照，在223 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度［3］。以吸光度（A）對(duì)進(jìn)樣質(zhì)量濃度（C，μg/mL）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=0.029 C+0.348，R2=0.999 2（n=6）。結(jié)果表明，洛索洛芬鈉溶液進(jìn)樣質(zhì)量濃度在2～20 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密量取“線性關(guān)系考察”項(xiàng)下制得的洛索洛芬鈉溶液5 mL，置50 mL量筒中，反復(fù)測(cè)定吸光度3次。結(jié)果的RSD為0.54%（n=3），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取洛索洛芬鈉溶液5 mL，置50 mL量筒中，分別于日內(nèi)（4，8，12 h）測(cè)定其吸光度，結(jié)果的RSD為0.8%（n=3）；同時(shí)于日間（1，2，3 d）測(cè)定其吸光度，結(jié)果的RSD為1.4%（n=3），表明溶液在日內(nèi)、日間均穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：依脂質(zhì)體的制備工藝制備脂質(zhì)體，重復(fù)測(cè)定3次。結(jié)果藥物包封率分別為79.43%，73.45%，76.98%，平均（77.82±2.68）%，表明方法重復(fù)性良好。

回收率試驗(yàn)：取已知主藥含量（88.0%）的洛索洛芬鈉制備成2，5，8 μg/mL的系列溶液，測(cè)得三者的回收率分別為98.67%，99.45%，100.45%，平均99.52%，RSD為0.89%（n=3），表明方法回收率良好。

2.1.2脂質(zhì)體制備及處方優(yōu)化

試驗(yàn)設(shè)計(jì)：設(shè)置4個(gè)可能對(duì)脂質(zhì)體包封率產(chǎn)生影響的因素，即卵磷脂/膽固醇（X1），卵磷脂+膽固醇/洛索洛芬鈉（X2），氯仿用量/PBS用量（X3），水化的pH（X4）；每個(gè)因素取6個(gè)水平，按均勻設(shè)計(jì)表U6*（64）的使用表安排試驗(yàn)。詳見(jiàn)表1和表2。

表1　洛索洛芬鈉包封率影響因素均勻設(shè)計(jì)表

表2　各組合配方下的洛索洛芬鈉包封率

包封率測(cè)定：預(yù)處理Sephadex-G50葡聚糖凝膠，精密測(cè)量0.1 mL脂質(zhì)體混懸液，置10 mL容量瓶中，加入10%TritonX-100溶液0.5 mL，溶解脂質(zhì)體，PBS溶液定容，分光光度法測(cè)定其含量（C1）；然后精密測(cè)定脂質(zhì)體混懸液0.1 mL，用PBS（pH=6.5）溶解至0.5 mL，用分光光度法測(cè)定游離的洛索洛芬鈉含量（C2），包封率（Y%）=（C1-C2）/C1×100%。以包封率（Y）為縱坐標(biāo)，按表2進(jìn)行多元線性逐步回歸分析，得回歸方程Y=23.838-0.114 X1X4+2.062 X2X3，R2=0.993（P＜0.05）。取卵磷脂與膽固醇比例為1，氯仿50 mL，PBS（pH=6.5）10 mL為參數(shù)制備脂質(zhì)體。

脂質(zhì)體制備工藝：薄膜分散法制備脂質(zhì)體，精密稱取卵磷脂540 mg，膽固醇540 mg，維生素E 10 mg，置500 mL燒瓶中，加入氯仿50 mL使溶解；另取洛索洛芬鈉180 mg加入10 mL PBS（pH=6.5），將水相緩慢加入油相；將燒瓶置50℃水浴中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在轉(zhuǎn)速100 r/min及減壓條件下除去氯仿；向瓶中加入50℃的PBS（pH=6.5）20 mL，水浴振蕩1 h使之在燒瓶壁上形成類脂薄膜被洗去。超聲乳化分散，再將其通過(guò)450 nm的濾膜得到半透明的混懸液。測(cè)定其包封率為78.76%。

2.2脂質(zhì)體凝膠劑制備及處方優(yōu)化

2.2.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)

取洛索洛芬鈉180 mg，加入純化水中，另取泊洛沙姆407 5.0 g，使其充分溶脹，加入月桂氮酮（AZONE），充分?jǐn)嚢瑁詈蠹尤爰兓?0 g。

選擇泊洛沙姆407作為凝膠基質(zhì)，將20 mL脂質(zhì)體混懸液與泊洛沙姆407 3.0 g充分溶脹，另取10 mL脂質(zhì)體混懸液、泊洛沙姆407 2.0 g、羥苯丁酯5 mg，加入PBS溶液5 mL，攪勻并不斷加入促滲透劑；將兩者混合，用研合法制備成脂質(zhì)體凝膠，加入PBS溶液至總量為20 g，其洛索洛芬鈉含量為0.9%。選擇的促滲透劑有丙二醇（PG）、泊洛沙姆（Pluronic F-68）、油酸，選擇其濃度使用U6*（64）的均勻設(shè)計(jì)表安排試驗(yàn)，見(jiàn)表3。

表3　影響洛索洛芬鈉脂質(zhì)體凝膠滲透速率的因素均勻設(shè)計(jì)表

健康大鼠經(jīng)麻醉處死后取腹部皮膚，除去皮下組織，置釋放池與接收池之間的F-擴(kuò)散池中，接收池盛10 mL的PBS溶液（pH=6.5）；取一定量的凝膠置釋放池，使其均勻涂布于鼠皮的角質(zhì)層上。電磁攪拌器恒溫（37℃）攪拌，定時(shí)（0.5，1，2，4，6，8，10，12，16，18，24 h）吸取接受液，同時(shí)補(bǔ)充等量的接受液，測(cè)定接受液的吸光度，標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定其濃度（C），累計(jì)其單位面積總投藥量（Q=CV/A，A為皮膚擴(kuò)散面積，V為接受室體積），依據(jù)其與時(shí)間的關(guān)系進(jìn)行線性回歸，計(jì)算其滲透速率（Y），見(jiàn)表4。得到其滲透公式為Y=334.625+ 39.404 X3X4+0.227 X22+2.320 X2X4+2.946 X1+ 2.765 X4，R2=1，P＜0.05，故取X1=2.5%，X2= 25%，X3=2.0%，X4=2.5%，取月桂氮酮0.5 g，丙二醇5.0 g，泊洛沙姆0.4 g，油酸0.5 g，加入配方。制得洛索洛芬鈉脂質(zhì)體凝膠。

表4　各組合配方制備的洛索洛芬鈉的滲透速率

2.2.2體外經(jīng)皮釋放曲線

將洛索洛芬鈉脂質(zhì)體凝膠，均勻涂布于擴(kuò)散池鼠皮的角質(zhì)層上，電磁攪拌器恒溫37℃攪拌，定時(shí)（0.5，1，2，4，6，8，10，12，16，18，24 h）吸取接受液，同時(shí)補(bǔ)充等量的接受液，測(cè)定接受液的吸光度，標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定其濃度（C），累計(jì)其總的單位面積投藥量，方法同前，得方程Q=854.842×-137.552，R2=1（P＜0.05），其體外滲透試驗(yàn)符合HIGUCHI方程，其滲透速率為854.84 μg/h。同法測(cè)得洛索洛芬鈉凝膠，其方程為Q=276.652×-60.246，R2=1（P＜0.05）。詳見(jiàn)圖1。可見(jiàn)，脂質(zhì)體凝膠的滲透速率明顯大于凝膠的滲透速率。

圖1　洛索洛芬鈉不同劑型體外釋放曲線

2.3穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.3.1性狀

樣品為均勻、細(xì)膩的白色凝膠。

2.3.2包封率測(cè)定

稱取洛索洛芬鈉脂質(zhì)體凝膠1.0 g，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加入0.5 mL的10%TritonX-100溶液，用PBS溶液振蕩溶解過(guò)濾；濾液用分光光度法測(cè)定，其含量為新的總藥量；取洛索洛芬鈉脂質(zhì)體凝膠1.0 g，加入PBS溶液20 mL，浸泡4 h，然后渦旋10 s，于4℃以20 000 r/min的速率離心30 min，取上層溶液得到游離液體，測(cè)定其游離藥物含量。包封率=（新總藥量-新的游離藥物含量）/新總藥量。本品初始含量為0.90%，初始包封率為78.76%。

2.3.3光照試驗(yàn)

取一定量藥品置無(wú)色玻璃瓶中，于照度4 000 lx照射下，第10天取出測(cè)定其總藥含量及包封率，結(jié)果分別為0.856%和65.43%。

2.3.4溫度試驗(yàn)

取一定量藥品置棕色玻璃瓶中，第10天于20，40，60℃分別測(cè)定其總藥含量及包封率，結(jié)果分別為0.912%和78.22%，0.908%和77.47%，0.854%和67.34%。

2.3.5濕度試驗(yàn)

取一定量藥品置相對(duì)濕度75%、溫度25℃的密閉容器中，第10天分別測(cè)定其總藥含量及包封率，結(jié)果分別為0.897%和77.78%。

3　討論

NSAIDs廣泛應(yīng)用于骨關(guān)節(jié)疾病、風(fēng)濕免疫疾病等的治療，但可能引起諸多系統(tǒng)的不良反應(yīng)，如胃腸道反應(yīng)及腎毒性等，其中胃腸道反應(yīng)主要機(jī)制為抑制環(huán)氧化酶（COX），減少前列腺素（PGs）合成，后者有保護(hù)胃腸黏膜作用；腎毒性表現(xiàn)為水電解質(zhì)紊亂［4］、急性腎衰［5］、腎病綜合征、間質(zhì)性腎炎、腎乳頭壞死等［6］。局部用藥可減少不良反應(yīng)的發(fā)生，已成為研究熱點(diǎn)。

脂質(zhì)體凝膠是一種新型給藥方式。脂質(zhì)體是將藥物包封與類脂質(zhì)雙分子形成的薄膜中所制成的超微型藥物載體制劑，具有許多皮膚局部用藥的優(yōu)點(diǎn)：能較好地包裹親水性或親油性藥物，降低藥物對(duì)皮膚的刺激性；對(duì)難溶性藥物有增溶性，能增加藥物在皮膚的滯留時(shí)間和滯留量；具有限速屏障作用，可減少藥物的全身吸收，從而降低藥品不良反應(yīng)。將藥物脂質(zhì)體分散在凝膠基質(zhì)中，可減少脂質(zhì)體的聚集而增加穩(wěn)定性；同時(shí)，由于體系黏度增大，增加了藥物在皮膚表面的保留時(shí)間，有利于藥物的經(jīng)皮滲透和皮膚深層的滯留作用。洛索洛芬鈉為常見(jiàn)的NSAIDs，通過(guò)將其制成局部藥物可提高用藥安全性。故本研究中將洛索洛芬鈉制成脂質(zhì)體凝膠給藥，考察各組方的配方對(duì)其包封率及經(jīng)皮滲透速率的影響。

本研究中考察了洛索洛芬鈉脂質(zhì)體各配方對(duì)包封率的影響。多元線性逐步回歸分析結(jié)果顯示，pH介于6.5～7.8時(shí)，包封率與其呈負(fù)相關(guān)；而與氯仿和PBS的體積比，以及卵磷脂與膽固醇的比例明顯相關(guān)。故相對(duì)提高氯仿體積及膽固醇質(zhì)量可提高洛索洛芬鈉脂質(zhì)體包封率。同時(shí)考察了洛索洛芬鈉脂質(zhì)體凝膠各配方對(duì)其滲透速率的影響，結(jié)果滲透速率與各促滲透劑濃度呈正相關(guān)，但泊洛沙姆和油酸的濃度對(duì)其滲透速率影響最大。可見(jiàn)，如調(diào)控泊洛沙姆及油酸的濃度，可改善洛索洛芬鈉脂質(zhì)體凝膠的滲透速率；月桂氮酮的濃度在0.5%～2.5%時(shí)即有明顯的助滲效果，一般取正常范圍內(nèi)的最大值2.5%。丙二醇主要是協(xié)同月桂氮酮起到促進(jìn)藥物吸收的作用，且較單用其中一種效果更好［7］。王建新等［8］的研究發(fā)現(xiàn)，3%的氮酮10%的丙二醇能顯著提高如意巴布劑中小檗堿的透皮滲透率。丙二醇亦可增加氮酮對(duì)丁香苦苷的滲透作用，二者合用有利于有效成分的整體吸收［9］。

本研究中還對(duì)比了洛索洛芬鈉的脂質(zhì)體凝膠和凝膠的滲透速率。前者的滲透速率為854.84 μg/h，明顯高于后者。洛索洛芬鈉脂質(zhì)體凝膠是洛索洛芬鈉局部用藥的有效藥物載體，相對(duì)于市場(chǎng)上的洛索洛芬鈉凝膠滲透速率更快，能在急性損傷中更快發(fā)揮消炎止痛作用，且穩(wěn)定性良好，經(jīng)光照、溫度、濕度試驗(yàn)，其含量及包封率均改變不大。提示洛索洛芬鈉脂質(zhì)體凝膠的保存條件應(yīng)在20～40℃，但濕度對(duì)其穩(wěn)定性的影響不大。

通過(guò)優(yōu)化其處方，調(diào)整卵磷脂與膽固醇的比例、氯仿與PBS的比例、PBS的pH、藥物與脂質(zhì)體的比例，能提高洛索洛芬鈉脂質(zhì)體包封率。脂質(zhì)體雖能大幅提高藥物經(jīng)皮滲透性能，但對(duì)于局部用制劑，具有一定的黏度和觸變性非常必要。但脂質(zhì)體缺乏這些性質(zhì)，故需加入一些凝膠劑或增稠劑，而這些附加劑往往影響脂質(zhì)體的理化性質(zhì)和釋藥性，從而影響療效。將其制成脂質(zhì)體凝膠，由于脂質(zhì)體分散在凝膠的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中，脂質(zhì)體間的融合被抑制，故穩(wěn)定性增加［10］。另外，羥苯丁酯為防腐劑，維生素E為抗氧化劑，且可穩(wěn)定脂質(zhì)體膜，減少藥物的泄露。脂質(zhì)體凝膠的制備過(guò)程中，脂質(zhì)體雖能透過(guò)皮膚，但到了皮膚深層組織卻很難滲入［11］。因此，通過(guò)優(yōu)化月桂氮酮、丙二醇、泊洛沙姆、油酸的比例，能進(jìn)一步提高其滲透速率。脂質(zhì)體在皮內(nèi)形成藥物儲(chǔ)庫(kù)向周圍緩釋游離的藥物而發(fā)揮其藥理作用，而釋放的藥物具體如何在體內(nèi)分布，尚需作進(jìn)一步的體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究證實(shí)。

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Preparation of Loxoprofen Sodium Liposomal Gel and Its Transdermal Permeation Kinetics

Zhang Lyuzhao，Wu Limeng，Liu Yingzhen
（Bao′an District People′s Hospital，Shenzhen，Guangdong，China 518101）

ObjectiveTostudythepreparationofloxoprofensodiumliposomegelandthetransdermalpermeationcharacteristics.MethodsBy optimizing the prescription of loxoprofen sodium liposome encapsulation to achieve the desired rate，the transdermal penetration rate was improved by optimizing the liposomal gel prescription.ResultsThrough the optimization，the loxprofen liposome was prepared with the percent encapsulation of 78.76%and the transdermal permeation rate was 854.84 μg/h.ConclusionThe preparation system of loxoprofen sodium liposome gel is feasible，and the quality is stable，which can improve the transdermal permeation rate and percent encapsulation by optimizing the prescription.

loxoprofen sodium；liposome；transdermal permeation

R943；R971+.1

A

1006-4931（2016）12-0028-04

2015年廣東省深圳市寶安區(qū)科技項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：2015002。

張呂釗（1982-），男，碩士研究生，研究方向?yàn)榕R床藥學(xué)，（電子信箱）zlz3740@126.com。

（2016-01-10；

2016-02-19）