自制電化學發光檢測 N末端B型利鈉肽原室內質控品及應用評價

薛一峰，黃建榮

(南京醫科大學附屬無錫市人民醫院檢驗科，江蘇無錫 214023)

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·論著·

自制電化學發光檢測 N末端B型利鈉肽原室內質控品及應用評價

薛一峰，黃建榮

(南京醫科大學附屬無錫市人民醫院檢驗科，江蘇無錫 214023)

目的探討制備電化學發光檢測N末端B型利鈉肽原(NT-proBNP)室內質控品的方法。方法收集NT-proBNP檢測結果較高的冠心病患者血清及NT-proBNP正常者血清，分為低值組和高值組。進行預期靶值及批內重復精度測定、批內天間不精密度測定、穩定性試驗，并與羅氏公司原廠質控品比較，評估自制室內質控品與原廠質控品檢測結果的偏倚是否在可接受范圍內。結果自制NT-proBNP質控品日內重復性和穩定性良好、不精密度符合臨床檢測標準，在控范圍明顯小于羅氏公司提供的質控允許范圍，可滿足室內質控要求。結論自制NT-proBNP室內質控品可以替代進口原配質控品。

N末端B型利鈉肽原；室內質控品；檢測

N末端B型利鈉肽原(NT-proBNP)作為心力衰竭(HF)的標志物，已被廣泛應用于HF的診斷、鑒別診斷與病死評估中，對HF、心肌梗死等疾病的預后、危險度分級、手術時機選擇也有較高的判斷價值，其臨床應用也逐漸拓展到治療領域[1-2]。臨床驗證NT-proBNP是目前管理HF的最佳生化指標，其檢測結果為臨床診療提供客觀依據[3-5]。目前臨床上用于NT-proBNP的檢測方法多為電化學發光法，其中Cobas E601 采用電化學發光技術、生物素-鏈霉親和素技術及二維條碼技術，具有高敏感性和特異性、可檢測范圍寬、檢測速度快、標記物穩定無污染、結果準確穩定、操作簡便、自動化程度高等諸多優點，精密度和穩定性均可適合臨床需求。自2009年該科使用Roche 公司的Cobas e601全自動電化學發光分析儀進行NT-proBNP檢測，現探討自制NT-proBNP室內質控品，并對其穩定性、重復性進行評價，報道如下。

1　材料與方法

1.1儀器與試劑Roche 公司的Cobas e601全自動電化學發光分析儀及其配套NT-proBNP試劑、室內質控品。

1.2自制質控品

1.2.1收集多份NT-proBNP檢測結果較高的住院冠心病患者血清及NT-proBNP正常者血清，要求無溶血、無黃疸、無脂濁，乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒(HCV)、人類免疫缺陷病毒(HIV)、梅毒均陰性，初步定值，分為低值組和高值組。

1.2.2參照文獻[6-7]的方法將2份血清于65 ℃滅活10 h，1 500 r/min 離心10 min，取上清液，并加入5‰的疊氮鈉防腐，分裝到1 mL的Eppendorf管中，每支0.5 mL，保存于-80 ℃冰箱。

1.7統計學處理采用SPSS 17.0 統計軟件進行數據分析，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2　結　　果

2.12種自制不同濃度的NT-proBNP質控品日間重復性檢測不同濃度的NT-proBNP質控品日間重復性良好。見表1。

表1　　2種不同濃度NT-proBNP質控品日間重復性檢測(n=20，pg/mL)

2.22種自制不同濃度的NT-proBNP質控品批內天間不精密度檢測22 d不精密度符合臨床檢測標準。見表2。

表2　　2種不同濃度NT-proBNP質控品批內天間不精密度檢測(n=22，pg/mL)

2.32種不同濃度的NT-proBNP質控品穩定性檢測分別以1～4個月的累積、SD作為中心線，觀測1～4個月積累和SD的走勢圖，未發現明顯的數據呈連續上升或下降趨勢，同時也未發現有數據升高或降低超過±2SD。見表3。

表3　　2種不同濃度NT-proBNP質控品穩定性檢測(pg/mL)

2.4自制質控品與羅氏原廠質控物比較羅氏公司的質控物以靶值±18%為允許范圍，而自制質控物的在控范圍，經計算得出為靶值±8.3%～±8.9%，自制質控品的在控范圍明顯小于羅氏公司提供的質控允許范圍，說明完全可以滿足室內質控要求。經過4個月的評估,自制NT-proBNP質控品具有良好的重復性和穩定性,在-80 ℃能較長時間保持穩定。見表4。

表4　　自制質控品與羅氏原廠質控品靶值及在控范圍比較(pg/mL)

3　討　　論

自有關學者從豬腦內分離得到B型利鈉肽(BNP)和首次在人類血漿中發現NT-proBNP以來，大量基礎和臨床研究迅速推動其在臨床中的應用。包括BNP和NT-proBNP在內的利尿肽家族在維持人體循環系統的容量、滲透壓、壓力穩態方面起著重要作用，也是近年來最受關注的心血管功能性標志物[8]。BNP和NT-proBNP有相同的生物學來源，但生物學效應和臨床意義不完全相同。心肌細胞受刺激后產生含134個氨基酸的B型利鈉肽原前體(Pre-proBNP)，隨后形成含108個氨基酸的BNP前體(proBNP)，后者在內切酶的作用下裂解生成2個產物，即BNP和NT-proBNP[9]。BNP由第77～108個氨基酸殘基組成，半衰期短(22 min)，抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統和腎上腺素活性，體外穩定性差，具有強力的利鈉、利尿、擴血管和降壓作用；NT-proBNP由第1～76個氨基酸殘基組成，半衰期較長(2 h)，無生物活性，體外的穩定性長(> 48 h)。當心肌受到牽張刺激時將兩者同時釋放入血液循環中，NT-proBNP濃度相對較穩定，有效檢測時間長，血液中含量較高(比BNP 高約16～20 倍)，臨床檢測多針對相對容易的NT-proBNP[10]。臨床檢測NT-proBNP大多采用電化學發光免疫分析法，是免疫分析未來發展方向。

近年來，隨著臨床實驗診斷技術和檢測水平的提高，全面質量控制越來越受到各方面的關注與重視。包括Cobas e601在內的各種進口全自動電化學發光檢測系統在我國應用非常廣泛，Cobas e601所需試劑、質控品等各種耗材均需進口，成本較高。而室內質控的目的在于監測檢測結果的精密度以提高常批間和批內檢測結果的一致性，因此質控物是調查檢驗分析儀器質量控制和實驗室檢驗結果準確度必不可少的物質，其質量與應用是否得當，直接關系實驗室檢驗結果與檢測成績。臨床實驗室改進修正法案最終規則的標準493.1256中要求：實驗室可使用商品化定值的質控品，其定值是與實驗室所使用方法和儀器有關，實驗室需要對其定值進行驗證。有學者認為實驗室不僅可以購買商品化的質控品，也可以用實驗室剩余的檢測樣品制備質控品，國內已有研究表明自制室內質控品可以替代進口原配質控品[11]，本研究也證實。因此，在日常工作中可以嘗試自制各種室內質控品，降低運行成本，提高經濟效益。

[1]Janda S,Swiston J.Diagnostic accuracy of pleural fluid NT-pro-BNP for pleural effusions of cardiac origin:a systematic review and meta-analysis[J].BMC Pulm Med,2010,78(11):58-59.

[2]趙艷輝，叢洪良．心衰患者血清胱抑素C、嗜鉻粒蛋白A與心室重構的關系[J]．天津醫科大學學報，2015，21(3)：193-195．

[3]Sokhanvar S,Shekhi M,Mazlomzadeh S,et al.The relationship between serum NT-Pro-BNP levels and prognosis in patients with systolic heart failure[J].Journal of Cardiovascular and Thoracic Research,2011,3(2):57-61.

[4]Lin JF,Hsu SY,Wu S,et al.QT interval independently predicts mortality and heart failure in patients with ST-elevation myocardial infarction[J].Int J Med Sci,2015,12(12):968-973.

[5]Knebel F,Schimke I,Pliet K,et al.NT-ProBNP in acute heart failure:correlation with invasively measured hemodynamic parameters during recompensation[J].J Card Fail,2005,11(5 Suppl):S38-S41.

[6]鄭懷競．臨床免疫實驗室質量管理[M].北京：北京醫科大學中國協和醫科大學聯合出版社，1997：68．

[7]王翠，王云龍，明亮，等．N端前腦鈉肽穩定保存體系的優化[J]．中國免疫學雜志，2015，31(4)：517-521．

[8]LowenthalA,CamachoBV,LowenthalS,et al.Usefulness of B-Type natriuretic peptide and N-Terminal Pro-B-Type natriuretic peptide as biomarkers for heart failure in young children with single ventricle congenital heart disease[J].American Journal of Cardiology,2012,109(6):866-872.

[9]Clerico A,Delme RS,Giannessi D.Measurement of cardiac natriuretic hormones(ANP,BNP and related peptides)in clin-ical practice:The need for a new Generation of immunoassay methods[J].Clin Chem,2000,46(10):1529-1535.

[10]Yeo KJ.Multicenter evaluation cf the Roche NT-proBNP assayand comparision to the Biosite Triage BNP assay[J].Clin Chem Acta,2003(338):107-115.

[11]姜新華，趙燕飛，吳小明，等．自制雌二醇性激素室內免疫質控制品及其性能評價[J]．檢驗醫學，2010，25(5)：403-404．

The comparison and evaluation of the self-developed control products and the internal quality control products detection of NT-proBNP by electrochemiluminescence

XUEYifeng,HUANGJianrong

(DepartmentofClinicalLaboratory,WuxiPeople′sHospitalAffiliatedofNanjingMedicalUniversity,Wuxi,Jiangsu214023,China)

ObjectiveTo investigate the preparation of internal quality control products of NT-proBNP by electrochemiluminescence detection.MethodsThe serum with high and normal levels of NT-proBNP were collected and divided into low-value group and high -value group.The expected target value，inter-batch duplicability,imprecision and the stability within batch were detected.After effective verification,we evaluated the bias between self developed internal quality control products and Roche factory quality control materials by comparative test.ResultsThe repeatability,stability and imprecision of self developed NT-proBNP were all appropriate to internal quality control products and meeting meet the clinical testing standards.The control range was significantly less than that permitted by Roche,so it can meet the internal quality control requirements.ConclusionThe self developed NT-proBNP internal quality control products can replace the imports quality control products.

NT-proBNP;internal quality control products;detection

薛一峰，女，副主任技師，主要從事臨床免疫學研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.023

A

1673-4130(2016)19-2718-03

2016-02-18

2016-04-13)