聚異丁烯骨通貼膏經皮膚給藥的安全性研究

杜婕瑩，曾 森，王 璐，舒 磊，張首亞，袁 捷#（1.廣州市婦女兒童醫療中心，廣州 51062；2.廣州中醫藥大學中藥學院，廣州 5105；.桂林華潤天和藥業有限公司，廣西桂林 51001；.廣州中醫藥大學科技產業園，廣州 5105）

聚異丁烯骨通貼膏經皮膚給藥的安全性研究

杜婕瑩1，2＊，曾 森3，王 璐3，舒 磊4，張首亞4，袁 捷4#（1.廣州市婦女兒童醫療中心，廣州 510623；2.廣州中醫藥大學中藥學院，廣州 510445；3.桂林華潤天和藥業有限公司，廣西桂林 541001；4.廣州中醫藥大學科技產業園，廣州 510445）

目的：研究聚異丁烯（PIB）骨通貼膏經皮膚給藥的安全性。方法：取66只家兔隨機分為正常組、完整皮膚組、破損皮膚組，后2組再分為PIB組，PIB骨通貼膏低、中、高劑量組，骨通貼膏組，經皮膚給藥24 h后連續觀察14 d進行急性毒性實驗；另取家兔60只，除不設置正常組外分組方法同上，采用同體自身左右側對比法單次給藥6 h后，記錄皮膚刺激反應，進行單次皮膚原發性刺激實驗。取70只豚鼠隨機分為陰性對照組（凡士林）、PIB組、陽性對照組（2，4-二硝基氯苯）、骨通貼膏組、PIB骨通貼膏低、中、高劑量組致敏給藥后，進行皮膚致敏實驗。結果：PIB骨通貼膏給藥后家兔未見明顯中毒表現；PIB、PIB骨通貼膏低、中劑量對完整皮膚和破損皮膚兔均未見刺激性反應，PIB骨通貼膏高劑量對完整皮膚兔未見刺激性反應，破損皮膚兔給藥1 h后有輕度刺激性；除陽性對照組豚鼠過敏反應發生率為100%外，其他各組過敏反應發生率均為0。結論：PIB骨通貼膏經皮膚給藥安全性較好。關鍵詞 聚異丁烯；骨通貼膏；急性毒性實驗；皮膚原發性刺激實驗；皮膚致敏實驗；安全性

骨通貼膏由丁公藤、麻黃、當歸、干姜、白芷、海風藤、乳香、三七、姜黃、辣椒、樟腦、肉桂、薄荷等十余味藥材制備而成［1］，對寒濕阻絡兼血瘀證之局部關節疼痛、腫脹、麻木著重、屈伸不利或活動受限等有良好的療效，主要治療骨質增生、肩周炎、頸（腰）椎病、風濕、關節炎、腰間盤突出等各種慢性骨病［2］。聚異丁烯（Polyisobutylene，PIB）是一種低過敏性合成高分子材料，性質穩定、安全無毒。PIB骨通貼膏是將傳統骨通貼膏的基質換成PIB，是傳統骨通貼膏的技術升級產品（批準文號：國藥準字Z10980134），是國內獨創采用新型高分子材料PIB作為中藥貼膏基質的膏藥［3］，臨床用藥表明其對各種原因導致的疼痛有良好的治療效果［4］。為了確保PIB骨通貼膏臨床經皮膚給藥的安全性，在本研究中筆者設計相關實驗，為骨通貼膏臨床應用的安全性和進一步開發推廣提供依據。

1 材料

1.1 儀器

TCS-30電子臺秤（常熟市雙杰測試儀器廠）；TP-2101電子天平（常熟市雙杰測試儀器廠）。

1.2 藥物與試劑

PIB骨通貼膏（批號：201505，規格：7 cm×10 cm、1.188 g/貼）、骨通貼膏（批號：20150517，規格：7 cm×10 cm、1.188 g/貼）均購自桂林華潤天和藥業有限公司；2，4-二硝基氯苯（DNCB，批號：613808，純度：98%）購自上海研拓生物科技有限公司；凡士林（批號：150401，規格：500 g/瓶）購自南昌華鑫醫藥化工有限公司；丙酮（廣州化學試劑廠）。本實驗以PIB骨通貼膏的劑量為PIB中劑量，分別以PIB骨通貼膏中藥物含量的0.5倍、2倍作為PIB低、高劑量，各劑量組PIB基質的量不變。各組PIB骨通貼膏均由藥物生產企業桂林華潤天和藥業有限公司提供。

1.3 動物

普通級新西蘭家兔126只，♀♂各半，體質量2.01～2.42 kg，由廣州市花都區花東信華實驗動物養殖場提供［合格證號：44007600002565，許可證號：SCXK（粵）2013-0002］。

普通級FMMU白化豚鼠70只，♀♂各半，實驗開始時平均體質量為284.3 g，由南方醫科大學實驗動物中心提供［合格證號：44002100006332，許可證號：SCXK（粵）2011-0015］。

2 方法

2.1 急性毒性實驗[5-7]

取家兔66只，♀♂各半，隨機分為正常組、完整皮膚組和破損皮膚組；后2組再分為PIB組，PIB骨通貼膏低、中、高劑量組，骨通貼膏組，共計11組，每組6只。給藥前24 h，用電推剪在家兔背部脫毛，脫毛面積約15 cm×10 cm（約為家兔體表面積的10%），去毛后檢查去毛皮膚是否受傷并剔除受傷家兔。破損皮膚組兔背部脫毛區用75%乙醇消毒，然后用一次性注射器（5 ml）針頭在脫毛區劃“井”字切口，以不損傷皮下組織并有滲血為標準。正常組家兔僅脫毛，其他各組家兔貼對應貼劑24 h后，用溫水洗凈殘留藥物，即刻開始觀察家兔皮膚、眼睛、黏膜、呼吸、飲食、大小便、自主活動、行為改變等指標；當出現毒理反應，則觀察毒性反應的嚴重程度和消失情況。連續觀察14 d，每天觀察2次，并于第0、1、7、14 d測量體質量。如有死亡或瀕死家兔，或出現肉眼可見的病變時，則及時進行解剖和病理組織學檢查。

2.2 單次皮膚原發性刺激實驗[6-7]

取家兔60只，♀♂各半，除不設置正常組外，分組方法同“2.1”項，共計10組，每組6只。各組家兔均采用同體自身左右側對比法，右側給予凡士林（0.5 g/只），左側給予對應藥物（3 cm×3 cm/只），單次給藥，固定6 h后去除藥物，用溫水洗凈殘留藥物。于實驗開始前和觀察期結束時記錄家兔體質量和去除藥物第1、24、48、72 h后涂藥部位的紅斑與水腫情況。紅斑評分：無紅斑計0分，輕度紅斑（呈淡紅色）計1分，中度紅斑（呈鮮紅色）計2分，重度紅斑（呈暗紅色）計3分，嚴重紅斑（紫紅色紅斑到輕度焦痂形成）計4分；水腫評分：無水腫計0分，輕度水腫（勉強可見）計1分，中度水腫（皮膚明顯隆起）計2分，重度水腫（皮膚隆起1 mm，輪廓清楚）計3分，嚴重水腫（皮膚隆起＞1 mm并有擴大）計4分。觀察各組家兔紅斑與水腫積分的平均值，按皮膚刺激強度評價標準［8］進行刺激強度評價，總分為0～8分，其中0～0.49分為無刺激性、0.5～2.99分為輕度刺激性、3.0～5.99分為中度刺激性、6.0～8.0分為強刺激性。

2.3 皮膚致敏實驗[6-7]

FMMU豚鼠70只，♀♂各半，分為陰性對照組（凡士林，0.5 g/只）、PIB組（3 cm×3 cm/只）、陽性對照組（DNCB，0.5 g/只）、骨通貼膏組（3 cm×3 cm/只）及PIB骨通貼膏低、中、高劑量組（3 cm×3 cm/只），共計7組，每組10只。于第0、7、14 d進行誘導接觸，給藥部位為豚鼠左側肋腹部去毛區皮膚；于第28 d行激發接觸，給藥部位為豚鼠右側肋腹部去毛區皮膚，給藥量和誘導接觸保持一致。觀察第0、24、48、72 h后給藥局部皮膚紅斑、水腫情況，同時觀察動物有無哮喘、站立不穩或休克等全身過敏反應。紅斑、水腫評價同“2.2”項下方法，過敏反應發生率=組內出現皮膚紅斑、水腫或全身過敏反應的動物數/本組動物總數×100%。過敏反應發生率為0～10%時評價為無致敏性、＞10%～30%時評價為輕度致敏性、＞30%～60%時評價為中度致敏性、＞60%～80%時評價為高度致敏性、＞80%～100%時評價為極度致敏性。

2.4 統計學方法

體質量數據采用SPSS 19.0統計軟件進行處理，♀♂分別統計，以±s表示。對符合正態分布且方差齊的數據，則進行單因素方差分析和多重比較（SNK-q檢驗）；對不符合正態分布或方差不齊的數據，則進行非參數檢驗（Kruskal-Wallis秩和檢驗）。P＜0.05表示差異有統計學意義。

3 結果

3.1 急性毒性實驗結果

觀察期間，各組家兔飲食飲水正常，均未見豎毛、分泌物及排泄物、眼瞼異常。個別家兔可見輕微紅痕，疑為貼劑自身黏性和人為撕扯所致，3 d左右即可消退。破損皮膚各組兔結痂外均未見異常，精神狀態良好，家兔外觀及行為活動正常，破損皮膚在7 d左右均可自行愈合，實驗結束時無家兔死亡。第0、1、7、14 d各組家兔體質量比較，差異無統計學意義（P＞0.05，數據略）。

3.2 單次皮膚原發性刺激實驗結果

骨通貼膏破損皮膚組家兔在去除藥物1、24、48 h后表現出輕度刺激性，去除藥物72 h后刺激性消失。骨通貼膏完整皮膚組家兔在去除藥物1、24、48、72 h后均表現出輕度刺激性。PIB骨通貼膏高劑量破損皮膚組家兔在去除藥物1 h后表現出輕度刺激性，去除藥物24、48、72 h后刺激性消失；PIB骨通貼膏低劑量破損皮膚組家兔在去除藥物后24 h，PIB骨通貼膏中劑量完整皮膚組家兔在去除藥物1、24、48 h后，皮膚刺激強度評分的平均值分別為0.17、0.33、0.33、0.17，在0～0.49范圍內，評價為無刺激性。其他各組家兔在去除藥物后1 h、24 h、48 h、72 h的皮膚刺激強度平均值為0分，評價為無刺激性，詳見表1。

表1 各組家兔單次皮膚原發性刺激實驗結果Tab 1 Results of the single primary skin irritation test of each group of rabbits

3.3 皮膚致敏實驗結果

陰性對照組、PIB組、骨通貼膏組及PIB骨通貼膏低、中、高劑量組豚鼠激發部位皮膚均未出現紅斑、水腫，無哮喘、站立不穩或休克等全身過敏反應，過敏反應發生率均為0，均評價為未見皮膚過敏反應。陽性對照組豚鼠激發部位皮膚均出現不同程度的紅斑和水腫情況，過敏反應發生率為100%，評價為極強致敏。結果表明，PIB骨痛貼膏對豚鼠無皮膚致敏作用。

4 討論

骨通貼膏是在“海氏骨刺靈”的基礎上，根據徐大椿“薄貼論”的理論，針對骨刺病癥，篩選滲透力強、擴張微細血管、消除炎癥并減輕疼痛的天然藥物，并加入強力透皮吸收促進劑，結合現代制劑技術精制而成的外用貼劑。骨通貼膏的主要藥材丁公藤可祛風除濕、消腫止痛；麻黃可發汗解表、利水消腫；當歸可活血止痛；干姜可溫中散寒、回陽通脈，諸藥調和配伍、共同作用使組方具有祛風散寒、活血通絡、消腫止痛之功效。

PIB骨通貼膏采用超純PIB為基質，分子中只有碳元素和氫元素，不含橡膠基質中的特異性毒蛋白、松香、防腐劑等致敏物質，安全無毒，與皮膚相容性好，無刺激，故其過敏率顯著低于傳統橡膠膏藥［4］。本實驗結果表明骨通貼膏對完整皮膚給藥具有輕度刺激性，而PIB骨通貼膏對皮膚的刺激性較低，只有高劑量去除藥物1 h后對破損皮膚表現出輕度刺激性，其余各劑量組均未見刺激性反應。PIB為聚合物，其內聚力強、黏度可控，有“強粘易撕”的優點，可以避免對皮膚產生物理性傷害，不損傷皮膚，且由其所制貼膏膏體不會殘留在皮膚上。而其長鏈結構僅端基含不飽和鍵，雙鍵少，可以產生反應的位置少，因而化學性質穩定，耐寒、耐熱、抗老化性良好，可在不改變藥物性質的情況下使藥物充分發揮作用［9］。以PIB制成的基質包容性大，利用中藥芳香開竅并與國際先進透釋技術相結合，可使藥物釋放性能和療效得到顯著提高。

急性毒性實驗、皮膚原發性刺激實驗、皮膚致敏實驗是新藥臨床前安全性評價的重要組成部分［10］。在本實驗所用的劑量范圍內，應用PIB為基質成分制成的骨通貼膏對皮膚無毒性、無刺激性、無致敏性，表明其使用安全、無毒副作用。綜上所述，PIB骨通貼膏經皮膚給藥安全性較好。

［1］夏菁，謝媛媛，張宗璇，等.骨通貼膏指紋圖譜及化學成分研究［J］.中成藥，2014，36（3）：571.

［2］丘明明.HPLC法測定骨通貼膏中鹽酸麻黃堿的含量及均勻度［J］.中國藥師，2010，13（5）：69.

［3］金文.聚異丁烯及其下游產品的生產和應用［J］.精細化工原料及中間體，2005，34（5）：20.

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［7］袁伯俊，廖明陽，李波.藥物毒理學實驗方法與技術［M］.北京：化學工業出版社，2007：783.

［8］梁炳文.中藥經皮給藥制劑技術［M］.北京：化學工業出版社，2006：171.

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Safety Study of Polyisobutylene Gutong Plaster by Transdermal Administration

DU Jieying1，2，ZENG Sen3，WANG Lu3，SHU Lei4，ZHANG Shouya4，YUAN Jie4（1.Guangzhou Women and Children’s Medical Center，Guangzhou 510623，China；2.School of Chinese Meterla Medica，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510445，China；3.Guilin Huarun Tianhe Pharmaceutical Co.，Ltd.，Guangxi Guilin 541001，China；4.Sci-tech Industrial Park，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510445，China）

OBJECTIVE：To investigate the safety of Polyisobutylene（PIB）Gutong plaster by transdermal administration.METHODS：66 rabbits were randomly divided into a normal group，a group with intact skin and a group with damaged skin.The latter two groups were respectively re-divided into PIB group，the groups of low，medium and high-dose PIB Gutong plaster and Gutong plaster group.An acute toxicity test was conducted on the rabbits，which 14 d of continuous observation was made 24 h after transdermal administration.Another 60 rabbits were divided into several groups as above except for a normal group.A single primary skin irritation test was conducted on them，where skin irritation reactions were recorded 6 h after a single administration based on intra-individual left/right self comparison method.70 guinea pigs were randomized into a negative control group（vaseline），a PIB group，a positive control group（2，4-dinitrochlorobenzene），a Gutong plaster group and the groups of low，medium and high-dose PIB Gutong plaster，which were dosed for sensitization，followed by a skin sensitization test.RESULTS：No obvious toxicity symptoms could be seen after administration of PIB Gutong plaster.The rabbits’intact or damaged skin had no irritation response to PIB and low and medium-dose PIB Gutong plaster.PIB Gutong plaster caused no irritation response in the rabbits’intact skin，but slight irritation in damaged skin 1 h after administration.The allergic reaction incidence of the positive control group of guinea pigs was 100%while that of any other groups was 0.CONCLUSIONS：The PIB Gutong plaster is safe for transdermal administration.

Polyisobutylene；Gutong plaster；Acute toxicity test；Primary skin irritation test；Skin sensitization test；Safety

R965.3

A

1001-0408（2016）25-3512-03

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.25.17

2016-01-15

2016-07-08）（編輯：劉明偉）

＊中藥師，碩士研究生。研究方向：中藥新藥開發。E-mail：fannyto@163.com

研究員。研究方向：中藥新藥開發。E-mail：466754442@qq.com