隱性乳房炎奶牛乳清中部分酶活性變化

尹柏雙　王秋竹　付連軍

摘要：選取18頭患不同程度隱性乳房炎奶牛和6頭健康奶牛為試驗動物，采集乳汁，分離乳清，利用比色法檢測乳清中LDH、NAG活性，研究奶牛隱性乳房炎發病與乳清中LDH、NAG活性的關系。結果表明，隨著隱性乳房炎病情加重，乳清中LDH、NAG活性呈升高的趨勢。乳清中LDH、NAG活性與奶牛隱性乳房炎發病嚴重程度呈正相關性，隨著體細胞數增加和乳腺炎癥的加劇，乳清中LDH、NAG活性隨之升高。

關鍵詞：奶牛；隱性乳房炎；乳清；乳酸脫氫酶

中圖分類號： S858.23 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2016）07-0276-02

奶牛乳房炎是危害奶牛養殖業最嚴重的疾病之一，其中隱性乳房炎發生率最高。隱性乳房炎可引起泌乳奶牛產奶量下降、牛奶品質降低、養殖成本增加、產后發情延長、妊娠時間推遲，給奶牛養殖業帶來巨大經濟損失[1]。乳酸脫氫酶（LDH）和N-乙酰基-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）廣泛存在于動物組織及體液中，白細胞和乳腺上皮細胞損傷會引起乳中LDH活性改變[2]，炎癥時白細胞釋放NAG，病原菌破壞乳腺組織也可使NAG釋放[3]。研究表明，奶牛乳房炎發病時引起乳汁體細胞數（SCC）增加，SCC作為監測奶牛乳房炎發病情況的可靠指標[4]，奶牛隱性乳房炎發病與乳中LDH、NAG酶活性相關，乳中SCC變化與乳酶活性呈正相關[5-6]。本研究探討不同發病階段的奶牛隱性乳房炎與乳汁中LDH、NAG酶活性的關系，旨在為該病的臨床診斷提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

乳汁體細胞計數監測后選擇年齡、胎次、產奶量、泌乳期等指標相近的6頭健康奶牛和18頭患不同程度奶牛隱性乳房炎奶牛，由吉林市某奶牛場提供。

1.2 主要試劑與儀器

LDH檢測試劑盒、NAG檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所）；Fossmatic 5000體細胞計數儀（丹麥FOSS 公司）；Varioskan 酶標儀（美國Thermo 公司）；離心機（美國Sigma公司）。

1.3 試驗動物分組

乳汁體細胞計數監測后將試驗奶牛分成健康對照組（6頭，SCC≤10×104個/mL）、輕度隱性乳房炎組（6頭，50×104個/mL500×104個/mL）。

1.4 乳樣采集

采集試驗奶牛的乳汁，采樣前對乳區進行清洗，用75%乙醇消毒乳區，棄掉頭3 把乳汁，分別采乳10 mL裝入無菌試管中，將乳樣放入冰盒中，帶回實驗室檢測。

1.5 乳清制備

將采集的乳樣3 000 r/min離心5 min，除去上層乳脂，于16 000 r/min高速離心機中離心10 min，去除沉淀，保留上清，4 ℃保存，待測。

1.6 檢測方法

采用體細胞計數儀測定乳汁體細胞數，采用LDH試劑盒測定LDH活性，采用NAG試劑盒測定NAG活性，在酶標儀上440 nm處比色測定D值，根據試劑盒說明書計算酶活性。

1.7 數據處理

采用SPSS 17.0軟件進行單因素方差分析，結果以“平均值±標準差”表示。

2 結果與分析

2.1 奶牛乳清中LDH活性變化

如表1所示，患輕度奶牛隱性乳房炎奶牛乳清中LDH活性為（184.15±13.27）U/L，與對照組差異極顯著；患中度奶牛隱性乳房炎奶牛乳清中LDH活性為（359.79±19.49）U/L，與對照組差異極顯著；患重度奶牛隱性乳房炎奶牛乳清中LDH活性為（829.63±21.48）U/L，與對照組差異極顯著。隨著奶牛隱性乳房炎病情加重，乳清中LDH活性呈升高的趨勢。

2.2 奶牛乳清中NAG活性變化

如表2所示，患輕度奶牛隱性乳房炎奶牛乳清中NAG活性為（42.44±8.55）U/L，與對照組差異顯著；患中度奶牛隱性乳房炎奶牛乳清中NAG活性為（62.93±13.45）U/L，與對照組差異極顯著；患重度奶牛隱性乳房炎奶牛乳清中NAG活性為（91.61±15.96）U/L，與對照組差異極顯著。隨著奶牛隱性乳房炎病情加重，乳清中NAG活性呈升高的趨勢。

3 結論與討論

3.1 奶牛隱性乳房炎與乳清中LDH相關性

LDH是由H和M亞基聚合成5種不同形式的四聚體，廣泛存在于動物組織和體液中。研究表明，LDH活性與奶牛隱性乳房炎發病存在一定的聯系[7]。Babaei等報道，患隱性乳房炎奶牛乳區乳汁中LDH活性顯著高于正常乳區[5]。Hortet等報道，疾病導致乳腺功能的改變引起乳汁中LDH活性發生相應變化[8]。牛乳中LDH活性可作為監測隱性乳房炎的指標之一[9]。在隱性乳房炎發病過程中，LDH起著非常重要作用，可作為診斷隱性乳房炎和乳腺損害的重要指標之一。研究表明，乳房炎發病引起乳汁中LDH變化的主要原因是由于乳腺上皮細胞的破壞、炎癥過程引起白細胞大量聚集，使損害的上皮細胞和大量的乳汁細胞釋放LDH增多[10]。乳汁中LDH活性的增加量可以反映乳腺組織的損害程度[11]。本研究結果表明，奶牛隱性乳房炎發病引起乳汁中LDH活性升高，隨著乳房炎病情的加重，乳汁中LDH活性呈逐漸升高趨勢，LDH活性與乳腺損傷程度呈正相關。

3.2 奶牛隱性乳房炎與乳清中NAG相關性

NAG是一種溶菌酶，可作為乳腺上皮細胞破壞的標志[12]。乳房炎發病與NAG關系密切，乳房炎發生時血清中NAG活性明顯升高，該酶可用作奶牛隱性乳房炎的診斷指標之一，對于隱性乳房炎的早期診斷具有重要意義[6]。研究發現，NAG在隱性乳房炎奶牛乳中NAG活性會增加，且與白細胞的增加有關[13-14]。NAG活性變化不僅與體細胞數量相關，且與不同細菌感染也有相關性[15]。葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌感染時，NAG活性與體細胞數相關系數較高[16-17]。本研究結果表明，奶牛隱性乳房炎發病引起乳汁中NAG活性升高，隨著乳房炎病情的加重，乳汁中NAG活性呈逐漸升高的趨勢。患隱性乳房炎奶牛乳清中LDH、NAG活性與奶牛隱性乳房炎發病程度呈正相關性，隨著體細胞數增加和乳腺炎癥的加劇，乳清中LDH、NAG活性隨之升高。

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