兔耳創傷后創面即刻外用藥物預防瘢痕增生的實驗研究

兔耳創傷后創面即刻外用藥物預防瘢痕增生的實驗研究

楊正兵，喬 柱
（雅安市人民醫院燒傷整形科 四川 雅安 625000）

目的：本實驗觀察兔耳創傷后創面立即外用曲安奈德與維拉帕米預防瘢痕增生的療效。方法：健康的新西蘭大耳白兔48只，制作兔耳創傷模型，隨機分為A，B，C三組，每組16只計創面32個，A組為外用曲安奈德霜，B組外用維拉帕米霜，C組為生理鹽水對照組。術后第一天起用藥至4周后兔耳上皮化，切取瘢痕組織計算瘢痕增生指數，觀察masson染色膠原纖維的形態分布及成纖維細胞數量。結果：A組與B組比較差異有統計學意義（P＜0.05），A組、B組與C組比較，差異皆具有統計學意義，差異顯著（P＜0.01）。結論：兔耳創傷后創面立即外用曲安奈德與維拉帕米能有效預防抑制瘢痕增生，曲安奈德作用強于維拉帕米，但曲安奈德可能使皮膚萎縮，甚至壞死。

曲安奈德；維拉帕米；創傷；成纖維細胞；增生性瘢痕；實驗研究

較深的燒傷創傷創面愈合后必然形成瘢痕，嚴重影響患者的功能及外觀。針對瘢痕的治療，目前無良好治療措施，常采用手術切除聯合其它輔助方法如按摩［1-2］、藥物注射、加壓［3］、冷凍、激光［4］、超聲波、硅凝膠膜［5］等。臨床常用經證實有效的藥物如糖皮質激素［6］，鈣通道阻滯劑等。Lee［7］，京薩［8-9］等研究證實肌注或者外用維拉帕米均能有效抑制兔耳瘢痕增生。在創傷后立即外用藥物能否有效預防抑制瘢痕增生，依此本實驗在兔耳創傷后即用曲安奈德與維拉帕米至創面上皮化愈合，觀察其預防抑制瘢痕增生的療效。

1　材料和方法

1.1實驗動物：由四川農業大學動物實驗中心提供兔48只，兔耳完好，雌雄不計，年齡8～12月，體重為2.0～2.5kg。由四川農業大學動物實驗中心代為飼養。

1.2主要儀器及試劑：動物實驗手術器械包（四川農業大學動物實驗中心），三星數碼相機（自備），曲安奈德（北京曙光藥業有限責任公司），維拉帕米（上海禾豐制藥有限公司），無菌生理鹽水（四川科倫藥業股份有限公司）。

1.3兔耳創傷創面模型制作方法：本實驗動物模型的制作是依據李薈元［10］研究設計的瘢痕模型，創面形成方法：去除兔耳腹側1.5cm×1.5cm全層皮膚，刮除軟骨膜。

1.4實驗動物分組：實驗共48只兔分3組，每組16只共32個創傷模型。A組為外用曲安奈德（將凡士林99g加熱熔化，緩緩加入到1g曲安奈德注射液，冷卻即得1%的維拉帕米霜），B組為外用維拉帕米（將凡士林99g加熱熔化，緩緩加入到1g維拉帕米注射液，冷卻即得1%的維拉帕米霜），C組為生理鹽水對照組（將凡士林99g加熱熔化，緩緩加入到1g無菌生理鹽水，冷卻即得1%的生理鹽水霜）。

1.5用藥方法：術后第1d，A組32個兔耳創傷創面外用曲安奈德霜，每日一次，每次均勻涂抹薄層藥霜在創面上，至兔耳上皮化愈合共計4周。B組C組同A組外用方法，B組外用維拉帕米霜、C組生理鹽水霜至兔耳上皮化愈合共計4周。

1.6取標本及處理：實驗第29d，利用空氣栓塞處死實驗動物，無菌條件下切取兔耳標本，帶有部分正常皮膚軟組織及軟骨膜。將標本固定在10%的甲醛溶液里，用石蠟包埋，行HE染色及Msson染色。

2　觀察指標

2.1大體觀察：每天觀察并拍照記錄創面手術區情況，肉芽生長情況，創面愈合情況，瘢痕形成情況如：組織的顏色、質地、大小、厚度等。大體表現：采用溫哥華瘢痕評分標準［11］。

2.2瘢痕增生指數HI：依據Morris等［12］提出的公式HI=A/ B，A為瘢痕凸起最高點到兔耳軟骨表面的垂直距離，B為瘢痕周緣正常皮膚皮緣到兔耳軟骨表面的垂直距離。

2.3成纖維細胞計數FBI：依據Weidner等［13］對瘢痕組織的成纖維細胞計數方法，首先在低倍鏡下尋找HE染色標本中清楚顯示并且成纖維細胞數最多的區域，再通過高倍鏡下觀察計數4個不同區域，結果取均數，此數為該實驗動物的成纖維細胞數目。

3　統計學方法

本實驗采用PASW Statistics18（SPSS18.0）軟件進行統計分析，組間比較采用了t檢驗，并且按檢驗水準a=0.05，P＜0.05為差異具有統計學意義，P＜0.01差異顯著；P＞0.05則差異無統計學意義，可認為實驗組與對照組對瘢痕的預防抑制作用無明顯差異。

4　結果

4.1一般觀察：A組給藥組肉眼可見瘢痕平，軟，顏色淡，斑塊體積小；B組瘢痕略平，稍軟，顏色稍淡，斑塊體積較小；C組對照組瘢痕高出皮表，硬，色紅，斑塊體積大。

4.2 Masson染色觀察：A組、B組膠原纖維排列整齊，形態纖細；C組膠原纖維藍染顏色深，纖維排列紊亂，粗大。

4.3瘢痕增生指數及成纖維細胞計數比較：通過對表1及表2數據進行軟件分析，A組與B組比較P＜0.05，差異有統計學意義；A組、B組與C組比較，差異皆具有統計學意義，差異顯著（ P＜0.01）（見表1、表2）。

表1　瘢痕增生指數（Hl）比較

表2　成纖維細胞計數比較

5　討論

曲安奈德抑制前膠原基因的表達，減少透明質酸的含量及膠原酶抑制劑，抑制膠原蛋白的合成，促進膠原纖維降解，減少膠原纖維含量，直接抑制成纖維細胞DNA，抑制肉芽組織形成［14］，抑制瘢痕形成。鈣通道阻滯劑維拉帕米主要作用于Rho激酶（Rho激酶參與如平滑肌收縮、抑制細胞增殖、形成應力纖維、細胞骨架的重構等多種細胞功能活動，在細胞分化與遷移以及細胞凋亡中發揮相應的藥理作用［15］）、肌球蛋白輕鏈激酶、蛋白激酶A、C、G等多種蛋白激酶，抑制細胞內游離鈣離子活動，減少產生炎癥介質而減輕炎癥反應，減輕損傷并保護受損的組織。維拉帕米引起成纖維細胞球形化，減少膠原及纖維粘連蛋白合成，重塑細胞外間質而抑制瘢痕增生［16］。另外，許寧［17］等研究表明，維拉帕米增強Smad7表達，抑制成纖維細胞α-Smad7 mRNA及細胞外基質合成。劉沖［18］等認為，鈣通道阻滯劑能夠改變損傷處血管分布狀況，直接影響瘢痕形成。陶靈［19］等提出，抑制成纖維細胞的增殖和分化以及抗瘢痕組織纖維化在瘢痕增生形成過程中起重要作用。綜上機制，認為維拉帕米通過抑制Rho激酶、抑制蛋白激酶活性，抑制細胞增殖，減輕組織器官重構，有效地抑制成纖維細胞的增殖。

深度創傷燒傷創面瘢痕愈合是必然結局，能否在創傷即期即使用藥物預防抑制瘢痕的增生。基于此，本實驗通過對兔耳創傷后創面立即外用曲安奈德與維拉帕米，從大體及細胞學結果表明，曲安奈德與維拉帕米皆能預防抑制瘢痕增生，曲安奈德對瘢痕的預防抑制作用強于維拉帕米，但曲安奈德可使皮膚萎縮，甚至壞死；維拉帕米副作用不明顯。本實驗表明，兔耳創傷后創面立即外用曲安奈德與維拉帕米能預防抑制瘢痕增生，但還存在如用藥頻次、用藥量、以及用藥的最佳濃度還有待進一步研究。

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編輯/張惠娟

Experimental study on the prevention of scar hyperplasia by immediate external use of drugs in the wound of rabbit's ears

YANG Zheng-bing， QIAO Zhu
（Department of Burn and Plastic Surgery，Ya'an People's Hospital， Ya'an 625000，Sichuan，China）

Objective The experiment observes the effect of immediate external application of triamcinolone acetonide and verapamil on the prevention of scar hyperplasia in the early stage of traumatic wound of rabbit ears. Methods 48 healthy New Zealand white rabbits were randomly divided into A and B and C three groups， 16 in each group， 32 traumatic wounds altogether. Group A was used triamcinolone acetonide，group B was used verapamil as the experimental group， and Group C was used normal saline as control group. From frst day after surgery to 4 weeks ， traumatic wounds of rabbit ear were epithelial，the scar tissue was taken to calculate the hypertrophic index and observe Masson staining of collagen fiber morphological distribution and the number of fbroblasts. Results There was difference between group A and group B（P ＜ 0.05）. There was signifcant difference between group A，B and group C（P ＜ 0.01）. Conclusion It is concluded that triamcinolone acetonide and verapamil can effectively prevent the formation of hypertrophic scar in rabbit ears. Triamcinolone acetonide has a better effect of inhibition than verapamil on the formation of hypertrophic scar. But triamcinolone acetonide may cause skin atrophy or even necrosis.

triamcinolone acetonide；verapamil；trauma； fbroblast； hypertrophic scar； experimental study

R619+.6

A

1008-6455（2016）08-0050-02

2016-05-12

2016-07-21