傳染病醫(yī)院全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀復(fù)檢規(guī)則的建立

耿　偉　楊　寧　李　妍　申　艷　蔡　碩　王　晗*

傳染病醫(yī)院全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀復(fù)檢規(guī)則的建立

耿偉①楊寧①李妍①申艷①蔡碩①王晗①*

目的：參考SysmexXE-2100血細(xì)胞分析儀復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)，依據(jù)國(guó)內(nèi)專家組推薦的23條復(fù)檢規(guī)則，通過(guò)對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，制定適合傳染病醫(yī)院使用的血細(xì)胞復(fù)檢規(guī)則。方法：隨機(jī)選取704份醫(yī)院患者血液標(biāo)本，檢測(cè)血常規(guī)的同時(shí)涂片鏡檢。以專家組推薦的23條復(fù)檢規(guī)則為評(píng)估基礎(chǔ)，根據(jù)傳染病醫(yī)院病種特點(diǎn)，優(yōu)化相應(yīng)復(fù)檢規(guī)則，以涂片鏡檢為金標(biāo)準(zhǔn)，分別計(jì)算出血細(xì)胞的真陽(yáng)性率、假陽(yáng)性率、真陰性率、假陰性率和涂片復(fù)檢率。結(jié)果：初始復(fù)檢規(guī)則評(píng)估結(jié)果真陽(yáng)性率10.93%，假陽(yáng)性率42.05%，真陰性率44.60%，假陰性率2.41%；涂片復(fù)檢率52.98%。第1次優(yōu)化后結(jié)果真陽(yáng)性率9.80%，假陽(yáng)性率19.89%，真陰性率67.19%，假陰性率3.13%；涂片復(fù)檢率29.69%。第2次優(yōu)化后結(jié)果真陽(yáng)性率9.23%，假陽(yáng)性率16.05%，真陰性率71.16%，假陰性率3.55%；涂片復(fù)檢率25.28%。最終評(píng)估結(jié)果涂片復(fù)檢率＜30%，假陰性率均＜5.0%，且不漏檢白血病細(xì)胞。結(jié)論：初步建立的適用于傳染病醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀復(fù)檢規(guī)則，可有效提高血細(xì)胞檢驗(yàn)工作效率。血細(xì)胞復(fù)檢規(guī)則應(yīng)在血細(xì)胞檢驗(yàn)工作中不斷改進(jìn)和完善。

血細(xì)胞分析儀；復(fù)檢規(guī)則；傳染病醫(yī)院

［First-author’s address］ Center for Clinical Laboratory， The 302 PLA Hospital， Beijing 100039， China.

近年來(lái)，隨著檢驗(yàn)技術(shù)的迅猛發(fā)展，全血細(xì)胞分析儀因具有先進(jìn)的檢測(cè)原理、多模式檢測(cè)設(shè)計(jì)以及較高的工作效率和準(zhǔn)確率，已經(jīng)被國(guó)內(nèi)醫(yī)院廣泛使用。然而，血細(xì)胞分析儀尚不具備完全識(shí)別血細(xì)胞形態(tài)的能力，而血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查是一種篩查手段，對(duì)于形態(tài)可疑或者異常的標(biāo)本還需進(jìn)行人工顯微鏡復(fù)檢，因此制定合理的復(fù)檢規(guī)則尤為重要［1-3］。

2005年，國(guó)際血液學(xué)復(fù)檢專家組經(jīng)研究推薦了國(guó)際41條自動(dòng)血細(xì)胞分析和白細(xì)胞分類復(fù)檢規(guī)則［3-7］；2008年，國(guó)內(nèi)專家組制定了適合于中國(guó)人群應(yīng)用XE-2100血細(xì)胞分析儀白細(xì)胞分類的23條涂片復(fù)檢規(guī)則［8］。但作為通則，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)室特點(diǎn)進(jìn)行修正。傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的特點(diǎn)是血小板減少、單核細(xì)胞增生、血色素降低以及白細(xì)胞減低的患者較多，與肝病用藥、感染病臨床及并發(fā)癥等相關(guān)［9-14］。為此，本研究依據(jù)國(guó)內(nèi)專家組推薦的23條復(fù)檢規(guī)則，使用血細(xì)胞分析儀檢測(cè)704份患者血常規(guī)標(biāo)本，通過(guò)結(jié)果評(píng)估，對(duì)復(fù)檢規(guī)則進(jìn)行適當(dāng)修改和完善，制定出適合傳染病醫(yī)院使用的復(fù)檢規(guī)則。

1　材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源

選取2016年3月在解放軍第302醫(yī)院的就診和住院的704份患者血標(biāo)本，其中住院患者288例，門診患者416例；平均年齡46歲；乙型肝炎患者457例，丙型肝炎患者152例，其他病毒如艾滋病病毒（human immunodeficiency virus，HIV）、人類皰疹病毒第四型（epstein-barr virus，EBV）及巨細(xì)胞病毒（cytomegalovirus，CMV）等感染患者95例。所有標(biāo)本均采用EDTA-K2抗凝，并于采血后2 h內(nèi)用XE-2100自動(dòng)進(jìn)樣模式進(jìn)行分析。所有標(biāo)本均制片，人工鏡檢為金標(biāo)準(zhǔn)。

1.2儀器與試劑

采用XE-2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（日本Sysmex公司）、原裝配套試劑、標(biāo)準(zhǔn)物和質(zhì)控物；Olympus雙筒顯微鏡（日本奧林巴斯光學(xué)工業(yè)株式會(huì)社），用于血涂片顯微鏡檢查；劉氏染液購(gòu)自珠海貝索生物技術(shù)有限公司，用于血涂片染色。

1.3儀器校準(zhǔn)和質(zhì)量控制

檢測(cè)前，由Sysmex公司工程師用SCS-1000全血標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)。校準(zhǔn)完成后采用高、中、低3個(gè)水平的e-check全血質(zhì)控物進(jìn)行嚴(yán)格的室內(nèi)質(zhì)量控制。

1.3.1手工復(fù)檢要求

依照“全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程”和“白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)參考方法”［15-16］中制定的血涂片檢測(cè)操作程序進(jìn)行涂片和染色，由2名工作經(jīng)驗(yàn)超過(guò)10年并有中級(jí)以上專業(yè)技術(shù)職稱的人員對(duì)所有檢測(cè)標(biāo)本進(jìn)行雙盲法人工顯微鏡鏡檢。復(fù)檢內(nèi)容包括：①白細(xì)胞（WBC）分類計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)200個(gè)WBC，為人工WBC分類值，并進(jìn)行形態(tài)觀察；②WBC和血小板（PLT）數(shù)量評(píng)估；③紅細(xì)胞（RBC）和PLT的大小、染色及形態(tài)；④有無(wú)巨大PLT和PLT聚集；⑤其他異常，有核紅細(xì)胞（nucleated red blood cell，NRBC）、RBC冷凝集及寄生蟲等。

1.3.2涂片鏡檢陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)

涂片鏡檢陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)為：①RBC明顯大小不等，即細(xì)胞大小相差＞1倍，中空淡染，指＞1/2淡染區(qū)的RBC數(shù)量＞30%，原規(guī)則為RBC形態(tài)≥2+，且只要發(fā)現(xiàn)瘧原蟲均認(rèn)為是紅細(xì)胞有陽(yáng)性形態(tài)學(xué)改變；②巨大PLT數(shù)量＞15%，原規(guī)則為巨大PLT≥2+；③鏡檢可見PLT聚集，原規(guī)則為PLT偶見聚集；④Dohle小體的粒細(xì)胞＞10%，原規(guī)則為Dohle小體≥2+；⑤中毒顆粒中性粒細(xì)胞＞10%，原規(guī)則為中毒顆?！?+；⑥空泡變性細(xì)胞＞10%，原規(guī)則為空泡變性≥2+；⑦原始和幼稚細(xì)胞≥1%；⑧早幼粒細(xì)胞和中幼粒細(xì)胞≥1%；⑨晚幼粒細(xì)胞＞2%；⑩異形淋巴細(xì)胞＞5%，NRBC≥1%，漿細(xì)胞≥1%［17］。

1.3.3復(fù)檢規(guī)則的臨床應(yīng)用評(píng)估及預(yù)期目標(biāo)

將國(guó)內(nèi)專家組推薦的23條復(fù)檢規(guī)則錄入到Laboman4.0軟件中，作為傳染病醫(yī)院XE-2100自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)和WBC分類初始復(fù)檢規(guī)則并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。根據(jù)傳染病醫(yī)院的特點(diǎn)通過(guò)分析觸及的主要規(guī)則進(jìn)行規(guī)則調(diào)整，預(yù)期目標(biāo)為通過(guò)評(píng)估，其復(fù)檢率＜30%，假陰性率＜5.0%，且不漏檢白血病細(xì)胞［6］。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用Microsoft Excel軟件和統(tǒng)計(jì)分析軟件“Laboman easy aecess 4.2 s”進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。以鏡檢結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)估各復(fù)檢規(guī)則對(duì)標(biāo)本判斷的真陽(yáng)性率、假陽(yáng)性率、真陰性率、假陰性率和涂片復(fù)檢率，涂片復(fù)檢率=真陽(yáng)性率+假陽(yáng)性率。真陽(yáng)性為觸及復(fù)檢規(guī)則且鏡檢結(jié)果為陽(yáng)性，鏡檢形態(tài)學(xué)異常與所觸發(fā)的規(guī)則無(wú)需一一對(duì)應(yīng)；假陽(yáng)性為觸及復(fù)檢規(guī)則但鏡檢結(jié)果為陰性；真陰性為不觸及復(fù)檢規(guī)則且鏡檢結(jié)果為陰性；假陰性為不觸及復(fù)檢規(guī)則但鏡檢結(jié)果為陽(yáng)性。

2　結(jié)果

2.1初始復(fù)檢規(guī)則臨床應(yīng)用效果評(píng)估

以鏡檢結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)704例標(biāo)本按初始復(fù)檢規(guī)則進(jìn)行評(píng)估，真陽(yáng)性率為10.93%（77/704），假陽(yáng)性率為42.05%（276/704），真陰性率為44.60%（314/704），假陰性率為2.41%（17/704），涂片復(fù)檢率為52.98%（373/704）。需要復(fù)檢的373例標(biāo)本，單條觸及復(fù)檢規(guī)則所占百分比較高的假陽(yáng)性規(guī)則統(tǒng)計(jì)見表1。

2.2調(diào)整優(yōu)化初始復(fù)檢規(guī)則

初始復(fù)檢規(guī)則中第3，4，5，11，12條假陽(yáng)性率較高，調(diào)整初檢規(guī)則：將第3條改為WBC＜2.0×109/ L或＞30.0×109/L；將第4條改為PLT＜40×109/L或＞1000×109/L；將第5條改為HB＜60 g/L或＞180 g/ L；將第11條改為Neut%＜30%或＞80%；將第12條改為L(zhǎng)ym%＞50%。

表1　單條觸及復(fù)檢規(guī)則所占百分比較高的假陽(yáng)性規(guī)則統(tǒng)計(jì)

2.3第一次優(yōu)化后復(fù)檢規(guī)則評(píng)估

根據(jù)調(diào)整后的復(fù)檢規(guī)則分析704份標(biāo)本的儀器檢測(cè)數(shù)據(jù)，真陽(yáng)性率為9.80%（69/704），假陽(yáng)性率為19.89%（140/704），真陰性率為67.19%（473/704），假陰性率為3.13%（22/704），涂片復(fù)檢率為29.69%（209/704）。與規(guī)則調(diào)整前比較涂片復(fù)檢率明顯下降。

2.4第二次調(diào)整優(yōu)化復(fù)檢規(guī)則及應(yīng)用評(píng)估

在第一次優(yōu)化后的基礎(chǔ)上將第12條改為L(zhǎng)ym%＞55%并與第19條組合，將第13條改為Mono%＞15%；將第14條改為Eos%＞7%。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，假陽(yáng)性率、真陽(yáng)性率和涂片復(fù)檢率進(jìn)一步降低，假陰性率略微升高，但依然在預(yù)期目標(biāo)內(nèi)，且無(wú)白血病細(xì)胞漏檢。將具體評(píng)估結(jié)果與初始規(guī)則及第一次優(yōu)化后的評(píng)估結(jié)果相比較，見表2。

表2　三種復(fù)檢規(guī)則評(píng)估結(jié)果比較[%(n)]

2.5傳染病醫(yī)院復(fù)檢規(guī)則的建立

本研究通過(guò)對(duì)初始規(guī)則兩次調(diào)整及結(jié)果評(píng)估比較，初步建立了適用于傳染病醫(yī)院的XE-2100自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類涂片復(fù)檢規(guī)則，見表3。

表3　傳染病醫(yī)院XE-2100自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類涂片復(fù)檢規(guī)則

3　討論

傳染病?？漆t(yī)院主要收治病毒感染患者及因病毒感染導(dǎo)致的并發(fā)癥患者，患者以乙型、丙型肝炎肝硬化患者為主，同時(shí)包括CMV、EBV、瘧原蟲及HIV等疾病患者。病毒感染及抗病毒會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)白細(xì)胞總數(shù)降低，淋巴及單核細(xì)胞偏高，血小板降低，紅系減少等癥狀［18-20］。因此，建立復(fù)檢規(guī)則時(shí)應(yīng)充分考慮這些情況。

將國(guó)內(nèi)專家組推薦的23條復(fù)檢規(guī)則作為初始規(guī)則，通過(guò)檢測(cè)結(jié)果對(duì)該規(guī)則進(jìn)行評(píng)估后發(fā)現(xiàn)，704份標(biāo)本盡管假陰性率很低（為2.41%），真陽(yáng)性率為10.93%，但假陽(yáng)性率高達(dá)42.05%，直接導(dǎo)致涂片鏡檢率過(guò)高（為52.98%）及工作效率降低。對(duì)觸及復(fù)檢規(guī)則的假陽(yáng)性規(guī)則統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，占百分比較高的假陽(yáng)性參數(shù)為WBC和PLT，這與國(guó)內(nèi)專家組的研究報(bào)告一致［8］。因此，基于傳染病醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果特點(diǎn)，第一次復(fù)檢規(guī)則優(yōu)化時(shí)首先對(duì)WBC、PLT、Neut%、LYM%及HB的參數(shù)進(jìn)行調(diào)整。

目前，國(guó)際、國(guó)內(nèi)專家組推薦的白細(xì)胞分類復(fù)檢規(guī)則以絕對(duì)值計(jì)算，且下限數(shù)值很高，但鏡檢陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)白細(xì)胞分類數(shù)量陽(yáng)性判斷規(guī)則，且國(guó)內(nèi)多數(shù)實(shí)驗(yàn)室對(duì)白細(xì)胞分類復(fù)檢都是以百分比計(jì)算。因此，本研究對(duì)白細(xì)胞分類復(fù)檢規(guī)則調(diào)整都采用百分比形式。第一次優(yōu)化后復(fù)檢規(guī)則的評(píng)估結(jié)果顯示假陽(yáng)性率19.89%，假陰性率3.13%，涂片復(fù)檢率29.69%，與規(guī)則調(diào)整前比較其涂片復(fù)檢率明顯下降。

通常將外周血異型淋巴細(xì)胞增多作為傳染性單核細(xì)胞增多癥的判斷依據(jù)之一，通過(guò)對(duì)觸及Atypical/ Variant Lymphs復(fù)檢規(guī)則的樣本進(jìn)行分析，鏡檢可見異型淋巴細(xì)胞，但其均＜5%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。王厚芳等［21］將桿狀核粒細(xì)胞比率＞5.0%、單核細(xì)胞比率＞12.0%、嗜酸性粒細(xì)胞比率＞10.0%和嗜堿性粒細(xì)胞比率＞2.0%納入鏡檢陽(yáng)性判斷規(guī)則，涂片復(fù)檢率下降，假陰性率僅略微增加，仍在國(guó)際血液學(xué)專家組確定的5.0%的可接收范圍內(nèi)。因此，本研究嘗試將Lym%＞55%與Atypical/Variant Lymphs組合，調(diào)整Mono%＞15%，Eos%＞7%進(jìn)行第二次復(fù)檢規(guī)則優(yōu)化，優(yōu)化后評(píng)估結(jié)果顯示假陽(yáng)性率、真陽(yáng)性率及涂片復(fù)檢率進(jìn)一步降低，并取得了很好的效果。假陰性率僅由3.13%上升為3.55%，對(duì)假陰性的標(biāo)本分析發(fā)現(xiàn)，假陰性主要由巨大血小板、血小板聚集、紅細(xì)胞形態(tài)異常以及少量有核紅細(xì)胞所致，而有診斷意義的白血病細(xì)胞則無(wú)漏檢。

4　結(jié)語(yǔ)

通過(guò)兩次優(yōu)化復(fù)檢規(guī)則，本研究初步建立了適用于傳染病醫(yī)院XE-2100自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類涂片復(fù)檢規(guī)則，滿足設(shè)定的預(yù)期目標(biāo)，減少了不必要的復(fù)檢工作，使工作效率極大提高。在臨床應(yīng)用復(fù)檢規(guī)則的過(guò)程中應(yīng)注意調(diào)整發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題，不斷的對(duì)復(fù)檢規(guī)則進(jìn)行優(yōu)化和完善，以保證血液分析的質(zhì)量，為臨床提供更加可靠的血細(xì)胞檢驗(yàn)信息。

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Establishment of review criteria of automatic hematology analyzer in infectious disease hospital

GENG Wei， YANG Ning， LI Yan， et al

China Medical Equipment，2016，13（9）:45-49.

Objective: Through analysis of the laboratory data to establish the suitable hematology review criteria for infectious disease hospital according to 23 review criteria recommended by experts group and formulation review criteria by Sysmex XE-2100 hematology analyzer. Methods: The total 704 patient samples were randomly detected and blood smear was reviewed. Based on the review criteria from the experts group， we evaluated the true positive ratio （TP）， the false positive ratio （FP）， the true negative ratio （TN）， the false negative ratio （FN） and ratio of smear review according to the disease characteristics of infectious disease hospital. Results: The assessment results of initial review criteria were followed: TP was 10.93%，F(xiàn)P was 42.05%， TN was 44.60%， FN was 2.41%， and review rate was 52.98%； after first optimizing review criteria，TP was 9.80%， FP was 19.89%，TN was 67.19%， FN was 3.13%， and review rate was 29.69%； after second optimizing review criteria， TP was 9.23%， FP was 16.05%， TN was 71.16%， FN was 3.55%， and review rate was 25.28%. The final assessment results showed review rate was less than 30%， FN was less than 5.0%， and no leukemia cells was missed. Conclusion: We established the suitable hematology review criteria for infectious disease hospital and improved work efficiency. The review criteria should be constantly improved in hematology analysis.

Hematology analysis； Review criteria； Infectious disease hospital

1672-8270（2016）09-0045-05

R197.39

A

10.3969/J.ISSN.1672-8270.2016.09.014

2016-01-15

①解放軍第302醫(yī)院臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心 北京 100039

wanghan129@sina.com

耿偉，男，（1987- ），本科學(xué)歷，技師。解放軍第302醫(yī)院臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心，從事臨床檢驗(yàn)和血液學(xué)方面的研究工作。