p16和Ki-67蛋白，TLR3在宮頸病變分流診斷中的應(yīng)用

李彥霞

泰山醫(yī)學(xué)院附屬聊城市第二人民醫(yī)院婦科，山東聊城252601

p16和Ki-67蛋白，TLR3在宮頸病變分流診斷中的應(yīng)用

李彥霞

泰山醫(yī)學(xué)院附屬聊城市第二人民醫(yī)院婦科，山東聊城252601

目的評(píng)估p16和Ki-67蛋白，TLR3檢查在宮頸病變分流診斷中的臨床價(jià)值。方法整群選取該院2014年10月一2016年8月婦產(chǎn)科門診陰道鏡下活檢病理診斷各類宮頸病變153例分別進(jìn)行p16和Ki-67，TLR3檢測(cè)。采用免疫組化技術(shù)（S-P法）檢測(cè)p16及Ki-67，TLR3的表達(dá)。結(jié)果在慢性宮頸炎、CINI級(jí)、CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)中，p16陽(yáng)性率為13.21%、58.24%，96.25%、97.51%，Ki-67陽(yáng)性率為10.05%、61.22%、94.12%、96.05%，TLR3陽(yáng)性率為11.04%、62.32%、95.02%、97.05%，p16與Ki67，TLR3陽(yáng)性率呈遞增趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論P(yáng)16和Ki-67，TLR3對(duì)宮頸病變分流診斷有重要輔助診斷價(jià)值，精確指導(dǎo)宮頸病變的診斷與治療，預(yù)防宮頸癌的發(fā)生。

P16；Ki-67；TRL3；宮頸病變；篩查

宮頸癌是婦科腫瘤中僅次于乳腺癌的第二大惡性腫瘤［1］。目前，中國(guó)常用TCT結(jié)合HPV病毒檢測(cè)-陰道鏡檢查-宮頸組織病理活檢，對(duì)宮頸癌前病變有效地進(jìn)行宮頸LEEP刀手術(shù)，宮頸錐形切除術(shù)，仍存在過度治療問題［2］。隨著生物標(biāo)志物的日趨被關(guān)注，細(xì)胞周期抑制因子p16蛋白，核增殖抗原Ki-67，Toll樣受體3（TLR3）對(duì)宮頸高低級(jí)別病變鑒別有一定的指導(dǎo)意義。該文分析研究2014年10月—2016年8月該院收治的153例子宮頸炎、宮頸癌前病變中p16蛋白，Ki-67及 TLR3的表達(dá)及其相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

整群收集該院婦產(chǎn)科門診就診宮頸活檢診斷為慢性宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤變I-III級(jí)標(biāo)本共153例。由病理科醫(yī)師閱片。

1.2主要試劑及儀器

宮頸活檢組織均經(jīng)10%甲醛固定、24 h后石蠟包埋，連續(xù)切片，制成4 μm厚的切片。待免疫組化保存。應(yīng)用PV6000試劑盒免疫組化染色。

1.3評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

p16，Ki-67，TLR3陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞核和胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒。Ki-67著色細(xì)胞所占百分比≤5%者為（-），6%～25%為（+）、26%～50%為（++）、＞50%為（+++）。TLR3評(píng)分依據(jù)為著色度及陽(yáng)性比：0分無(wú)著色，1分淡黃色，2分棕黃色，3分棕褐色；1分陽(yáng)性細(xì)胞＜5%，2分5%～25%，3分26%～50%，4分≥50%。兩者相加：1分陰性（-），2分弱陽(yáng)性（+），3分中等陽(yáng)性（++），4分以上強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

1.4統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，采用秩和檢驗(yàn)，Spearman相關(guān)性分析等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1p16在宮頸炎及宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)與分布

p16蛋白CIN中主要定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)表達(dá)。p16在慢性宮頸炎對(duì)照組中幾乎不表達(dá)，CINⅠ組，CINⅡ組，CINⅢ組中陽(yáng)性率58.24%，96.25%，97.51%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表1。

表1　p16在宮頸各類型病變中表達(dá)

2.2Ki-67在宮頸炎及宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)與分布

Ki-67蛋白在CIN中主要定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)表達(dá)。Ki-67在慢性宮頸炎對(duì)照組中幾乎不表達(dá)，CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ組中陽(yáng)性率61.22%，94.12%，96.05%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表2。

表2　Ki-67在宮頸各類型病變中表達(dá)

2.3TLR3在宮頸炎及宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)與分布

TLR3主要于胞質(zhì)和（或）胞核內(nèi)表達(dá)。TLR3在慢性宮頸炎陽(yáng)性率為11.04%，CINⅠ組，CINⅡ組中，CINⅢ組陽(yáng)性率62.32%，95.02%、97.05%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表3。

表3　TLR3在宮頸各類型病變中表達(dá)

2.4宮頸各類型病變中p16與Ki-67，TLR3的相關(guān)性

Spearman相關(guān)性分析顯示：153例宮頸病變組織中p16及Ki-67，TLR3的表達(dá)均呈顯著正相關(guān)（rs=0.528，P＜0.01）。

3　討論

宮頸癌是常見的婦科腫瘤。隨著目前檢測(cè)水平的提高及人們防癌意識(shí)的提高，宮頸癌的發(fā)病率有所降低，早期癌及宮頸上皮內(nèi)瘤檢出率升高。隨著對(duì)生物標(biāo)記物的關(guān)注，p16，Ki-67及TLR3越來越引起人們的重視，有望明確診斷宮頸高低級(jí)別病變，輔助治療，避免過度治療［3-4］。

p16是細(xì)胞周期素依賴激酶的抑制因子，是一種抑癌基因。通過抑制細(xì)胞周期蛋白D催化反應(yīng)，干擾抑制cDI＜4或cDI＜6活性組織細(xì)胞進(jìn)入G/s期，無(wú)限制擴(kuò)增向腫瘤發(fā)展和轉(zhuǎn)化，發(fā)揮抑癌的作用。有研究發(fā)現(xiàn)［5］，99%高危型HPV陽(yáng)性的宮頸病變及宮頸癌中有p16表達(dá)。Dong等［6］研究159例惡性婦科腫瘤p16表達(dá)情況，p16在FIGO分期越高、分化越差的腫瘤中表達(dá)明顯。Ki-67是一種核抗原，與增殖細(xì)胞密切相關(guān)。隨著腫瘤的惡性程度增高，Ki-67的表達(dá)增強(qiáng)，預(yù)后越差。TLRⅢ是一種Ⅰ型跨膜蛋白。具有保持組織穩(wěn)態(tài)平衡、調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡等功能。可通過炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡，逃避機(jī)體的免疫識(shí)別，導(dǎo)致病毒持續(xù)生長(zhǎng)，HR-HPV下調(diào)TLR3表達(dá)，自然殺傷細(xì)胞活性降低，朗罕細(xì)胞減少，逃逸免疫，導(dǎo)致病毒感染及宮頸病變。該研究中，在慢性宮頸炎、CINI級(jí)、CINlI級(jí)、CINⅢ級(jí)中，p16陽(yáng)性率為13.21%、58.24%，96.25%、97.51%，Ki-67陽(yáng)性率為10.05%、61.22%、94.12%、96.05%，TLR3陽(yáng)性率為11.04%、62.32%、95.02%、97.05%，p16與Ki-67，TLR3陽(yáng)性率呈遞增趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Spearman相關(guān)性分析，TLR3與p16蛋白及Ki-67的表達(dá)均具有相關(guān)性（rs= 0.538，P＜0.01；rs=0.526，P＜0.01）。提示TLR3在宮頸各級(jí)病變轉(zhuǎn)化的過程中有重要作用。

該研究顯示，p16，ki-67在病變子宮頸中均有表達(dá)，隨著CIN級(jí)別的升高以及發(fā)生癌變，陽(yáng)性率逐漸升高。CINI級(jí)病變p16染色可見各級(jí)表達(dá)。p16陰性表達(dá)的CINI級(jí)病變可能持續(xù)或者退化，而p16彌漫強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)的CINI級(jí)病變進(jìn)展為CINII～I(xiàn)II級(jí)的風(fēng)險(xiǎn)較高。51例p16和Ki-67陰性病例無(wú)高級(jí)別CIN，提示p16和Ki-67均陰性可除外高級(jí)別CIN。3例高級(jí)別CIN病變p16顯示陰性，但Ki-67顯示陽(yáng)性；11例高級(jí)別CIN病變，Ki-67為陰性，但p16均為陽(yáng)性，說明單獨(dú)p16或Ki67用于診斷宮頸病變，有一定的漏診，聯(lián)合p16和Ki-67可以減少CIN的漏診。CINII級(jí)、CINIII級(jí)中p16與Ki-67多數(shù)為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，提示p16和Ki-67均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)支持高級(jí)別宮頸病變的診斷［7-8］。

有研究，不同病理學(xué)家在正常組織及CINI級(jí)診斷間只有30%及64%一致性，而CINⅡ級(jí)更是低于50%的一致性，隨著細(xì)胞分子學(xué)的發(fā)展及對(duì)標(biāo)志物的日趨關(guān)注，p16和Ki-67均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)支持高級(jí)別宮頸病變的診斷，提高了診斷的準(zhǔn)確性。

［1］Chih HJ，Lee AH，Colville L，et a1.A review of dietary preventionof human papillomavirus-related infection of the cervix and cervicalintraepithelial neoplasia［J］.Nutr Cancer，2013，65（3）：317-328.

［2］郭超楠.全自動(dòng)DNA倍體分析系統(tǒng)在宮頸癌早期診斷中的應(yīng)用研究［D］.張家口：河北北方學(xué)院，2012.

［3］梁凌云，杜輝，王純，等.深圳人群人乳頭瘤病毒病毒感染亞型分布與宮頸上皮內(nèi)瘤變情況橫斷面調(diào)查［J］.北京大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2013，45（1）：114-118.

［4］許振國(guó)，程烽，林建著，等.p16INK4A作為分子標(biāo)志物在子宮頸癌篩查中的應(yīng)用［J］.中國(guó)婦幼保健，2013，28（19）：3109-3111.

［5］傅小一，張子雯.p16INK4A蛋白及HPV感染與宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸鱗癌的相關(guān)性分析［J］.中國(guó)老年性雜志，2014，34（15）：4138-4140.

［6］Dong Y，Walsh MD，McGuckin MA，et a1.Increased expression of cyclin-dependent kinase inhibitor 2（CDK2A）gene product pl 6iNK4 in ovarina cancer is associatedwith prognosis and unfavourable prognosis［J］.Int JCancer，1997，74（1）：57.

［7］赫芳芳，高英，魏力.p16、Ki-67在宮頸鱗狀上皮病變分級(jí)診斷中的意義［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2016（8）：1271-1274.

［8］周麗.液基薄層細(xì)胞檢查在宮頸病變患者診斷中的應(yīng)用價(jià)值［J］.當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2013（18）：112-113.

Application of p16，Ki-67 Protein and TLR3 in Shunt Diagnosis of Cervical Lesions

LI Yan-xia
Gynecology of the Second People's Hospital of Liaocheng，Affilicated to Taishan Medical Sciences Univercity，Liaocheng，Shandong Province，252601 China

Objective To evaluate the application of p16，Ki-67 protein and TLR3 in shunt diagnosis of cervical lesions. Methods Group selection from October 2014 to August 2016 153 specimens onfirmed by pathological diagnosis of cervical lesions and can not determine the level of cervical lesions after Biopsying under colposcope.p16，Ki-67，TLR3 were detected with Envision methode.Results In chronic cervicitis，CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ，the positive expression rate of p16 for 58.24% and 13.21%and 96.25%and 97.51%，the positive rate of Ki-67 was 10.05%and 61.22%and 94.12%and 96.05%，TLR3 positive rate was 11.04%，62.32%，95.02%，97.05%，p16 and Ki-67，TLR3 positive rate was increased，the difference is significant.Conclusion P16 and Ki-67，TLR3 is important auxiliary diagnostic value for shunt in the diagnosis of cervical lesions，accurate guide the diagnosis and treatment of cervical lesions，prevent the happening of the cervical cancer.

P16；Ki-67；TRL3；Cervical lesions；Screening

R711

A

1674-0742（2016）10（a）-0026-03

10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.28.026

李彥霞（1981.2-），女，山東臨清人，本科，主治醫(yī)師，研究方向：婦科腫瘤。

（2016-09-10）