保健食品中二氫吡啶類硝苯地平快速檢測卡的研制

姚世平　劉光中　姚洪濤*　周　軼　李心樂　劉春秀

保健食品中二氫吡啶類硝苯地平快速檢測卡的研制

姚世平①劉光中①姚洪濤①*周軼①李心樂①劉春秀①

目的：研制一種快速測定降壓類保健食品中化學(xué)成分硝苯地平含量的檢測卡。方法：采用浸泡吸附法處理降壓類保健食品，提取出硝苯地平滴加到檢測卡上反應(yīng)形成橙紅色醌式結(jié)構(gòu)物，依據(jù)反射光譜原理，采用食品中危害因子及非法添加藥物智能化綜合檢測儀測定灰階色度值，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。結(jié)果：采用針對性的樣品前處理方式去除了多種干擾因子，其線性范圍在2.5～60.0 mg/g，其回歸方程：Y=11.53X+300.9，相關(guān)系數(shù)為0.998，檢出限為2.5 mg/g，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.56%，加標(biāo)回收率為95%～110%。硝苯地平檢測卡與液質(zhì)聯(lián)用色譜儀AB Tripletof 4600進(jìn)行對同一樣品加標(biāo)檢測對比，快速檢測方法與標(biāo)準(zhǔn)方法檢測結(jié)果一致。結(jié)論：所研制的硝苯地平檢測卡操作簡便、準(zhǔn)確性高，檢測成本低，是快速分析降壓類保健食品中硝苯地平含量的定量檢測卡。

降壓；保健食品；硝苯地平；試紙；快速

［First-author’s address］ Beijing Biochem Company， Beijing 100020， China.

降壓類保健食品中化學(xué)成分硝苯地平在不知情時患有冠心病、心絞痛或心肌梗塞的高血壓患者持續(xù)多次服用后，易引起舌根麻木、頭痛、心悸以及竇性心動過速等不良反應(yīng)。國家食品藥品監(jiān)管總局辦公廳2016年發(fā)布“總局辦公廳關(guān)于開展保健食品等三類食品非法添加非法聲稱問題專項(xiàng)治理工作的通知（食藥監(jiān)辦食藥監(jiān)三［2016］68號）”中指出，抽樣檢驗(yàn)保健食品時重點(diǎn)檢驗(yàn)硝苯地平等非法添加藥物［1］。

目前，檢測硝苯地平（C17H18N2O6）的方法多為高效液相色譜法、液-質(zhì)聯(lián)用法、薄層色譜法以及質(zhì)譜法［2］。諸多方法檢測耗時長、操作復(fù)雜且對人員專業(yè)素質(zhì)要求高，僅限于實(shí)驗(yàn)室檢測，幾乎不可能在一線現(xiàn)場廣泛開展。因此，急需研制一種便攜、操作簡便及檢測成本低的，適合現(xiàn)場快速檢測降壓類保健食品中非法化學(xué)成分鑒定的產(chǎn)品［3-4］。本研究研制一種快速測定降壓類保健食品中化學(xué)成分硝苯地平含量的檢測卡，操作簡便，適合在監(jiān)管一線推廣使用。其采用浸泡吸附法處理樣品，再將樣品處理液滴加到硝苯地平檢測卡上，硝苯地平與顯色體系反應(yīng)生成橙紅色，可通過目測與標(biāo)準(zhǔn)色階圖譜定性，又可與食品中危害因子及非法添加藥物智能化綜合檢測儀進(jìn)行定量分析［5-6］。

1　材料與方法

1.1儀器與試劑

（1）儀器設(shè)備。DZF6053型真空干燥箱（上海一恒科技有限公司）；AT261型精密電子天平（METTLER TOLEDO，瑞士）；UB-7型酸度計(jì)（德國賽多利斯股份有限公司）；ZQ2000型微電腦自動斬切機(jī)（上海金標(biāo)生物科技有限公司）；XH-C型渦旋混勻器（金壇市自塔新寶儀器廠）；BK-IMT-IV型食品中危害因子及非法添加藥物智能化綜合檢測儀（北京倍肯恒業(yè)科技發(fā)展股份有限公司）；AB Tripletof 4600型液質(zhì)聯(lián)用儀（美國AB公司）。

（2）試劑材料。硝苯地平（100338-201404，中國食品藥品檢定研究院）、氫氧化鈉、碳酸氫鈉、烷基糖苷、脂肪醇醚硫酸鹽、無水乙醇以及活性炭均屬國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純。水為超純水；材質(zhì)為定性濾紙。

1.2硝苯地平標(biāo)準(zhǔn)溶液

硝苯地平標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：①準(zhǔn)確稱取10 g硝苯地平定溶于100 ml丙酮中，得到100 mg/ml硝苯地平的儲備液；②準(zhǔn)確稱取5 g氫氧化鈉用雙蒸水定容至100 ml，記為5%氫氧化鈉溶液；③準(zhǔn)確稱取10 g烷基糖苷雙蒸水定容至100 ml，記為10%烷基糖苷溶液；④準(zhǔn)確稱取4 g碳酸氫鈉雙蒸水定容至100 ml，記為4%碳酸氫鈉溶液；⑤準(zhǔn)確稱取2 g脂肪醇醚硫酸鹽雙蒸水定容至100 ml，記為2%脂肪醇醚溶液；⑥試劑顯色劑1由5%氫氧化鈉溶液與10%烷基糖苷溶液組成；⑦試劑顯色劑2由4%碳酸氫鈉溶液和2%脂肪醇醚溶液組成［7-9］。

1.3試紙研制

準(zhǔn)確裁取定性濾紙長8 cm，寬8 cm充分浸泡到試紙顯色劑1中10 min，將硝苯地平檢測試紙基材放在溫度為60 ℃的干燥箱中，烘干30 min后晾涼；將硝苯地平檢測試紙基材放入試劑顯色劑2中浸泡5 min；將浸泡后的硝苯地平檢測試紙基材放在溫度為-55 ℃低溫真空干燥箱中干燥3 h，得到硝苯地平檢測試紙。將處理好的試紙按照2 cm×0.4 cm裁剪成小條貼在底板上，制備成硝苯地平檢測卡，鋁箔袋密封保存，檢測卡結(jié)構(gòu)如圖1所示。

圖1　硝苯地平檢測卡示意圖

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1樣品前處理

（1）膠囊類樣品前處理。取1粒膠囊內(nèi)容物于檢測管中，加入0.1 g提取劑A和1.5 ml提取液B，震蕩搖勻2 min，靜置10 min，使用0.45 μm微孔濾膜過濾后，取0.25 ml濾液加入樣品稀釋液C 0.25 ml，即為待檢樣品處理液，同時做樣品空白實(shí)驗(yàn)和樣品加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。

（2）茶葉類樣品處理。準(zhǔn)確稱取0.5 g樣品于5 ml試管中，加入0.1 g提取劑A和1.5 ml提取液B，震蕩搖勻2 min，靜置10 min，用0.45 μm微孔濾膜過濾后，取0.25 ml濾液加入樣品稀釋液C 0.25 ml、即為待檢樣品處理液，同時做樣品空白實(shí)驗(yàn)和樣品加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。

（3）將70 μl的待檢液滴加到硝苯地平檢測卡觀察窗上，15 min后上機(jī)檢測，讀取檢測結(jié)果。

1.4.2標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

移取100 mg/ml硝苯地平的儲備液0、2.5 ml、5.0 ml、10.0 ml、20.0 ml、40.0 ml以及60.0 ml分別置于100 ml容量瓶中，以丙酮定容至刻度線。取70 ul滴加到硝苯地平檢測卡觀察窗，15 min在食品中危害因子及非法添加藥物智能化綜合檢測儀讀取灰階色度值，以硝苯地平濃度（mg/g）為橫坐標(biāo)，灰階色度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4.3樣品測定

吸取樣品待檢液70 ul滴加到硝苯地平檢測卡上進(jìn)行測定。

2　結(jié)果

2.1試劑顯色劑用量影響

按照硝苯地平標(biāo)準(zhǔn)溶液檢測卡的測定方法，改變試劑顯色劑1和試劑顯色劑2中組分體積比制備硝苯地平檢測卡，觀察其比例變化對灰階色度值結(jié)果的影響。試劑顯色液1對檢測卡影響較大，當(dāng)試劑顯色劑1體積比例（V5%氫氧化鈉：V10%烷基糖苷）由1～20逐漸升高時，硝苯地平顯色灰階色度值由220.4逐漸升高到584.6后進(jìn)入平緩期后下降，最終確認(rèn)試劑顯色劑1體積比為10∶1，出現(xiàn)最大灰階色度值為584.6（如圖2所示）。

圖2　試劑顯色劑1體積比變化與灰階色度值關(guān)系圖

當(dāng)試劑顯色劑2體積比例為V4%碳酸氫鈉：V2%脂肪醇醚，由0.25～6逐漸升高時，硝苯地平濃度為10.0 mg/g顯色后灰階色度值由473.2升高至569.4，最后平緩降低至521.9，經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)確定試劑顯色劑2體積比為2∶1時，顯色的灰階色度值最大為569.4（如圖3所示）。

圖3　試劑顯色劑2體積比變化與灰階色度值關(guān)系圖

2.2浸泡時間影響

按照硝苯地平標(biāo)準(zhǔn)溶液檢測卡的測定方法，對比改變2次浸泡時間，硝苯地平檢測卡灰階色度值的變化。將試劑顯色劑1浸泡時間由5 min、6 min、8 min、10 min、20 min及30 min后進(jìn)行對比，浸泡時間0～10 min，灰階色度值419.4逐漸升高至575.3，浸泡時間在10～30 min之間時灰度色階值在575.3～570.4區(qū)間，數(shù)值相對平穩(wěn)，故試劑顯色劑1的浸泡時間應(yīng)該是10 min（如圖4所示）。

圖4　試劑顯色劑1浸泡定性濾紙時間變化與灰階色度值關(guān)系圖

當(dāng)試劑顯色劑2浸泡時間1 min、3 min、5 min、10 min、15 min以及20 min，浸泡時間在1～5 min時，灰階色度值由520.1升高至573.9，在10～20 min后灰階色度值由577.4緩慢升高至586.3。通過數(shù)據(jù)對比顯示，試劑顯色液2浸泡最佳時間為5.0 min（如圖5所示）。

圖5　試劑顯色劑2浸泡定性濾紙時間變化與灰階色度值關(guān)系圖

2.3第一次烘干溫度及烘干時間影響

將第一次浸泡的試紙分為5份，分別在37 ℃、50 ℃、60 ℃、70 ℃及80 ℃的5個溫度下烘干1 h，在第二次浸泡時間及烘干溫度、烘干時間不變的情況下，對比上述5個溫度點(diǎn)烘干后的硝苯地平檢測卡與濃度為10.0 mg/g的硝苯地平顯色后的灰階色度值。其結(jié)果在第一次烘干時間為1 h時，烘干溫度為60 ℃時，達(dá)到最大灰階色度值為567.21（如圖6所示）。

圖6　第一次烘干時間與灰階色度值關(guān)系圖

2.4第二次烘干溫度及烘干時間影響

將第一次烘干完的試紙基材再次浸泡，在-55 ℃、

25 ℃、37 ℃、50 ℃及60 ℃的5個溫度下烘干2 h，對比上述5個溫度點(diǎn)烘干后的硝苯地平檢測卡與濃度為10.0 mg/g的硝苯地平顯色后的灰階色度值。在-55 ℃的低溫真空干燥時有最大灰階色度值為530.66（如圖7所示）。

圖7　第二次烘干時間與灰階色度值關(guān)系圖

2.5線性范圍及檢出限

按照硝苯地平標(biāo)準(zhǔn)溶液檢測卡的測定方法，將濃度水平為0～60.0 mg/g標(biāo)準(zhǔn)溶液70 μl滴加至硝苯地平檢測卡觀察窗上，即線性范圍為2.5～60 mg/g，其線性方程為Y=11.53X+300.9，R2=0.998，對硝苯地平濃度為0、0.5 mg/g、1.0 mg/g、1.5 mg/g、2.0 mg/g、2.5 mg/g及3.0 mg/g各測試50次，檢出限為2.5 mg/g，如圖8、圖9所示。

圖8　硝苯地平濃度與灰階色度值關(guān)系圖

圖9　硝苯地平標(biāo)準(zhǔn)色階圖譜

將添加低中高濃度硝苯地平的樣本，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)方法與快檢方法（檢測卡法）比對，檢測卡法添加回收率為95%～110%，標(biāo)準(zhǔn)方法添加回收率為90%～100%，故快檢方法的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)方法檢測結(jié)果相符合，見表1［11］。

表1　標(biāo)準(zhǔn)方法與檢測卡法檢測硝苯地平結(jié)果比對 (mg/g)

3　結(jié)論

本研究參照2015藥典［12］方法，經(jīng)過工藝改良，率先成功研制了保健類食品硝苯地平快速定量檢測卡，彌補(bǔ)了市場保健類食品化學(xué)成分快速檢測方法的空缺。硝苯地平檢測卡與食品中危害因子及非法添加藥物智能化綜合檢測儀配合對降壓類保健食品進(jìn)行定量分析，硝苯地平檢測卡的準(zhǔn)確度、檢測限及加標(biāo)回收率等同于液-質(zhì)聯(lián)用檢測方法。硝苯地平檢測卡擁有便攜、操作步驟簡單等優(yōu)點(diǎn)，并可避免快檢過程中容易出現(xiàn)的漏檢和誤檢情況，因此更適合于執(zhí)法部門現(xiàn)場快速鑒定降壓類保健食品中硝苯地平成分。

［1］食品藥品監(jiān)管總局（食藥監(jiān)辦食藥監(jiān)三［2016］6號）關(guān)于開展保健食品等三類食品非法添加非法聲稱問題專項(xiàng)治理工作的通知［S］.食品藥品監(jiān)管總局，2016-05-23.

［2］查道仁.HPLC法測定二十五味阿魏膠囊中非法添加卡托普利、氯氮、鹽酸異丙嗪、硝苯地平的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2014，18（9）：1653-1655.

［3］謝耀軒，梁智淵，劉吉金，等.降壓中藥制劑中非法添加硝苯地平檢測方法的研究［J］.中國當(dāng)代醫(yī)藥，2010，17（6）：44-45.

［4］鄭榮，王柯，季申.中成藥中非法添加降壓類化學(xué)成分的薄層檢測方法的研究［J］.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2009，19（3）：530-531，536.

［5］葉丹怡，朱敏.HPLC/MS定性定量檢測清腦保心康膠囊中非法添加的硝苯地平［J］.中外食品工藝，2015（1）：11-12.

［6］王鐵松，仝禹，鄭潔，等.薄層色譜法快速篩查降脂、降壓、止咳平喘類中藥制劑中的29種添加化學(xué)藥物［J］.中國藥物雜志，2010，45（11）：857-861.

［7］丁寶月，屠婕紅，薛磊冰，等.UPLC-MS/MS法快速測定降壓類中成藥及保健食品中非法添加34種化學(xué)藥的研究［J］.中草藥，2015，46（5）：688-696.

［8］周艷，單永洋.檢查心腦康膠囊中非法添加硝苯地平的方法研究［J］.安徽醫(yī)藥，2010，14（10）：1155-1156.

［9］劉吉金.降壓保健品及中成藥中非法添加化學(xué)成分的快速檢測方法研究［J］.中成藥，2008，30（1）：144-146.

［10］吳公平，雷玉萍，黎銀波，等.輔助降壓類保健品中非法添加化學(xué)藥品的快速篩選方法［J］.中國藥業(yè)，2010，19（14）：42-43.

［11］國家食品藥品監(jiān)督管理局.藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件2009032［A］.國家食品藥品監(jiān)督管理局，2011-11-08.

［12］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）［M］.北京：北京醫(yī)藥科技出版社，2015.

The development of rapid detection card of the second hydrogen pyridine class nifedipine in health food ?

YAO Shi-ping， LIU Guang-zhong， YAO Hong-tao， et al

China Medical Equipment，2016，13（9）:16-19.

Objective: To develop a rapid inspection card to detect chemical composition of nifedipine in health food of antihypertensive class. Methods: The health food of antihypertensive class was disposed by soaking adsorption method to extract the nifedipine drops to the test card orange-red quinoid structure on the reaction. According to theory of reflection spectrum， The harmful factors in food drugs and illegal add intelligent integrated detector to measure color grayscale value with curve method of quantitative standard. Results: The various interference factors were disappeared by the targeted sample pretreatment method， so the test linear was in 2.5 mg/g-60.0 mg/g， the regression equation was Y=11.53X+300.9， the correlation coefficient was 0.998， the detection limit was 2.5 mg/g， the relative standard deviation was respectively 2.56%， and the standard addition recovery was 95-110%. Compared nifedipine test card with liquid chromatograph-MASS AB Tripletof 4600 for the same sample， the results were the same. Conclusion: The development of nifedipine test card is easy to operate， and the accuracy is high and the detection cost is low. It can analyze nifedipine content quickly in the health food of antihypertensive class.

Antihypertensive； Health food； Nifedipine； Test paper； Fast

1672-8270（2016）09-0016-04

R446.1

A

10.3969/J.ISSN.1672-8270.2016.09.005

2016-06-20

①北京倍肯恒業(yè)科技發(fā)展股份有限公司 北京 100020

yaohongtao@biochemgroup.net

姚世平，男，（1963- ），碩士，高級工程師。北京倍肯恒業(yè)科技發(fā)展股份有限公司董事長兼總裁，從事醫(yī)療裝備、食品安全和藥品檢測工作。