家系性AMEL Y、DYS456、DYS576、DYS570同時缺失1例

劉 薇，彭 誠，尚雷鵬，畢 潔，余純應，李妙霞，霍家潤

（1.北京明正司法鑒定中心，北京100083；2.北京市公安局海淀分局刑偵支隊，北京100142）

訴訟與案例
Litigation and Case Report

家系性AMEL Y、DYS456、DYS576、DYS570同時缺失1例

劉 薇1，彭 誠2，尚雷鵬2，畢 潔1，余純應1，李妙霞1，霍家潤1

（1.北京明正司法鑒定中心，北京100083；2.北京市公安局海淀分局刑偵支隊，北京100142）

法醫遺傳學；STR；Amelogenin；染色體；突變

1　案例

1.1簡要案情

某日，在某城中村附近的公園內發生一起強奸案，嫌疑人逃逸，勘察人員隨即提取受害人陰道拭子進行精斑的檢驗，并提取受害人血樣作為對照。

1.2檢驗過程

檢材PSA試驗呈陽性，經差異裂解法提取，用Identifiler Plus試劑盒（美國AB公司）在9700型擴增儀（美國AB公司）上進行復合擴增，PCR體系及條件按照試劑盒說明書，采用3130xl遺傳分析儀（美國AB公司）進行毛細管電泳檢測，用Gene Mapper ID V3.2軟件進行基因分析。檢驗結果表明，該分型AMEL基因座為X峰，RFU值與雜合子等位基因RFU值接近（見圖1，部分基因座省略）。該分型與受害人血樣的分型結果不符。經重新提取并改用GoldeneyeTM20A試劑盒（北京基點認知生物有限公司）進行驗證，結果一致。隨后，用Y-filer及Y-filer Plus試劑盒（美國AB公司）進行Y-STR檢驗。Y-filer結果顯示DYS456、DYS458基因座丟失，Y-filer Plus結果顯示DYS456、DYS576、DYS570基因座丟失。用PowerPlex Y23（美國Promega公司）驗證，結果一致。用Goldeneye 17X試劑盒（北京基點認知生物有限公司）檢測，各基因座均為單峰。

圖1　AMEL X與相鄰基因座雜合子的峰高接近

參考NCBI最新Y染色體參考序列，重新設計DYS456、DYS570、DYS576和AMEL的PCR引物，將擴增產物分別延長至707bp、604bp、792bp、794bp后進行電泳檢測（見表 1），結果顯示在 DYS456、DYS570、DYS576和AMEL無電泳條帶，而對照男性的電泳結果正常。

表1　DYS456、DYS570、DYS576和AMEL的PCR引物序列

3　結果與討論

上述檢測結果證實現場檢材確系一男性個體所留。由于案發地位于城鄉結合部，人口復雜，為了縮小偵查范圍，偵查員對周圍城中村內67戶不同父系的男性個體進行采血篩查，并進行Y-STR的檢驗，得到羅某義的Y-STR分型結果與現場檢材一致。經查，羅某義的堂弟羅某洪有重大作案嫌疑。嫌疑人到案后對其血樣進行采集，經比對，羅某洪的常染色體STR分型及Y-STR分型與現場檢材一致。至此，本案成功告破。

人牙釉質蛋白基因（Amelogenin基因）檢測是法醫DNA性別鑒定的主要依據［1］，然而人牙釉質蛋白基因突變或缺失的個體，常規的檢測手段往往容易造成性別誤判，甚至誤導偵查方向。通常情況下AMEL基因的分型是性別鑒定的有效手段，然而近年來AMEL基因缺失的案例在國內外已有報道。陳愛萍等［2］研究表明中國人群AMEL基因的突變率為0.045%，且男性的AMEL基因突變率較女性高。AMEL基因的突變可以發生在X染色體或Y染色體，導致相應的AMEL X或Y產物丟失。Shewale等［3］曾報道在7 000例男性個體中檢出3例AMEL X擴增產物缺失。Steinlechner等［4］在3萬名無關男性個體中檢出6例AMEL Y缺失的個體，國內也有AMEL Y伴單個Y-STR基因座基因缺失的報道［5］。在實際檢案中，AMEL X缺失不至于影響性別的判斷，而AMEL Y缺失的個體往往容易造成性別的誤判，甚至誤導偵查方向。在檢驗這類個案時，通過檢測Y-STR有助于對AMEL Y缺失個體的性別判斷。

Y-STR位于Y染色體非重組區，為男性個體所特有的遺傳標記，與X染色體不發生重組，符合單倍體連鎖遺傳，父傳子、子傳孫，在排除突變的前提下，同一父系男性個體的Y-STR分型相同。因此，在家系排查中有著重要的價值。本案中，男性嫌疑人及其堂弟的AMEL Y基因發生了丟失，且Y-STR檢測結果中DYS456、DYS576和DYS570三個遺傳標記未檢出分型，反映出嫌疑人的重要父系特征，因此在本案中最大限度地縮小了偵查范圍，為偵查提供有效線索的同時，節約了辦案經費和時間。

本案的檢測過程中除上述丟失的等位基因外，其余峰型良好，可以排除DNA模板質量及擴增非特異性引起的丟失。而重新設計PCR引物后仍無法擴增出目標片段，表明本案中家系的AMEL Y和DYS456、DYS570、DYS576基因座丟失不是由于引物結合部位的點突變導致的。因此，考慮本案中的家系在Yp11.2發生了大片段的丟失。在NCBI參考序列中檢索相關基因座的物理位置后不難發現，丟失片段的范圍涵蓋了Y染色體短臂末端非重組區的起始部分，即從DYS456上游至DYS458上游引物結合部位附近的最少3.5Mb，其結果可以通過DNA測序的方法直接證實。

本案中的檢材經 Y-filer Plus試劑盒檢測DYS458基因座分型為23，而Y-filer試劑盒未檢出分型，這可能是由于兩種試劑盒在該基因座的引物設計存在細微差別，后者的引物結合部位存在點突變或位于上述缺失的片段內，導致序列特異性引物無法同模板DNA結合，進而導致Y-filer試劑盒DYS458基因座擴增失敗，出現無效等位基因。由于AB公司這兩種試劑盒的引物設計未對外公開，這一機制有待進一步研究。

綜上，當試驗結果的性別判定與案情相悖或前后矛盾時，應當考慮Amelogenin基因丟失的可能，這種結果與引物結合部位稀有性突變或性染色體上大片段的丟失有關，應當重新設計引物進行檢驗，檢測X-STR、Y-STR亦有助于性別的判定。

［1］Balbuena，P García-Vázquez.A Rapid and Quantitative DNA Sex Test:Fluorescence-Based PCR Analysis of X-Y Homologous Gene Amelogenin［J］.BioTechniques，1993，（15）：637-641.

［2］陳愛萍，陳勇，王會品，等，中國人群Amelogenin基因的突變頻率和突變類型，中華醫學遺傳學雜志，2007（6）:615-619.

［3］Shewale J G，Richey S L，Sinha S K.Anomalous Amplification of the Amelogenin Locus Typed by AmpFLSTR［R］Profiler Plus［TM］Amplification Kit［EB/OL］.（2000-10-01）［2015-08-01］.http://go.galegroup.com/ps/anonymous？id=GALE| A137921528.

［4］Steinlechner M，Berger B，Niederstatter H，et al.Rare Failures in the Amelogenin Sex Test，Int legal Med，2002，（116）：117-120.

［5］陶曉嵐，聶笑聯.家系性男性Y-Amelogenin及DYS458基因同時缺失1例［EB/OL］.（2011-03-29）［2011-03-29］.http: //www.legalmed.org/web/paper/73.htm.

（本文編輯：李成濤）

DF795.4

Bdoi:10.3969/j.issn.1671-2072.2016.05.017

1671-2072-（2016）05-0099-02

2015-09-10

劉薇（1989—），女，法醫師，主要從事法醫DNA檢驗鑒定工作。E-mail:695152589@qq.com。