2種化學發光法檢測梅毒螺旋體特異性抗體陽性的臨床探討

林　博，金京南，張延江，張靜冉

(北京中醫藥大學附屬第二臨床醫院/東方醫院檢驗科，北京 100078)

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·論著·

2種化學發光法檢測梅毒螺旋體特異性抗體陽性的臨床探討

林博，金京南，張延江，張靜冉

(北京中醫藥大學附屬第二臨床醫院/東方醫院檢驗科，北京 100078)

目的采用梅毒螺旋體明膠凝集試驗(TPPA)對2種化學發光方法分別檢測梅毒螺旋體特異性抗體陽性標本并進行復檢確認，確定2種方法(≥95%)真陽性結果的S/CO值。方法2014年10月至2016年1月該院門診及住院術前、輸血前梅毒螺旋體特異性抗體陽性標本，雅培檢測陽性(S/CO值1.02～39.29)145例，羅氏檢測陽性(S/CO值1.4～33.07)24例，共169例。169例梅毒螺旋體特異性抗體陽性標本同時使用2種化學發光方法檢測，并應用TPPA方法進行復檢確認，將標本S/CO值排序分段統計陽性預測值，確定(≥95%)真陽性結果的S/CO值。結果169例陽性標本經TPPA復檢表明，雅培陽性符合率為78.7%，羅氏為81.3%。雅培S/CO≥8時，羅氏S/CO≥14時，陽性預測值均為100%。結論雅培檢測結果S/CO≥8，羅氏S/CO≥14時，可作為(≥95%)真陽性結果的S/CO值。

梅毒螺旋體；抗體；梅毒螺旋體明膠凝集試驗；化學發光法；陽性預測值

梅毒是由蒼白密螺旋體感染引起的性傳播疾病，通過人類黏膜或有破損的皮膚直接接觸患者感染性病灶而傳播，其臨床表現多樣，病程發展緩慢，可導致系統性的病變。據文獻報道2000～2013年我國梅毒流行呈上升趨勢，13年間年均增長達13．37%[1]。梅毒還可以通過輸血傳播，目前已在國內外作為常規術前輸血前的檢查項目[2]。實驗室以梅毒血清學檢測最為常見，分為非特異性梅毒抗體檢測和特異性梅毒抗體檢測。近年來，隨著免疫標記技術的發展，化學發光法呈現靈敏度高、線性范圍寬等優點，且全自動化儀器具有高通量、隨機進樣、操作簡單等優勢[3]。但隨著其靈敏度的提高，假陽性率也隨之增加。現通過梅毒螺旋體明膠凝集試驗(TPPA)方法對化學發光方法檢測陽性的結果進行復檢確認，確定(≥95%)真陽性結果的S/CO值，為陽性結果判定提供參考。

1　資料與方法

1.1一般資料2014年10月至2016年1月該院門診及住院術前、輸血前梅毒螺旋體特異性抗體陽性標本(雅培S/CO值1.02～39.29，羅氏S/CO值1.4～33.07)為研究對象，共169例。男83例，女86例，年齡3～94歲。所有標本采集均為空腹條件下抽取靜脈血4 mL，313 r/min離心15 min，當日檢測分裝，-20 ℃凍存。

1.2儀器與試劑采用美國雅培公司的I2000SR全自動化學發光微粒子免疫分析儀，試劑為其配套Syphilis TP及相關校準品、質控品，原理為微粒子化學發光(CMIA)；德國羅氏診斷公司的Cobas e601全自動化學發光免疫分析儀，試劑為其配套Syphilis TP及相關校準品、質控品，原理為電化學發光(ECLIA)；判斷標準均為S/CO≥1.0為陽性，<1.0為陰性。TPPA試劑盒(賽樂迪亞)由日本富士瑞必歐株式會社提供；判斷標準按試劑說明書肉眼判讀結果,反應孔4 中細胞沉積在孔中央呈光滑紐扣狀為陰性,反應孔4出現凝集呈不規則沉積為陽性。振蕩器、離心機、移液器等實驗器材備用。

1.3方法收集雅培微粒子化學發光試劑檢測梅毒螺旋體特異性抗體陽性標本(S/CO值1.02～39.29)145例，羅氏電化學發光試劑檢測梅毒螺旋體特異性抗體陽性標本(S/CO值1.4～33.07)24例，169例梅毒螺旋體特異性抗體陽性標本同時采用2種化學發光方法檢測，再使用TPPA方法復檢確認。嚴格按照說明書操作，將標本S/CO值排序分段統計陽性預測值，以確定(≥95%)真陽性的S/CO值。

2　結　　果

2.12種方法檢測結果與TPPA檢測結果的符合率169例標本經TPPA確認陽性122例，陰性47例。雅培與TPPA的符合率為80.47%；羅氏與TPPA的符合率為83.49%。雅培陽性結果中,TPPA檢測陰性33例，占21.3%；羅氏陽性結果中,TPPA檢測陰性28例，占18.67%。 見表1。

表1　　2種方法檢測結果與TPPA檢測結果的符合率(n)

表2　　2種方法檢測結果S/CO值分段與TPPA結果比較(n)

表3　　S/CO值分段統計2種方法檢測結果的陽性預測值(%)

2.22種方法檢測結果與TPPA檢測結果比較169例陽性結果經TPPA確認后，雅培檢測S/CO值1～3的19例，TPPA及羅氏檢測結果為陰性；羅氏檢測S/CO值1～6.4的14例，TPPA及雅培檢測結果為陰性。TPPA檢測陰性標本中雅培檢測結果S/CO值最大7.98，羅氏檢測結果S/CO值最大12.05。將2種方法檢測結果的S/CO值分段統計陽性預測值，S/CO值1～3雅培陽性預測值為42.85%，羅氏為0%；S/CO值3.01～5雅培陽性預測值為68.18%，羅氏為27.27%；S/CO值5.01～8雅培陽性符合率為92.59%，羅氏為70%；當雅培結果S/CO≥8時，羅氏結果S/CO≥14時，陽性預測值均為100%。見表2、3。

3　討　　論

梅毒實驗室檢查是診斷梅毒的重要依據之一。梅毒螺旋體侵襲機體后，主要產生2類抗體,一類為梅毒螺旋體特異性抗體[4],另一類是抗梅毒螺旋體破壞患者組織后釋放的某些物質抗體,稱為反應素,可用于梅毒療效觀察、隨訪和復發的診斷[5]。由于其檢測采用的抗原為非特異性抗原,可與其他病原菌刺激機體產生的抗體相結合，呈生物學假陽性反應[6]。目前，臨床上廣泛應用的梅毒篩查試驗以檢測梅毒螺旋體特異性抗體居多，但有文獻報道吸光度在0～0.15之間尤其是0.10～0.15之間的弱陽性血清會被漏檢，有一定的局限性[7]。化學發光法是近年來隨著梅毒螺旋體基因工程抗原的研制成功而建立的檢測梅毒螺旋體特異性抗體的方法，有研究報道化學發光法的敏感性可達98.7%～100.0%[8-9]。但敏感性提高的同時也造成假陽性結果，尤其是梅毒低發流行地區，假陽性發生率會更高。

本研究采用特異性較高的TPPA方法對敏感性較高的化學發光方法檢測陽性的結果進行復檢確認，確定預示(≥95%)真陽性S/CO值。本組結果表明，S/CO值較低時，2種化學發光方法檢測結果有較大差異，同一份樣本檢測結果一陰一陽時，TPPA結果均為陰性，提示S/CO值較低時假陽性率較高。可能原因為2種方法采用的重組抗原種類及數量有關，且敏感性較高。本組結果顯示，同一例標本使用2種方法檢測結果均為陽性，但TPPA檢測結果均為陰性。原因可能有2點：(1)化學發光法特異性的局限性造成假陽性，如機體的生理狀態發生改變(老年人、孕婦等)或由某些疾病(傳染性疾病、自身免疫疾病、惡性腫瘤等)造成的生物性假陽性[10]。(2)TPPA方法敏感性不高，需加做其他特異性確證試驗，如熒光密螺旋體抗體吸附試驗(FTA-ABS)或免疫印跡試驗(WB)，以提高梅毒抗體檢測的特異性和敏感性。本研究使用2種化學發光方法對169例梅毒螺旋體抗體初篩陽性結果同時進行檢測，再經TPPA復檢確認，雅培檢測結果最大S/CO值7.98，羅氏檢測結果最大S/CO值12.05，TPPA結果仍有陰性。當雅培檢測結果S/CO≥8時，羅氏檢測結果S/CO≥13時，TPPA結果均為陽性，陽性預測值為100.0%，提示本組梅毒螺旋體特異性抗體≥95%為真陽性的判斷值。

根據本實驗結果對梅毒螺旋體特異性抗體實驗室檢測的流程及策略進行了完善，初次檢測采用敏感性較高的化學發光方法進行篩查，如檢測結果大于該判斷值，可直接報告陽性結果，但仍有假陽性可能，需在報告單中將實驗方法的影響因素、局限性等相關信息進行注釋，以便臨床醫師對篩查結果更加客觀、準確地判斷。如篩查陽性結果小于該判斷值，需通過TPPA進行復檢確認，如與復檢結果一致，可將2種檢測方法在報告單中聯合報告，并注明實驗方法的影響因素、局限性等相關信息。如與復檢結果不一致，可加做其他特異性試驗，如FTA-ABS、WB及梅毒非特異性試驗加以佐證。單獨檢測梅毒螺旋體特異性抗體并不能區分梅毒現在與既往的感染情況，所以梅毒的篩查與診斷，實驗室血清學檢測雖關鍵，但不同實驗診斷方法又各有特點及局限性，還需從多方面(病史、臨床表現等)綜合從而加以判斷。

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Evaluation of two kinds of chemiluminescence detection of Treponema pallidum antibody-positive samples

LINBo，JINJingnan，ZHANGYanjiang，ZHANGJingran

(DepartmentofClinicalLaboratory，DongfangHospitalAffiliatedtoBeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100078,China)

ObjectiveTo analyze the true-positive results (≥95%) S/CO value of Treponema pallidum specific antibody (anti-TP) positive samples caused by 2 different chemiluminescence detection assay in comparison with Treponema Pallidum Particle Assay (TPPA).MethodsWe collected the Treponema pallidum specific antibody positive samples of outpatient and hospitalization from October 2014 to January 2016 in Peking union medical college hospital as the research objects.There were 145 positive cases of Abbott laboratories (S/CO value of 1.02 to 39.29),24 positive cases of Roche (S/CO value of 1.4 to 33.07).The 169 cases of Treponema pallidum specific antibody positive samples were detected with two methods of chemiluminescence detection at the same time,TPPA was performed as repetition and confirmed test.Gathering and sorting the statistics of the positive predictive value segmented ordered by specimen S/CO value,to determine 95% or higher S/CO value of true positive results.ResultsAfter retested and confirmed by TPPA of the 169 positive cases,the Abbott positive coincidence rate was 78.7%,the Roche positive coincidence rate was 81.3%.When the S/CO value of Abbott ≥ 8 and the S/CO value of Roche≥14,the positive predictive value was 100%.ConclusionWhen the S/CO value of Abbott ≥ 8 and the S/CO value of Roche≥14,the S/CO value can be used as the true positive results(≥95%).Abbott laboratories results S/CO value ≥8,Roche test results S/CO value ≥13,it is a 95% or higher S/CO limit of true positive results.

treponema pallidum；antibody；TPPA；CLIA；positive predictive value

林博，女，主管檢驗師，主要從事臨床免疫檢驗研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.006

A

1673-4130(2016)19-2675-03

2016-02-16

2016-04-11)