全自動血凝儀定量檢測D-二聚體兩種試劑的比較研究

趙秀清　吳曉慧

全自動血凝儀定量檢測D-二聚體兩種試劑的比較研究

趙秀清①吳曉慧①

目的：探討全自動血凝儀ACLTOP-700免疫比濁法快速定量檢測D-二聚體（D-Dimer）兩種試劑的比較，借以判斷兩種試劑的優劣。方法：選取532例住院患者，其中不穩定心絞痛患者388例，肺栓塞患者60例，冠狀動脈硬化患者70例，腹主動脈瘤患者14例，其余為高血壓和冠心病患者。抽取所有患者靜脈血于ACL-TOP上分別使用D-二聚體測定試劑盒D-Dimer和D-DHS兩種試劑檢測D-Dimer含量。結果：D-Dimer檢測結果均有不同程度的增高，其中假陽性病例88例，纖維蛋白降解產物（FDP）和D-Dimer同時檢測單項D-Dimer升高者，且無任何臨床癥狀，均由VIDAS儀器檢測平臺進行驗證。D-Dimer試劑檢測D-Dimer的結果為1594.15±2286.18，D-DHS試劑檢測D-Dimer的結果為912.97±1814.06，兩者有顯著差異（t=3.654，P＜0.05）。兩種試劑的一致性較差，其相比有差異（r=0.419，P＜0.05）。結論：全自動血凝儀ACLTOP免疫比濁法快速定量檢測D-Dimer，D-Dimer和D-DHS兩種試劑比較，D-DHS試劑排除假陽性的能力明顯較強，且對黃疸、溶血和乳糜血的抗干擾能力較強。

D-二聚體試劑；抗干擾；實驗診斷；血凝儀

［First-author’s address］ Department of Laboratory Medicine， Beijing Anzhen Hospital， Capital Medical University，Beijing 100029， China.

D二聚體（D-Dimer）是交聯纖維蛋白在纖溶酶的作用下水解的降解產物，在深靜脈血栓和肺栓塞的排查及風險評估、彌漫性血管內凝血的診斷以及溶栓治療的監測等方面具有明確的臨床價值［1-3］。由于不同檢測試劑中的關鍵成分不同，而D-Dimer單克隆抗體是針對不同相對分子質量的纖維蛋白降解片段所制備，與血漿中待測D-Dimer抗原的結合位點不同，試劑抗干擾能力不同、檢測敏感性不同，導致檢測結果存在檢測系統和試劑系統間的差異，相關性較差，不同檢測方法間D-Dimer結果的可比性也較差［4-5］。

D-Dimer作為體內高凝狀態和繼發性纖溶亢進的分子標志物之一，是血栓溶解的直接證據。因此，臨床上采用何種方法和試劑檢測D-Dimer最敏感和最特異，是本研究的重點所在。為此，本研究評估D-DHS試劑與傳統D-Dimer試劑的異同，旨在為臨床應用提供參考依據。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2015年3-10月首都醫科大學附屬北京安貞醫院532例住院患者，其中男性275例，女性257例；年齡29～91歲，平均年齡63歲。所有患者中包含不穩定心絞痛患者388例，肺動脈血栓栓塞患者60例，冠狀動脈粥樣硬化患者70例，腹主動脈瘤患者14例，其余為高血壓、冠心病等患者。

1.2納入與排除標準

（1）納入標準：所有患者均有D-dimer不同程度的增高，高于正常參考范圍上限2倍以上（0～243 μg/L），且標本均無黃疸、乳糜血和溶血。

（2）排除標準：D-Dimer結果稍高但有溶血、乳糜血及黃疸的標本除外，纖維蛋白原（fibrinogen，FIB）、纖維蛋白降解產物（fibrin degradation product，FDP）結果高的除外。

1.3儀器與材料

采用ACL-TOP全自動血凝儀（美國貝克曼庫爾特公司），VIDAS/VIDAS30全自動熒光分析儀（法國Biomerieux公司），SIGMA-318K型離心機（德國Sigma）。D-Dimer試劑和D-DHS試劑其配套質控品均來源于意大利HemosiL公司，后者是前者的新一代產品；一次性真空采血管（美國BD公司）。

1.4檢測方法

（1）所有樣本均在患者安靜狀態下，使用109mmol/ L檸檬酸鈉1∶9抗凝的一次性真空采血管，由肘正中靜脈穿刺抽血，輕輕顛倒混勻5～6次，以3000 r/min離心15 min，獲得乏血小板血漿（platelet-poor plasma，PPP），上機檢測，所有樣本均在2 h內檢測完畢。

（2）D-Dimer上機檢測的方法是免疫比濁法，按照標準操作規程（standard operation procedures，SOP）操作，上機使用D-Dimer試劑和D-DHS試劑分別進行D-Dimer含量的檢查。然后記錄數據，每次檢測前，確保當日的低水平和高水平的D-Dimer室內質控均在控。

1.5評價指標

評價兩種試劑是否具有相關性，D-Dimer試劑為常用試劑，D-DHS試劑為抗干擾新試劑，評價D-DHS試劑是否具有更好的抗干擾能力和更高的檢測靈敏度。

1.6統計學方法

采用SPSS for window 13.0軟件分析實驗數據。對實驗數據采用正態性檢驗，正態分布的計量資料結果以均值±標準差（x-±s）表示，計量資料組間比較采用Wilcoxon檢驗，配對設計的兩樣本率比較采用配對t檢驗，以P＜0.005為差異有統計學意義。

2　結果

2.1兩種試劑測定結果

D-Dimer試劑和D-DHS試劑檢測D-Dimer的參考值范圍和cut off值均相同，比較兩者檢測所得結果的一致性。532份標本的D-Dimer試劑和D-DHS試劑測定結果分別為1594.15±2286.18和912.97±1814.06，兩種試劑檢測D-Dimer的結果比較，差異有統計學意義（t=3.654，P＜0.05），見表1。

表1　兩種試劑測定D-Dimer結果比較

表1　兩種試劑測定D-Dimer結果比較

檢測試劑　　　D-Dimert值P值D-Dimer1594.15±2286.183.6540.0000 D-DHS912.97±1814.06

2.2兩種試劑測定結果的符合性

兩種試劑測定的正常結果和異常結果的符合率僅為73.49%（244/332），不符合率達到26.51%（88/332）。兩種試劑測定結果的符合性依次為100%、75.9%和47.7%。D-Dimer含量越高，兩種試劑的符合率就越低。

2.3試驗結果的相關性

將D-DHS試劑盒與已經商業化的HemosIL D-Dimer試劑盒進行比較，在ACL TOP所有患者D-Dimer測定得到的相關系數（r）為0.936；臨床患者均見有D-Dimer水平提高。兩種試劑的一致性較差，其差異有統計學意義（r=0.419，P＜0.05），見表2。

表2　兩種試劑相關性比較

3　討論

全自動血凝儀的廣泛使用為血栓和止血診療提供了許多指標，極大的提高了檢驗效率［6-9］。由于ACLTOP血凝儀的廣泛應用，D-Dimer項目也在此儀器中廣泛開展，其試劑也隨著更新換代，由傳統D-Dimer試劑換成了抗干擾能力更強的D-DHS試劑，而這兩種試劑測量值之間的相關性、動態變化趨勢的一致性、陰性排查能力及干擾能力等差異尚無報道，這將給臨床醫生帶來困擾；以D-DHS試劑為標準，當D-Dimer的檢測結果在＜243 μg/L正常范圍內時，兩種試劑的檢測結果的符合率為100%，而D-Dimer的檢測結果在243～2000 μg/L范圍內時，檢測結果的符合率為75.9%，而當D-Dimer的檢測結果＞2000 μg/L時，檢測結果的符合率為47.7%，經兩種試劑檢測，共有86個標本嚴重不符，通過VIDAS試驗結果驗證95%為D-Dimer試驗假陽性；其中有84例標本中D-Dimer試劑陽性的標本D-DHS試劑也是陽性，只是陽性的程度不一樣，D-DHS試劑陽性的結果較之D-Dimer試劑降低了很多，但有58.1%結果由異常降至正常范圍內；其中有兩例D-Dimer試劑D-Dimer結果為10589 μg/L和20452 μg/L，但D-DHS試劑結果降至35 μg/L和46 μg/L，表明之前的結果是假陽性。D-DHS試劑對血紅蛋白、膽紅素、三酰甘油、類風濕因子以及FDP的抗干擾濃度分別達到500 mg/dl、18 mg/dl、1327 mg/ dl、1400 IU/ml以及10 μg/ml時，結果均不受影響。

D-Dimer作為交聯纖維蛋白的特異降解產物，其檢測廣泛用于排除深靜脈血栓癥和肺栓塞。動態觀察患者體內的D-Dimer水平變化，對高凝狀態和血栓性疾病的診斷及預后判斷有一定實用價值［10］。“醫療機構臨床實驗室管理辦法”要求檢驗同一項目的不同方法、不同檢測系統或不同品牌檢測儀器均應至少每半年進行一次結果比對，當結果比對不符合要求時必須予以改正。因此，比對不同檢測系統或不同品牌檢測儀器之間的檢測結果，確保實驗室內檢測結果的一致具有極其重要的意義［11］。

本研究中的532份標本中，共有50個標本嚴重不符，其中48個標本D-Dimer試劑陽性，而使用D-DHS試劑結果是陰性的，經過VIDAS試驗結果驗證，D-DHS試劑是符合的，而在0～243 μg/L范圍之間，符合率是100%，在243～2000 μg/L范圍內，符合率達到了76%，在＞2000 μg/L（DDU）中，符和率達到了47.7%，表明D-Dimer的值越高，兩種試劑的符合率越差。所以用抗干擾的D-DHS試劑排除了其他的干擾，最接近真實的D-Dimer結果，應是臨床應用最好的試劑，線性范圍也很廣，最高值能達到69000 μg/L。

有研究表明，測定D-Dimer時，抗體對D-Dimer不同片段有不同的親和力，抗原表達的時間依賴性、檢測的形式、血漿中抗原呈現的基質效應以及非特異性干擾物等，不同的試劑有不同的干擾情況，不同的方法的檢測性能不一樣，因此不同的標準導致同一個患者的結果不一樣，因此較為可行的方法是同一實驗室內盡量采用一種D二-Dimer的測定方法［12］。由于不同儀器、試劑及校準品等組成的檢測體系對檢測結果的影響，對同一項目不同儀器的檢測結果進行定期比對，判斷其差異是否在臨床可接受范圍內是極其重要的［13-14］。試劑通過不斷的進行更新，方可使檢驗結果更準確，達到更好的一致性。本研究使用免疫比濁法不僅快速準確，受干擾因素少，而且一個批次檢測樣本量比較大，更適合在樣本量大的醫院使用［15］。為此，該類儀器均應至少每半年進行1次結果比對，當結果比對為臨床不可接受時，查明原因后必須予以糾正。

綜上所述，凝血常規檢查是有創檢查前必須檢測的項目，同時也是口服抗凝藥物、肝素治療及溶栓治療等患者監測病情及療效必不可少的檢測項目。因此，保證不同檢測儀器檢測結果的一致性至關重要［16］。試劑的質量是保證檢驗質量的重要影響因素，對臨床檢驗結果的準確性具有重要意義。

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A comparative study on the quantitative detection of two reagents of D-Dimer by automatic coagulation analyzer

ZHAO Xiu-qing， WU Xiao-hui

China Medical Equipment，2016，13（9）:49-52.

Objective: To investigate the detection ability of two reagents by automated coagulation analyzer ACL-TOP using immune turbidimetric method， and to determine the merits and demerits of them. Methods: Two reagents were compared in the study. We selected 532 cases of hospitalized patients in Anzhen Hospital， 388 cases of which were unstable angina， 60 cases were pulmonary thromboembolism， 70 cases were coronary atherosclerosis， 14 cases were abdominal aneurysm， and the rest were the patients with high blood pressure and coronary heart disease. The plasmas of all the patients were extracted，and D-dimer was detected on ACL-TOP by D-Dimer （referred to as reagent A） and D-DHS （referred to as reagent B）. Results: The results of D-dimer increased in different degrees， and there are 88 cases of false positive cases. The case whose FDP and individual D-dimer of D-dimer simultaneous detection was elevating and clinical symptoms were disappeared was detected by the VIDAS instrument platform verification. There were significant differences between A and B. The detection result of reagent A was ［1594.15±2286.18］， and reagent B was ［912.97±1814.06］. There were significant differences between them （t=3.654， P＜0.05）. In addition， the consistency of the two reagents was poor（r=0.419， P＜0.05）. Conclusion: Comparing two reagents to detect D-dimer quantitatively by automated coagulation analyzer ACL-TOP， D-DHS owns greater ability to exclude false-positive results， so does the ability of anti-interference with jaundice， hemolysis and chylemia.

D-Dimer reagent； Anti-interference； Laboratory diagnosis； Coagulation analyzer

1672-8270（2016）09-0049-04

R446.6

A

10.3969/J.ISSN.1672-8270.2016.09.015

2016-05-05

①首都醫科大學附屬北京安貞醫院檢驗科 北京 100029

趙秀清，女，（1963- ），本科學歷，主管技師。首都醫科大學附屬北京安貞醫院檢驗科，從事醫學檢驗工作。