紫外分光光度法與反相高效液相色譜法測定阿昔洛韋眼用凝膠中阿昔洛韋的含量

李桂華

紫外分光光度法與反相高效液相色譜法測定阿昔洛韋眼用凝膠中阿昔洛韋的含量

李桂華

目的 探討紫外分光光度法及反相高效液相色譜法測定阿昔洛韋眼用凝膠中阿昔洛韋含量的可行性。方法 采用紫外分光光度法、反相高效液相色譜法根據相同方法制備阿昔洛韋眼用凝膠試品后于252 nm波長下測定其阿昔洛韋含量。結果 高效液相法測定阿昔洛韋眼用凝膠中阿昔洛韋含量為（100.49±0.14）%，明顯低于紫外分光光度法所測的（101.55±0.47）%，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 高效液相色譜方法因可有效分離相關物質，減少雜質干擾，方法簡單、結果準確、靈敏度高，相比于紫外分光光度法更利于阿昔洛韋凝膠中阿昔洛韋的含量測定。

反相高效液相色譜法；阿昔洛韋；眼用凝膠；紫外分光光度法

【Abstract】Objective To explore the feasibility of the determination of A Silowe in A Silowe ophthalmic gel by UV spectrophotometry and reversed phase high performance liquid chromatography.Methods By UV spectrophotometry，reversed phase high performance liquid chromatography according to the same method of preparing the aciclovir eye gel sample at 252 nm wavelength determination the content of aciclovir.Results Cntent of acyclovir in acyclovir ophthalmic gel（100.49±0.14）% lower than the measured UV spectrophotometry （101.55±0.47）%，the difference was statistically significant（P＜0.05）.Conclusion HPLC method is effective because of the separation-related substances，reducing interference of impurities，the method is simple，accurate and sensitive than UV spectrophotometry，it'is more conducive to the determination content of acyclovir in acyclovir gel.

【Key words】HPLC method；Acyclovir；Ophthalmic gel；UV spectrophotometry

阿昔洛韋因其選擇性高、不良反應發生率低、藥物耐受好，且為特異性抗單純皰疹病毒藥物［1］，已成為目前治療單皰病毒性角膜炎的最佳藥物［2］。早期眼部用藥治療多采用眼膏或滴眼劑，因使用方便、患者接受性好等特點，已廣泛應用于臨床。但近期研究發現，由于滴眼劑在眼內停留時間較多，易被體內吸收，藥物生物利用度低，重復多次應用又可能引發較多不良反應［3］。凝膠型眼用制劑的出現，有效解決了上述問題［4］。阿昔洛韋凝膠劑可有效解決單皰病毒性角膜炎治療需反復用藥、生物利用度低等問題［5］。如何快速測定此類眼用凝膠中主成分含量，有效監測此類藥物質量，已成為眾多藥學工作者所關注的熱點［6］。目前，檢測阿昔洛韋含量方法較多，以紫外分光光度法及高效液相色譜法為主［7］。本研究就紫外分光光度法及反相高效液相色譜法測定阿昔洛韋眼用凝膠中阿昔洛韋含量的可行性進行探討，現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1藥品與試劑 甲醇、冰醋酸，國藥集團化學試劑有限公司；阿昔洛韋對照品，中國藥品生物制品檢定所，批號：150913-151102；阿昔洛韋凝膠，江蘇圣寶羅藥業有限公司，批號：140911、150212、150622。

1.2儀器 島津LC-20A型高效液相色譜儀；島津UV-2501型紫外分光光度計；離心機（北京醫用離心機廠）。

2 方法與結果

2.1方法學驗證

2.1.1色譜條件 波長選擇：以流動相做空白對照，于200～400 nm波長下對阿昔洛韋對照品溶液進行全波長掃描，結果顯示在252 nm處阿昔洛韋有最大吸收；以空氣為對照，對流動相進行全波段掃描顯示，其在252 nm內基線平行，無干擾，故確定檢測波長252 nm。

色譜柱：Zorbax Extend C18不銹鋼柱（250 mm ×4 mm，5 μm）；流動相：水-甲醇-冰醋酸（90：10：0.1）；檢測波長：252 nm；流速：1.0 ml/min；柱溫：25 ℃。

2.1.2溶液制備

2.1.2.1供試品溶液的制備 精密稱取0.3 g阿昔洛韋凝膠，加入流動相25 ml稀釋，充分混勻后，3000 r/min，離心半徑10 cm，離心5 min，取上清液，0.2 mm微孔濾膜過濾，取續濾液做供試液。

2.1.2.2對照溶液的制備 精密量取阿昔洛韋對照品15 mg，置于100 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻即得。

2.1.3高效液相色譜法

2.1.3.1精密度試驗 精密量取20 μl對照品溶液，重復進樣6次，分別測定峰面積，并計算其相對標準偏差（RSD）=1.2%（小于2.0%），符合標準規定，結果表明本實驗精密度良好。

2.1.3.2重復性試驗 精密稱取同批號阿昔洛韋凝膠6份，根據供試品2.1.2.1項下操作制備溶液，取10 μl溶液注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，可得到6份供試品溶液的RSD，RSD=0.9%（小于2.0%），符合標準規定，因此具有良好重復性。

2.1.3.3穩定性試驗 取供試品溶液與對照品溶液，分別在0 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h精密量取10 μl溶液注入液相色譜儀中進行測定，對照品溶液峰面積的RSD為1.16%（小于2.0%），符合標準規定；供試品溶液峰面積RSD為1.23%（小于2.0%），符合標準規定，提示對照品及供試品溶液在48 h內均較穩定。

2.1.3.4回收率考察 分別精密稱取約10 mg同一批次的阿昔洛韋凝膠，保存至3個錐形瓶內，依次加入阿昔洛韋對照品2.23 mg、5.17 mg和10.31 mg，根據2.1.2.1項下步驟，取續濾液10 μl進樣，對峰面積進行測定，分別計算回收率為101.23%、101.18%和99.79%，平均回收率為100.67%，RSD為1.32%，與藥典標準相符。

2.1.3.5線性關系考察 精密稱取阿昔洛韋對照品13.4 mg置于100 ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，再分別精密量取0.05 ml、0.10 ml、0.20 ml、0.40 ml、0.80 ml、1 ml、2 ml、5 ml、6 ml溶液置于10 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得系列標準溶液，分別取10 μl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，并以峰面積對其濃度進行線性回歸，得線性方程為Y=633 417X－52 341（r=0.9996），結果表明，阿昔洛韋濃度在0.12～1.44 μg/ml范圍內與峰面積線性關系良好。

2.1.4紫外分光光度法 以流動相為空白于252 nm下，選擇2.1.3.6項下不同濃度對照品溶液進行紫外掃描，建立阿昔洛韋含量標準曲線，并以峰面積對其濃度進行線性回歸，得線性方程為Y=634 517X－55 321（r=0.9998），結果表明，阿昔洛韋濃度在0.12～1.44 μg/m范圍內與吸光度值線性關系良好。參考2.1.3.1項至2.1.3.4項下過程并結合藥典標準，對紫外分光光度法進行精密度、重復性、穩定性、回收率實驗，結果上述RSD均小于2%，與藥典標準相符。

2.2樣品中阿昔洛韋含量測定 結合上述檢測條件，分別測定阿昔洛韋對照品溶液與3批阿昔洛韋凝膠供試品溶液（取供試品0.2 g），高效液相色譜法及紫外分光光度法均采用自身對照組對供試品內的阿昔洛韋含量進行測定。

2.3結果 研究顯示，高效液相法測定阿昔洛韋凝膠中阿昔洛韋平均含量（與標識量比較）為（100.49± 0.14）%，而紫外分光光度法測定的平均含量為（101.55±0.47）%，兩組差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1　阿昔洛韋凝膠中阿昔洛韋含量測定結果（%）

3 討論

阿昔洛韋（C8H11N5O3）屬嘌呤類抗病毒藥物［8］，在高效液相色譜條件摸索過程中，通過前期試驗及文獻調查顯示［9-10］，凝膠中存在大分子物質，可導致色譜柱堵塞，進而影響測定［11］。經試驗分析，在酸性流動相處理后，對應高聚物配合離心可有效去除，故考慮先對樣品稀釋后離心，排除干擾［12］；在色譜條件選擇上，本研究參考了早期［13］的文獻報道，結合本實驗室條件優選所得。通過本研究結果可知，高效液相色譜法結果低于紫外分光光度法，相較而言，高效液相法更接近藥物標識含量。考慮為高效液相法通過色譜柱分離作用，將阿昔洛韋凝膠制備過程中的有關物質、雜質等干擾進行有效分離［14］，而紫外分光光度采用直接測定方式，故高效液相法測定結果相對更為準確，且對于已知工藝流程及相關物質已知情況，高效液相法相較于紫外分光光度法能更為方便的定位相關物質含量，從而更好地用于此類物質的質量控制，確保用藥安全［15］。

綜上所述，高效液相色譜法及紫外分光光度法測定阿昔洛韋凝膠中阿昔洛韋含量均具有準確性高、精密度好的特點，重現性和相關性均符合相關要求，但高效液相色譜法所測結果更接近藥物真實含量，建議考慮此種方式來測定阿昔洛韋凝膠中阿昔洛韋含量。

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Determination of A Silowe in A Silowe Ophthalmic Gel by UV Spectrophotometry and Reversed Phase high Performance Liquid Chromatography

Li Guihua

R927.2

A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.09.004

新疆瑪納斯佳園醫院，新疆昌吉回族自治州 832200

李桂華（1967.9-），碩士學位，副主任藥師。研究方向：藥劑及藥事管理