夏桑菊顆粒中迷迭香酸的含量測定

羅勇+方鐵錚+姚江雄+許招懂+夏伯候+林麗美+李亞梅

【摘 要】 目的：夏枯草為夏桑菊顆粒的君藥，研究檢測夏枯草主要藥效成分迷迭香酸來建立夏桑菊的質控指標。方法：采用HPLC方法對夏桑菊中迷迭香酸含量進行測定，檢測條件為色譜柱：Zorbax Eclipse XDB-C18；流動相：乙腈-1%醋酸（19∶81）洗脫；流速：1.0ml/min；柱溫：40℃；檢測波長：329nm；進樣量：10μl。結果：檢測得到迷迭香酸含量平均值為0.33mg/g，該方法的平均回收率為101.01%，線性方程為Y=2376737X-3261。結論：為提高夏桑菊顆粒質量標準，對處方中夏枯草以迷迭香酸計的含量進行研究，為更好的監控和評價夏桑菊顆粒的質量提供實驗依據。

【關鍵詞】 夏桑菊顆粒；迷迭香酸；HPLC法

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）12-0044-03

Abstract：Objective Prunella valgaris is the monarch drug of Xiasangju granules， in this study to establish a quality control for Xiasangju granules by detecting rosmarinic acid in Prunella.Methods Determine the rosemary acid in Xiasangju granulesby HPLC，the detection conditions，Column Zorbax Eclipse XDB-C18； mobile phase： acetonitrile-1% acetic acid （19∶81） to give； flow rate： 1.0ml/min； column temperature： 40℃； detection wavelength： 329nm； injection volume： 10μl.Results The average content of rosemary acid was 0.33mg/g， the average recovery of the method was 101.01%， the linear equation was Y=2376737X-3261.Conclusion This study can improve Xiasangju pranules quality standards， prescription Prunella meter with rosemary acid content were studied to provide a scientific basis for better quality monitoring and evaluation Xiasangju granules.

Keywords：Xiasangju granules Rosmarinic Acid UV HPLC

夏桑菊顆粒為夏枯草、桑葉、野菊花三味藥材經加工制成，具有清肝明目、疏風散熱、除濕痹、解瘡毒的功效、用于風熱感冒、目赤頭痛、高血壓、頭暈耳鳴、咽喉腫痛、疔瘡腫毒等癥，并可作清涼飲料。夏桑菊顆粒原標準收載于中華人民共和國衛生部標準（部頒標準）第15冊，標準編號：WS3-B-2967-98。原標準收載了該藥品的處方、制法、性狀、鑒別、檢查、主治與功能、用量與用法、規格和貯藏九個項目。根據國家藥品標準提高行動計劃的要求，對夏桑菊顆粒原標準進行修訂。由于夏桑菊顆粒的君藥是夏枯草，參考2010版《中國藥典》選擇夏枯草主要藥效成分迷迭香酸為質控指標[1]，目前對夏枯草中迷迭香酸的含量測定已有研究[2-4]。迷迭香酸具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗炎活性和免疫抑制活性、抗血栓等[5-7]作用。2010年版《中國藥典》一部夏枯草質量標準已制定了迷迭香酸的含量測定方法。為提高夏桑菊顆粒質量標準，對處方中夏枯草以迷迭香酸計的含量進行研究，為更好的監控和評價夏桑菊顆粒的質量提供科學依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Shimadzu LC-20AT液相色譜儀（含柱溫箱、四元梯度系統、帶恒溫的自動進樣器、二極管陣列檢測器、LCsolution色譜工作站）；Millipore Simplicity 185純水器；BP211D電子天平（Sartorius公司）；HN-1006超聲清洗儀。

1.2 材料 迷迭香酸（批號：Lot#0001432843，SIGMA-ALDRICH）；夏桑菊顆粒（廣州星群（藥業）股份有限公司、廣州花城制藥廠、廣西億康藥業股份有限公司等）；乙腈、醋酸、甲醇均為色譜純，水為自制超純水，其余試劑為分析純。

2 方法

2.1 色譜條件 色譜柱：Zorbax Eclipse XDB-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：乙腈-1%醋酸（19∶81）洗脫；流速：1.0ml/min；柱溫：40℃ ；檢測波長：329nm；進樣量：10μl。理論塔板數以迷迭香酸計不應低于5000，在選定的條件下分離度為3.52。見圖1。

2.2 對照品溶液制備 精密稱取迷迭香酸對照品適量，加甲醇使溶解，制成每1ml含迷迭香酸20μg的溶液，即得。

2.3 樣品溶液制備 本品研細，取2.5g，精密稱定， 置50ml容量瓶中，加入75%甲醇40ml，超聲30min（功率250W，頻率33kHz）溶解，放冷后，補加75%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，作為樣品溶液。

2.4 陰性對照液制備 按處方組成，取除夏枯草外的其余藥味，按工藝要求制成不含迷迭香酸的夏桑菊顆粒。按“2.3”項下的方法進行制備，即得。

2.5 標準曲線 精密稱取迷迭香酸對照品10.03mg，加甲醇定容到50ml，得濃度為194.58μg/ml的迷迭香酸對照品溶液；精密吸取濃度為194.58μg/ml的迷迭香酸對照品溶液5ml，加甲醇定容到50ml，得濃度為19.46μg/ml的迷迭香酸對照品溶液；再精密吸取濃度為19.46μg/ml的迷迭香酸對照品溶液5ml，加甲醇定容到50ml，得濃度為1.95μg/ml的迷迭香酸對照品溶液。將不同濃度的對照品溶液分別進5、10μl，測得迷迭香酸峰面積。以迷迭香酸的進樣量（μg）x為橫坐標、迷迭香酸的峰面積Y為縱坐標，繪制標準曲線。得回歸方程：Y=2376737X-3261，R2=1.00000，結果表明：迷迭香酸在0.01946～1.94582μg范圍內呈良好的線性關系。

2.6 精密度試驗 取同一對照樣溶液重復進樣測定6次。結果，峰面積的平均值為366926.5，RSD為0.73%，表明該方法儀器精密度良好。

2.7 重復性試驗 取同一批號為IA10378批夏桑菊顆粒，按供試品溶液配制方法，平衡操作配制6份，并依法測定。結果，測得含量平均值為0.33mg/g，RSD為0.63%。表明該方法重復性良好。

2.8 準確度試驗 取夏桑菊顆粒（批號：IA10378，含迷迭香酸0.33mg/g），粉碎成細粉，分別取1.25g，精密稱定，置6個50ml容量瓶中，分別精密加入適量迷迭香酸對照品，按供試品溶液配制方法配制，依法測定，計算回收率。結果，測得平均回收率為101.01%，RSD為0.35%，表明該法準確度良好。

2.9 穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別在1、2、3、4、5、6、7、8、12、18、24h進樣檢測，結果測得該樣品含迷迭香酸的平均含量為0.33mg/g，RSD為0.76%。結果表明在24h內供試樣品的穩定性良好。

2.10 樣品的測定 在“2.1”色譜條件下，依法檢測“2.3”的樣品溶液，按外標法計算迷迭香酸的含量，結果見表1。

3 討論

3.1 提取條件 首先對超聲提取及回流提取進行對比考察，結果在提取率相同的條件下，超聲提取具有用時短、操作方便等優點，因此選用甲醇超聲提取。為充分提取樣品中迷迭香酸，實驗以提取溶劑、提取時間、溶劑量作為3因素進行提取方法正交試驗篩選，由正交試驗直觀分析結果表明，3因素對提取影響順序為，溶劑量>提取時間>提取溶劑，確定選用溶劑量為50ml，超聲30min，因提取溶劑對含量影響無顯著性差異，在為75%甲醇中樣品顆粒可全溶解，因此選用75%甲醇提取。

3.2 波長的選擇 取迷迭香酸對照品適量，加入甲醇溶液配成對照品溶液，于紫外分光光度計上在190～400nm進行掃描，迷迭香酸對照品在329nm處有最大吸收，選取329nm作為檢測波長。

3.3 流動相選擇 研究嘗試了甲醇-水、乙腈-1%醋酸、乙腈-0.1%磷酸等流動相，結果發現采用乙腈-1%醋酸溶液（19%～81%）水進行分析，所得色譜的分離較好，峰型對稱。

3.4 不同色譜柱的比較 取同一批號為IA10378批夏桑菊顆粒，按供試品溶液配制方法，平衡操作配制3份，分別用Zorbax Eclipse XDB-C18、Gemini 5μm C18 110A、Hypersil ODS-2三種品牌的色譜柱測定，結果用三種品牌的色譜柱測定同一批號為IA10378的夏桑菊顆粒的迷迭香酸含量為3.36、3.27、3.22，RSD為2.16%。結果表明，既定的色譜條件，均適用于上述的色譜柱。

3.5 含量限度的確定 研究考察了星群公司近期樣品、3年有效期及過期1年內的有糖及無糖型夏桑菊留樣中迷迭香酸含量情況，結果樣品中迷迭迭香酸含量均不低于2.0 mg/包。實驗同時考察了其他19個不同生產廠家夏桑菊中迷迭香酸含量情況，結果樣品中迷迭香酸含量波動較大（0.01～5.7mg/包）。考慮大生產及原材料藥材的波動等因素影響，藥典規定夏枯草藥材迷迭香酸含量不得低于0.2%，一般轉移率不得少于20%，根據處方計算迷迭香酸含量應不得低于2mg/包。

參考文獻

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（收稿日期：2016.04.29）