p53、E-cad在皮膚鱗癌中的表達及意義

彭　聰,叢憲玲,楊宏鳳,孫鴻雁,毛瑞濤

(吉林大學中日聯誼醫院,吉林 長春130033)

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p53、E-cad在皮膚鱗癌中的表達及意義

彭聰,叢憲玲,楊宏鳳,孫鴻雁,毛瑞濤*

(吉林大學中日聯誼醫院,吉林 長春130033)

鱗狀細胞癌(SCC)為一種起源于表皮或皮膚附屬器角質細胞的惡性上皮性腫瘤，好發于皮膚及被覆鱗狀上皮部位，如喉、食管、肺、宮頸等。多種惡性腫瘤的發生、發展及侵襲轉移都與p53蛋白有密切關聯，但是對于皮膚鱗狀細胞癌中p53蛋白表達情況的研究報道較少。上皮性鈣黏蛋白(cad)為一種分布于所有的上皮組織中跨膜糖蛋白，具有促進組織結構完整性和極性的積極作用，但在皮膚鱗癌中的表達水平尚不明確。

1　材料與方法

1.1材料標本來自2011年1月至2015年1月間吉林大學中日聯誼醫院皮膚科和病理科的門診手術切除及術中病理獲取的皮膚鱗狀細胞癌石蠟標本。篩選所有標本，剔除曾經復診及接受過其他任何治療的患者，并經常規HE染色，專業病理醫師閱片除外皮膚轉移癌后，共計26例標本納入皮膚鱗癌組，其中男16例，女10例，年齡17至89歲，平均年齡56.85±18.80歲。正常對照組標本取自中日聯誼醫院皮膚科門診手術切除的正常皮膚標本，共計21例，其中男15例，女6例，年齡20至72歲，平均年齡48.61±14.89歲，正常皮膚組與皮膚鱗癌組在年齡及性別構成等方面均無顯著性差異(所有標本的來源均符合倫理學要求)。

1.2方法p53鼠抗人單克隆抗體(MAB-0674)，E-cad鼠抗人單克隆抗體(MAB-0589)，即用型免疫組織化學UltraSensitiveTM SP試劑盒，DAB顯色試劑盒(均購自福州邁新公司)。按試劑盒說明書操作。所有皮膚鱗癌組織標本均采用完全切除的方式。將皮膚鱗癌組織和正常皮膚組織分別浸入4%多聚甲醛中固定。用已知蛋白表達陽性的組織切片的免疫組化染色結果作為本實驗的陽性對照，用PBS代替一抗的免疫組化染色結果作為本實驗的陰性對照。

1.3結果判斷標準p53蛋白主要在細胞核中表達，顯色后陽性細胞為細胞核內出現棕黃色或棕褐色顆粒的細胞；E-cad蛋白主要在細胞膜或細胞質中表達，顯色后陽性細胞為細胞膜或細胞質內出現棕黃色或棕褐色顆粒的細胞。請專業病理醫師進行雙盲閱片。具體判斷標準：顯微鏡下隨機選擇3個不連續的視野(×400倍)計數，結合比較著色強度和陽性細胞百分率進行其結果的判定。著色強度的記分標準如下：基本無著色記為0分，弱陽性著色記為1分，中度陽性著色記為2分，強陽性著色記為3分；陽性細胞的百分率計分標準如下：每個高倍鏡視野下分別計數100個細胞，記錄其中陽性細胞所占細胞總數的百分比均值：<5%記為0分，5%-25%記為1分，26%-50%記為2分，>50%記為3分。將兩者的乘積記為最后得分：陰性(-)：0分，弱陽性(+)：1-2分，陽性(++)：3-4分，強陽性(+++)：5分以上。

1.4統計學分析采用SPSS17.0統計學軟件進行實驗數據分析，p53蛋白、E-cad蛋白在皮膚鱗狀細胞癌與正常皮膚之間的表達差異采用χ2檢驗。

2　結果

2.1p53蛋白的免疫組化染色結果

p53在皮膚鱗癌組及正常皮膚組中表達的陽性率分別為19.05%、57.69%。p53在皮膚鱗癌組中的表達低于正常皮膚組，且其差異有統計學意義(χ2=7.204，P=0.007)，見表1,圖1。

2.2E-cad蛋白的免疫組化染色結果

E-cad蛋白在正常皮膚組、皮膚鱗癌組中表達的陽性率分別為95.24%、84.62%。E-cad蛋白在皮膚鱗癌組中表達陽性率低于正常皮膚組，二者之間差異無統計學意義(χ2=0.488，P=0.485)，見表2，圖2。

圖1　正常皮膚及皮膚鱗癌中P53的表達

圖2　正常皮膚及皮膚鱗癌中E-cad的表達表1　p53免疫組化染色結果

組別p53陽性陰性陽性率(%)正常皮膚41719.05皮膚鱗癌151157.69

表2　E-cad免疫組化染色結果

3　討論

p53基因是一種重要的抑癌基因[1]，是以其蛋白質產物p53蛋白質的分子量命名的，p53蛋白質是一種位于細胞內Mr53000的核磷酸蛋白質。p53基因作為一種抗癌抑制基因，定位于17號染色體的短臂上。在1979年，p53蛋白在SV40病毒中首次被發現[2]，大量的研究證明，p53基因突變不僅存在于結腸癌中[3]，同時也存在于50%以上的人類腫瘤中，通過本實驗初步證實了在皮膚鱗癌中p53蛋白的表達上調，可能與疾病的發生、發展及浸潤有關。

上皮性鈣黏蛋白(E-cadherin)基因位于16q24.3染色體上，在肺癌和乳腺癌中發現其頻繁的等位基因的缺失[4]。該基因的CpG島甲基化會導致其失活，這也是誘發腫瘤的主要原因。有報道表明，在諸多惡性腫瘤中，發現E-cad基因沉默，例如，胃癌，前列腺癌，子宮頸癌，結腸癌，膀胱癌，乳腺癌[5]，食管癌和頭頸部的皮膚鱗癌。本次實驗中E-cad蛋白在皮膚鱗癌組織中表達下調，但二者之間差異并無統計學意義，可能是由于E-cad蛋白在皮膚鱗癌進展的各個階段的表達并不相同，但不能否認E-cad蛋白與皮膚鱗癌的發生、發展密切相關。

[1]伍科,劉志宏.蘋果酸脫氫酶與p53蛋白相互調控對腫瘤進程的影響[J].中華實驗外科雜志,2016,33:854.

[2]WilliamA,Freed-pastor,CarolPrives.Mutantp53:onename,manyproteins[J].GenesDevelopment,2012,26(12):1268.

[3]劉亮,陳浩,余超然,等.野生型p53調控結腸癌細胞代謝轉換的研究[J].中華實驗外科雜志,2015,32:1905.

[4]GirardL,Zochbauer-MullerS,VirmaniAK,etal.Genomewideallelotypingoflungcanceridentifiesnewregionsofallelicloss,differencesbetweensmallcelllungcancerandnon-smallcelllungcancer,andlociclustering[J].CancerRes,2000,60(17):4894.

[5]ToyookaKO,ToyookaS,MaitraA,etal.Establishmentandvalidationofreal-timepolymerasechainreactionmethodforCDH1promotermethylation[J].AmJPathol,2002,161(2):629.

國家自然科學基金(81371595，81401966)；吉林省科技廳項目基金(20140414061GH)

1007-4287(2016)09-1533-02

2015-03-29)