CHFR基因編碼蛋白在食管癌組織中的表達及臨床病理學意義△

吳書勝　何義富　孫玉蓓　季楚舒#

1安徽省立醫(yī)院西區(qū)（安徽省腫瘤醫(yī)院）腫瘤內科一病區(qū)，合肥　230071

2安徽省立醫(yī)院腫瘤化療科，合肥　230001

CHFR基因編碼蛋白在食管癌組織中的表達及臨床病理學意義△

吳書勝1何義富2孫玉蓓2季楚舒2#

1安徽省立醫(yī)院西區(qū)（安徽省腫瘤醫(yī)院）腫瘤內科一病區(qū)，合肥230071

2安徽省立醫(yī)院腫瘤化療科，合肥230001

目的觀察有絲分裂前期檢查點基因CHFR在食管癌、食管上皮內瘤變及正常食管組織中蛋白的表達，了解食管癌中CHFR蛋白表達與患者臨床病理資料之間的關系，探討其在食管癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用及相關的分子機制。方法收集食管癌標本92例以及相配對的食管上皮內瘤變11例，另取正常食管組織27例。采用免疫組化檢測92例食管癌及其對應的食管上皮內瘤變、正常食管組織中CHFR蛋白的表達。通過免疫組化半定量積分法判斷免疫組化結果。結果食管癌組織中CHFR蛋白陽性表達率為7.61%（7/92），低于正常食管組織的96.3%（26/27）和食管上皮內瘤變組織的54.55%（6/11），且差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；食管上皮內瘤變組織中CHFR蛋白陽性表達率也低于正常食管組織，且差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。高分化的食管癌組織中CHFR蛋白表達陽性率的33.33%（6/18）明顯高于中-低分化的食管癌組織中CHFR蛋白表達陽性率的1.35%（1/74），差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。患者的不同年齡、性別以及其他病理資料之間CHFR蛋白表達陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結論食管癌中有絲分裂檢查點基因CHFR蛋白的表達下調或缺失是頻發(fā)、早期事件，可能參與食管癌的發(fā)生發(fā)展，其與食管癌分化程度的關系可能更為密切。

食管癌；CHFR；免疫組化

Oncol Prog，2016，14（7）

近年來，有絲分裂前期檢查點基因CHFR的研究已成為腫瘤分子靶點研究的熱點。CHFR在人正常組織中廣泛表達，而在多種人腫瘤組織中表達下調［1］。許多研究顯示，與正常細胞或組織相比，在腫瘤組織或細胞株中CHFR mRNA表達下調或缺失，CHFR啟動子區(qū)5'端CpG島超甲基化是表達下調的主要原因［2］。目前國內外關于食管癌中CHFR蛋白表達的研究較少，本研究使用免疫組化檢測二步法，檢測92例食管癌組織及與其相對應的11例食管黏膜上皮內瘤變與27例正常食管黏膜CHFR蛋白的表達。探索CHFR蛋白表達在食管癌早期診斷及臨床病理學中的意義。

1　材料與方法

1.1試驗材料

收集安徽省立醫(yī)院2010年3月至2011年12月胸外科手術切除的食管癌標本92例以及相配對的食管上皮內瘤變11例，其中癌組織取自腫瘤組織的中心位置，另取正常人的食管組織27例，所有病例均經病理組織學檢查證實。患者年齡40～78歲，其中≥60歲52例，＜60歲40例；男性83例，女性9例；組織病理類型：鱗狀細胞癌89例，腺癌3例；分化程度：高分化18例，中分化59例，低分化15例；根據美國癌癥聯(lián)合委員會（AJCC）食管癌TNM分期：Ⅰ/Ⅱ期42例，Ⅲ/Ⅳ期50例；腫瘤浸潤深度：T1/T2期19例，T3/T4期73例；無淋巴結轉移N0期36例，有淋巴結轉移N1期56例。

1.2試驗方法

制作組織蠟塊，將組織蠟塊行2μm連續(xù)切片，采用GBI公司推出的免疫組化檢測二步法檢測92例食管癌與其對應的食管上皮內瘤變及正常食管組織中CHFR蛋白的表達。通過免疫組化半定量積分法判斷免疫組化結果［3］。免疫組織化學結果由染色強度和染色頻率兩者來評估，0～1分為陰性，2～3分為陽性。

1.3統(tǒng)計學分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行數據分析。計數資料以率（%）表示，采用χ2檢驗或Fisher精確檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

圖1　正常食管、食管癌、食管上皮內瘤變組織中CHFR蛋白免疫組化染色情況

2　結果

2.1CHFR蛋白在組織中的表達

食管癌組織中CHFR蛋白陽性表達率低于正常食管組織和食管上皮內瘤變組織，且差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；食管上皮內瘤變組織中CHFR蛋白陽性表達率也低于正常食管組織，且差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），詳見表1、圖1。

表1　CHFR蛋白表達陽性率比較

2.2CHFR蛋白表達與食管癌患者臨床病理資料的關系

高分化的食管癌組織中CHFR蛋白表達陽性率（33.33%）明顯高于中-低分化食管癌組織中CHFR蛋白表達陽性率（1.35%），差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；患者在不同年齡、性別以及其他病理資料間CHFR蛋白表達陽性率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。（表2、圖1）

3　討論

CHFR蛋白表達缺失與食管癌的發(fā)生關系密切，可能是食管黏膜癌變過程中的早期分子事件，先前學者的研究也支持本研究結果。有學者使用免疫組織化學法檢測75例食管腺癌組織，發(fā)現75%（56/75）的食管腺癌組織CHFR蛋白表達缺失或減少；相反，100%（10/10）正常食管組織CHFR蛋白表達以及83%（5/6）與食管癌相對應的癌前病變Barrett食管中CHFR蛋白表達陽性［3］。盡管該學者認為病例數有限，未行統(tǒng)計學分析，但我們可以看到CHFR蛋白表達缺失與食管腺癌的發(fā)生關系密切，我們可擴大病例數進一步尋找兩者之間的關系。

表2　CHFR蛋白表達與食管癌患者臨床病理因素的關系

本組研究發(fā)現，在92例食管癌中，CHFR蛋白陽性表達率為7.61%，正常食管組織及食管上皮內瘤變組CHFR蛋白陽性表達率分別為96.30%（26/27）和54.55%（6/11），食管癌組CHFR蛋白的陽性表達率低于正常食管組織及食管上皮內瘤變組（P＜0.05），提示食管癌發(fā)生過程中CHFR蛋白表達下降，推測可能與CHFR基因缺失或突變有關，也可能在轉錄水平或轉錄后水平受到特異性調控而導致蛋白表達受到抑制。高分化的食管癌組織中CHFR蛋白表達陽性率為33.33%（6/18），中-低分化的食管癌組織中CHFR蛋白表達陽性率為1.35%（1/74），高分化的食管癌組織中CHFR蛋白表達陽性率明顯高于中-低分化的食管癌組織中CHFR蛋白表達陽性率，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），提示食管癌的分化程度越低，CHFR蛋白表達的下調越明顯。但食管癌中CHFR蛋白的表達在患者不同性別、年齡、組織類型、TNM病理分期、腫瘤浸潤深度及淋巴結轉移等臨床資料之間未見顯著性差異（P＞0.05）。

在消化道腫瘤中，Hu等［4］運用免疫組織化學法檢測了123例胃癌組織中CHFR蛋白的表達，結果發(fā)現52%（64/123）的胃癌組織CHFR表達陽性。分化好的胃癌組織中CHFR蛋白表達陽性率為70%（30/43），分化差的胃癌組織中CHFR蛋白表達陽性率為43%（34/80），兩者之間具有顯著統(tǒng)計學差異（P=0.004）。本實驗的研究結果與Hu等研究結果基本一致，但Hu等研究結果顯示為胃癌中CHFR蛋白表達陽性率明顯高于食管癌中CHFR蛋白表達陽性率。原因考慮有以下兩點：①CHFR蛋白的表達具有組織差異性，在消化道腫瘤CHFR基因啟動子區(qū)超甲基化可能是CHFR蛋白表達缺失或減少的主要原因，Morioka等［5］研究顯示原發(fā)性食管癌和胃癌中CHFR啟動子區(qū)超甲基化率分別是24%（9/28）和30%（16/53）。②免疫組化結果的判定標準不一致，Hu等免疫組化結果的判斷只是根據陽性細胞數百分比，陽性細胞數≥20%視為陽性，＜20%視為陰性。

在其他人腫瘤組織中，同樣有文獻報道CHFR蛋白表達下調或缺失。Privette等［6］同樣使用免疫組化法檢測了142例原發(fā)性浸潤性乳腺癌，36% CHFR蛋白表達陰性，只有0.5%CHFR免疫組化染色呈強陽性。正常乳腺上皮細胞CHFR免疫組化染色明顯呈陽性。免疫組化檢測發(fā)現非小細胞肺癌中39%（62/157）CHFR蛋白表達下調，鱗癌中CHFR蛋白表達陽性率為22%，而肺腺癌中CHFR蛋白表達陽性率高達74%，兩者之間差異具有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。另外非小細胞肺癌CHFR蛋白表達在高分化和中-低分化中分別為80%和51%（P=0.005）。此外，CHFR蛋白表達下調與吸煙相關性肺鱗癌和預后不良之間均具有顯著統(tǒng)計學意義，多因素分析顯示CHFR蛋白表達可作為肺癌的獨立預后因素［7］。

4　小結

本研究通過運用免疫組織化學技術檢測并闡述了食管癌及與其對應的食管上皮內瘤變、正常食管黏膜中有絲分裂前期檢查點基因CHFR的蛋白表達之間的關系。研究發(fā)現：有絲分裂檢查點基因CHFR在食管癌中蛋白的表達下調或缺失是頻發(fā)事件，可能參與食管癌的發(fā)生，其與食管癌分化程度的關系可能更為密切。

［1］Scolnick DM，Halazonetis TD.Chfr defines a mitotic stress checkpoint that delays entry into metaphase［J］.Nature，2000，406（6794）:430-435.

［2］Summers MK，Bothos J，Halazonetis TD.The CHFR mitotic checkpoint protein delays cell cycle progression by excluding Cyclin B1 from the nucleus［J］.Oncogene，2005，24（16）:2589-2598.

［3］Delellis RA.Basic techniquesof immunochemistry，in Diag-nostic immunohistochemistry［M］.NewYork:Masson Publishing USA，1981:7-16.

［4］Hu SL，Huang DB，Sun YB，et al.Pathobiologic implications of methylation and expression status of Runx3 and CHFR genes in gastric cancer［J］.Med Oncol，2011，28（2）: 447-454.

［5］Morioka Y，Hibi K，Sakai M，et al.Aberrant methylation of the CHFR gene in digestive tract cancer［J］.Anticancer Res，2006，26（3A）:1791-1795.

［6］Privette LM，González ME，Ding L，et al.Altered expression of the early mitotic checkpoint protein，CHFR，in breast cancers:implications for tumor suppression［J］.Cancer Res，2007，67（13）:6064-6074.

［7］Takeshita1 M，Koga1 T，Takayama K，et al.CHFR expression is preferentially impaired in smoking-related squamous cell carcinoma of the lung，and the diminished expression significantly harms outcomes［J］.Int J Cancer，2008，123（7）:1623-1630.

Protein expression of CHFR gene in esophageal cancer and the pathological significance△

WU Shu-sheng1HE Yi-fu2SUN Yu-pei2JI Chu-shu2#
1Department of Medical Oncology，Western Section of Anhui Provincial Hospital，Hefei 230071，Anhui，China
2Department of Chemotherapy，Anhui Provincial Hospital，Hefei 230001，Anhui，China

ObjectiveTo observe the protein expression of CHFR prophase check point gene in esophageal cancer，esophageal intraepithelial neoplasia，and normal esophageal tissues，discuss the relationship between the protein expression of CHFR in esophageal cancer and clinicopathologic characteristics，and to explore the correlating molecular mechanism of CHFR expression in esophageal carcinogenesis and development.Method92 specimens of esophageal cancer，11 matched samples of esophageal intraepithelial neoplasia，and 27 samples of normal esophageal tissues were collected，in which the protein expression of CHFR were detected immunohistochemically.Semi-quantitative immunohistochemical analysiswasappliedtoevaluatetheimmunohistochemicalresults.ResultThepositiverateofCHFRproteinexpressionwas 7.61%（7/92）in esophageal cancers，and was significantly lower than that in normal esophageal tissues at 96.3%（26/27）and in esophageal intraepithelial neoplasia at 54.55%（6/11）（P＜0.05），respectively；And the positive expression of CHFR in esophageal intraepithelial neoplasia was also lower as compared with that in normal tissues（P＜0.05）；In well differentiated esophageal cancer tissues，the positive rate of CHFR protein expression was 33.33%（6/18），and was significantly higher than that in moderately or poorly differentiated esophageal cancers，with significant difference observed（P＜0.05）；No obvious correlation was observed between the CHFR protein expression and age，gender as well as other pathologic characteristics（P＞0.05）.ConclusionDown-regulation or absence of mitotic checkpoint CHFR protein expression is a frequent and early event，which may be involved in the esophageal carcinogenesis and is potentially yet closely related with the differentiation of esophageal cancers.

esophageal cancer；CHFR；immunohistochemisty

R735.1

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.07.15

2016-04-05）

安徽省科技計劃項目（10021303022）

（corresponding author），郵箱：jichushu@csco.org.cn