中年人唾液糖蛋白水平與患齲風(fēng)險的相關(guān)性研究

孫 青，許維剛，趙 越

中年人唾液糖蛋白水平與患齲風(fēng)險的相關(guān)性研究

孫 青，許維剛，趙 越

（常州市口腔醫(yī)院牙體牙髓科江蘇常州213000）

目的：檢測35～44歲中年人唾液糖蛋白水平，探討其與中年人患齲狀況之間的相關(guān)性，為尋找齲病的生物標(biāo)志物提供資料。方法：隨機(jī)抽取常州市口腔醫(yī)院就診的200例中年患者進(jìn)行口腔檢查，根據(jù)檢查結(jié)果隨機(jī)分成兩組：①無齲組（DMFT=0），②有齲組（DMFT＞0），抽取無齲組20例，有齲組30例，分別檢測兩組唾液糖蛋白水平，檢查有齲組患齲情況并記錄齲失補(bǔ)牙數(shù)（DMFT），齲失補(bǔ)牙面數(shù)（DMFS），齲蝕指數(shù)（CSI）。應(yīng)用SPSS17.0軟件包對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果：無齲組唾液糖蛋白水平顯著低于有齲組（P＜0.05）；有齲組唾液糖蛋白水平與齲失補(bǔ)牙數(shù)（DMFT），齲失補(bǔ)牙面數(shù)（DMFS），齲蝕指數(shù)（CSI）顯著正相關(guān)。結(jié)論：唾液糖蛋白水平與中年人患齲指數(shù)具有相關(guān)性。

唾液糖蛋白水平；齲病；中年人；患齲風(fēng)險；相關(guān)性

齲病是WHO重點防治的三大非傳染性疾病之一，對人類健康危害嚴(yán)重［1］，根據(jù)第三次全國口腔健康流行病學(xué)抽樣調(diào)查結(jié)果顯示，中年人齲病患病率為88.1%。中年人知識積累增長，經(jīng)驗日益豐富，社會地位趨于穩(wěn)定，然而人體生理功能卻在不知不覺中下降，在社會物質(zhì)財富日益豐富的當(dāng)下，這個群體對自身健康狀況的關(guān)注度也日益增高。人類的唾液執(zhí)行多種重要的生理功能［2］，由于全唾液樣本的收集比血液簡單，沒有侵入性的操作，唾液是研究人類疾病生物標(biāo)志物的理想體液。隨著人類基因測序的完成和后基因組學(xué)時代的到來，蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)運(yùn)而生，齲病是最常見的口腔疾病，大量實驗［3-5］致力于唾液中蛋白組學(xué)研究，而本文旨在研究唾液蛋白重要的翻譯后修飾，分析中年人唾液糖蛋白水平與齲病風(fēng)險的相關(guān)性，以期為中年人齲病篩查和早期防治提供依據(jù)。

1　材料和方法

1.1病例選擇和分組：隨機(jī)抽取2014年12月-2016年4月在常州市口腔醫(yī)院就診的中年（35～44歲）患者200例，由一名經(jīng)培訓(xùn)、并經(jīng)兩次標(biāo)準(zhǔn)一致性檢驗可靠度優(yōu)的口腔醫(yī)師，參照世界衛(wèi)生組織（WHO）《口腔健康調(diào)查的基本方法》規(guī)定的齲病診斷標(biāo)準(zhǔn)，檢查所有患者的患齲情況，并記錄齲失補(bǔ)牙數(shù)（DMFT），齲失補(bǔ)牙面數(shù)（DMFS），齲蝕指數(shù)（CSI）。根據(jù)檢查結(jié)果分成兩組：①無齲組（DMFT=0），②有齲組（DMFT＞0），隨機(jī)抽取無齲組20例，有齲組30例，排除性別、年齡和種族偏倚，納入標(biāo)準(zhǔn)：①全身健康，無系統(tǒng)性疾病；②1月內(nèi)未使用抗生素或其它可能影響唾液分泌的藥物；③牙體硬組織發(fā)育良好，無四環(huán)素牙、氟斑等發(fā)育性疾病；④無重度牙周炎，口腔軟組織疾病；⑤非孕期及哺乳期婦女；⑥愿意簽署知情同意書。

1.2主要儀器和試劑：離心機(jī)（Hitachi Himac，日本），HANGPINGFA2004電子天平（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠），Medical Freezer -80℃冰箱（三洋，日本），Nanodrop 2000/2000C分光光度計（Thermo Scientific），Bio-Rad電泳儀（Bio-Rad，美國），SDS-PAGE電泳相關(guān)試劑；GENMED糖蛋白電泳高碘酸希爾法阿爾新藍(lán)染色試劑盒（GENMED SCIENTIFICS INC，美國）。

1.3方法

1.3.1唾液采集及唾液糖蛋白水平測定：采用標(biāo)準(zhǔn)化全唾液收集方法，于上午9:00-11:00之間收集受試者非刺激性全唾液2ml置于試管內(nèi)，取樣前要求受試者禁食物、飲料和禁止使用口腔護(hù)理用品至少2h，樣本采集后立即置于冰上，并轉(zhuǎn)移至-80℃保存?zhèn)溆茫粚⑼僖簶颖驹?℃離心，去除食物殘渣，各取上清液，依照Bradford法，測定蛋白濃度，配制8%的分離膠，分別取上樣量100μg，進(jìn)行SDSPAGE蛋白電泳；電泳完成后，經(jīng)GENMED 糖蛋白電泳高碘酸希爾法阿爾新藍(lán)染色試劑盒染色；采集圖像，用Image J軟件進(jìn)行圖像處理和分析，進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄。

1.3.2口腔檢查：對兩組受試者分別進(jìn)行口腔檢查，綜 合 評 估 并 計 算 齲 失 補(bǔ) 牙 面 數(shù) （decayed -missing-filled surface，DMFS）、齲失補(bǔ)牙數(shù)（decayed-missing -filled tooth，DMFT）。 對 齲 蝕 指數(shù)（caries severity index，CSI）給予計分［6］：無齲為0分，因齲充填為0.5分，繼發(fā)齲、釉質(zhì)齲、牙本質(zhì)淺齲為1分，牙本質(zhì)深齲或露髓、殘冠或殘根為2分，若1個牙有多個牙面同時患齲，以其牙面中的最高分為準(zhǔn)。計算公式：CSI=齲蝕牙記分總和×100 /（牙數(shù)×2×100）。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析：應(yīng)用SPSS17.0軟件包對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以xˉ±s表示 ，兩組數(shù)值有無差異性采用獨(dú)立樣本t檢驗，采用Pearson相關(guān)分析檢驗兩組數(shù)值是否存在的相關(guān)性，所有檢驗均為雙側(cè)，P＜0.05為差異具有顯著性。

圖1　唾液糖蛋白水平檢測結(jié)果

2.2有齲組唾液糖蛋白水平與齲病指數(shù)的相關(guān)分析：有齲組唾液糖蛋白水平與DMFT顯著正相關(guān)（r=0.937，P＜0.01），與DMFS顯著正相關(guān)（r=0.900，P＜0.01），與CSI顯著正相關(guān)（r=0.968，P＜0.01）。見圖2～4。

圖2　有齲組唾液糖蛋白水平與DMFT顯著正相關(guān)

圖3　齲組唾液糖蛋白水平與DMFS顯著正相關(guān)

圖4　有齲組唾液糖蛋白水平與CSl顯著正相關(guān)

2　結(jié)果

2.1唾液糖蛋白水平檢測結(jié)果，見圖1。對兩組數(shù)據(jù)分別進(jìn)行單樣本Kolmogorov-Smirnov檢驗，結(jié)果顯示兩組數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，將兩組數(shù)據(jù)采用獨(dú)立樣本t檢驗，有齲組唾液糖蛋白水平（4615682.77±1282831.862）顯著高于無齲組（4482270.55±820844.542）（P＜0.01）。

3　討論

近年來，新興的生物學(xué)技術(shù)已經(jīng)將唾液診斷的范圍從口腔擴(kuò)展到全身系統(tǒng)，唾液中大量生物標(biāo)志物可用于檢測癌癥、糖尿病、自身免疫性疾病等［7-9］多種疾病，然而目前確定的多數(shù)疾病標(biāo)志物都是血清中的成分，不是唾液腺產(chǎn)生的內(nèi)源性蛋白［10］。人類唾液蛋白質(zhì)組織工程開始之后，很多研究致力于將齲病的流行情況和唾液的蛋白質(zhì)組學(xué)關(guān)聯(lián)起來，但是已有的研究結(jié)果不盡一致［11-13］。Jagtap等［11］通過對人類唾液中上清液的蛋白質(zhì)分析發(fā)現(xiàn)，低豐度區(qū)蛋白可能是齲病相關(guān)唾液蛋白。鄢國偉等［12］用ESI-MS /MS 分析法探索唾液蛋白組與齲病的關(guān)系，其結(jié)果顯示高齲組蛋白量顯著高于無齲組，兩組之間差異表達(dá)蛋白包含基質(zhì)金屬蛋白酶9、黏蛋白7、乳鐵蛋白、碳酸酐酶6、天青殺素、冷凝集素等。Denny等［13］研究發(fā)現(xiàn)，青年人非刺激性唾液中糖蛋白寡糖基團(tuán)水平和種類與齲損程度有相關(guān)性，從而認(rèn)為個體對齲病的易患性可能與唾液糖蛋白寡糖基團(tuán)有關(guān)。

由于唾液成分進(jìn)入口腔后就暴露于宿主和微生物來源的各種酶，有可能被降解，從二維凝膠電泳可以看出，腮腺和頜下腺分泌物的蛋白質(zhì)組學(xué)特征和全唾液并不相同［14］。本實驗對唾液蛋白翻譯后修飾即糖蛋白水平的研究規(guī)避了唾液蛋白大量的變化和異質(zhì)性，對象是全唾液更適合臨床采樣和反映口腔內(nèi)的實際情況。同時排除了種族差異，人種和地域的差別可能導(dǎo)致唾液基因型、蛋白表型和翻譯后修飾的不同［15］。本研究結(jié)果顯示：有齲組唾液糖蛋白水平顯著高于無齲組，有齲組糖蛋白水平與齲病指數(shù)顯著正相關(guān)。有可能的機(jī)制是：糖基化是最重要的翻譯后修飾，多糖是自然界中最豐富和結(jié)構(gòu)變化最為多樣的分子，通過現(xiàn)代糖組學(xué)分析技術(shù)，它們的功能和對人類疾病的影響越來越清晰［16］。唾液中多糖修飾的蛋白，與口腔中定植的微生物之間的相互作用最為密切，牙齒表面獲得性膜中的糖蛋白可能能夠提供附著位點，促進(jìn)細(xì)菌定植，有助于齲病的發(fā)生，與Denny，Zehetbauer等［15，17］研究結(jié)果一致：齲病的風(fēng)險標(biāo)志物可能從糖蛋白中發(fā)現(xiàn)。Denny等［15］研究報道唾液粘蛋白的糖基化模式與兒童患齲史具有很強(qiáng)的相關(guān)性。也有可能唾液中特定的蛋白是與宿主個體間的基因表達(dá)有關(guān)系［15］。

綜上所述，本實驗運(yùn)用經(jīng)典的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，研究唾液蛋白主要的翻譯后修飾，更符合全唾液的情況；和二維電泳、SELDI-TOF-MS質(zhì)譜相比，本研究采用的技術(shù)相對簡單，高通量、耗時短、不需要鑒定多個蛋白，降低了檢測費(fèi)用。研究結(jié)果提示中年人唾液糖蛋白水平和患齲指數(shù)具有相關(guān)性，有望為開發(fā)檢測齲病風(fēng)險的新技術(shù)提供資料。

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編輯/李陽利

Relationship between dental caries and salivary glycoprotein in middle-aged people

SUN Qing， XU Wei-gang， ZHAO Yue
（Department of Endodontics， Changzhou Stomatogical Hospital， Changzhou 213000，Jiangsu，China）

ObjectiveTo explore the relationship between dental caries and salivary glycoprotein in middle-aged people （35 - 44 years old）， in order to find caries biomarkers.Methods200 middle-aged patients （35 - 44 years old） from Changzhou stomatogical hospital were randomly selected for oral examination. The patients were divided into two groups according to the examination. result ①no caries group （DMFT = 0），②the caries group （DMFT＞0）， 20 patients were randomly selected from group ①， 30 patients were randomly selected from group ②. They were tested for salivary glycoprotein level.The decayedmissing-filled surface （DMFS）， decayed-missing-filled tooth （DMFT）， caries severity index （CSI） in both groups were recorded. All statistical analyses were performed using SPSS17.0 software package.ResultsSalivary glycoprotein level in noncaries group was significantly lower than caries group （P＜0.05）. There was significant positive correlation between salivary glycoprotein level and DMFT， DMFS， CSI.ConclusionA negative correlation was found between salivary glycoprotein level and caries activities in middle-aged people（35 - 44 years old）.

salivary glycoprotein level； dental caries； middle-aged people； the risk of dental caries；relationship

R782.7

A

1008-6455（2016）09-0065-03

2016-07-21

2016-08-23