探究腫瘤靶向物載體的細胞靶向性

胡　俊

江蘇省南京市紅十字醫院腫瘤科，江蘇南京　210001

探究腫瘤靶向物載體的細胞靶向性

胡俊

江蘇省南京市紅十字醫院腫瘤科，江蘇南京210001

目的探討和分析腫瘤靶向物載體的細胞靶向性。方法 選擇293T細胞和H460細胞作為實驗標本，實驗地點選擇該院實驗室，時間為2016年2—3月，選擇合成的SP5-52、阿霉素、第4代聚酰胺—胺、超濾離心管、熒光分子異硫氰酸熒光素等，并總結和探討腫瘤靶向性藥物所具有的細胞靶向性。結果 在常規藥物制劑的條件下對抗腫瘤藥物新型靶向載體系統進行發展，并且改善藥物在載體內部的代謝動力學相關特征，能夠讓藥物向富集到腫瘤藥部位、腫瘤細胞內部聚集，保證療效得到提升，毒副作用逐漸減小，檢測濃度范圍之內細胞存活率超過80%，其中G4-Ac毒性為90%、G4-Ac-FITC為87%、而G4-Ac-FITC-SP5-52細胞毒性為97%，差異具有統計學意義（P＜0.05）。結論 在科學技術不斷發展和進步的影響下，抗癌藥物劑型的研究工作開始朝著靶向、高效、智能化方向發展，理想藥物劑型具有控釋、緩釋、靶向發展前景較為廣闊，值得在；臨床運用上進行使用和推廣。

腫瘤靶向藥物；載體；細胞靶向

［Abstract］Objective To investigate and analyze the cell targeting of tumor targeting vector.Methods Source selection to 293T cells and H460 cells as experimental samples，experimental sites were selected in the laboratory of our hospital for February 2016 to 2016 March，SP5 52，doxorubicin，the 4th generation of polyamide amine，ultra filtration centrifuge tube，fluorescence isothiocyanate fluorescein，and summarize and discuss the tumor target to drugs with cell targeting.Results U-under the conditions of conventional pharmaceutical formulations against tumor new drug target to support system development，and improve the drug in the carrier of metabolic dynamics characteristics，can make the drug to enriched to drug site of tumors and tumor cells aggregation，ensure curative effect to improve，toxic side effect decreases gradually，detection concentration range cell survival rate of over 80%，which G4-Ac toxicity is 90%，G4-Ac-FITC as 87%，and G4-Ac-FITC-SP5 52 cytotoxicity was 97%；the difference is statistically significant（P＜0.05）.Conclusion Under the influence of the continuous development of science and technology and progress，form of anticancer drugs work started towards the target，efficient，intelligent direction，ideal of pharmaceutical dosage forms with controlled and sustained release，targeted development prospect is broad，it is in；clinical application of use and promotion.

［Key words］Tumor targeting drug；Vector；Cell targeting

很多治療以及診斷腫瘤的藥物在臨床上的運用較為普遍，這些藥物所產生的作用具有顯著的非選擇性特征，體內分布相對較廣，一些正常組織器官有著較多的分布在，治療劑量下對于正常組織器官的毒副作用較為明顯，患者無法耐受，從而導致質量效果受到影響［1］。如何提升抗腫瘤藥物治療效果，首先要能夠保證藥物的腫瘤選擇性得到提升，降低在非靶部位出現聚集的現象，減少藥物對非靶部位產生的毒副作用，在降低藥物治療劑量的同時減少不必要的給藥次數，提升藥物效果［2］。選擇不同的化療藥物還會對臟體造成不同的損傷，所以對腫瘤靶向藥物載體進行研究逐漸成為腫瘤治療領域需要研究的一個問題。對于腫瘤出現全新的血管，伴隨一些蛋白特質表達、高表達的顯著特征。研究工作人員開發較多的特異靶向腫瘤新生血管的靶向多肽，包括LHRH、NCR以及RCD肽。為了進一步探討和分析腫瘤靶向物載體的細胞靶向性，該文把丁二酸酐當成手臂把SP5-52多肽共價轉變成聚酰胺—胺形狀樹枝狀高分子材料之上，并利用熒光分子異硫氰酸熒光素當成檢測探針，通過對熒光顯微鏡進行倒置來對腫瘤細胞對藥物和載體的吸收狀況進行觀察和分析，實驗時間為2016年2—3月，現報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選擇293T細胞和H460細胞作為實驗標本，，實驗地點選擇該院實驗室，選擇合成的SP5-52、阿霉素、第4代聚酰胺—胺、超濾離心管、熒光分子異硫氰酸熒光素等；所使用的儀器包括紫外可見分光光度計721/ 721-100型、流式細胞儀貝克曼型、二氧化碳培養箱BPN-50CH（uv）型。

1.2方法

首先進行靶向載體的合成以及鑒定，需要對PAMAM利用部分乙酰化來減少材料的毒性，保證生物相容性得到提升，并把熒光探針分子FITC共價和載體進行連接，把SP5-52肽利用丁二酸酐手臂共價和載體進行連接，獲得相應產物［3］。所有反應步驟的產物都利用氫核磁共振波譜法進行鑒定，并對粒徑進行檢測。

其次，對凍存的H460細胞和293T細胞進行復蘇，并使用具有10%的新生胎牛血清RPM11640P培養液、在含有5%的二氧化碳培養箱中進行培養，控制溫度37℃恒溫，將顯微鏡倒置來對細胞生長狀態進行逐日觀察，當細胞生長超過孔的90%左右時，需要鍵入1ml的消化液進行消化，并以1：5的比例進行傳代。

再者，利用MTT實驗對材料細胞的毒性進行檢測，并以293T細胞種植在96孔板中，放置在含有5%的二氧化碳培養箱中進行培養，控制溫度37℃恒溫，選擇酶聯免疫檢測儀對570 nm波長進行檢測，檢測指標包括各個孔的吸光度，利用細胞存活率對細胞毒性結果進行評價［4］。

還要通過流式細胞術對載體靶向性能進行評價，利用24孔板對293T、H460細胞進行24培養之后放棄原培養液，并在細胞內部加入含有5%濃度的G4-Ac-FITC的培養液200 μL，在37℃環境中進行4 h的培養，并將培養液倒出，對PBS進行2次清洗之后加入胰酶消化液，控制細胞懸液選擇1 000 r/min的離心8 min，加入800 μPBS懸浮細胞，并利用流式細胞儀進行檢測。

最后進行細胞攝取實驗，利用96孔板對H460進行24 h培養之后丟棄原來的培養液，并向細胞中加入含有游離的DOX200μL培養液。保證培養液的中含有的阿霉素最終濃度控制為10 μmol/L，并繼續進行4 h的培養，丟棄之前的培養液，使用PBS進行3次緩沖液進行清洗，對熒光顯微鏡進行倒置，控制為543 nm激發光下觀察細胞可能對阿霉素吸收的情況造成的影響［5］。

1.3統計方法

該文相關信息和數據使用SPSS 18.0統計學軟件進行比較和分析，計量資料使用均數±標準差表示，組內多重比較使用t檢驗，當P＜0.05時，為差異具有統計學意義。

2　結果

通過乙酰化修飾的靶向載體將會對非小細胞肺癌細胞產生顯著的靶向性，游離狀態的SP5-52多肽能夠更好地對載體靶向性產生抑制作用，這種靶向載體能夠利用物理包埋的方式來影響阿霉素，并且會對阿霉素的釋放造成緩釋放影響，利用倒置的熒光顯微鏡來進行觀察之后發現靶向載體能夠讓阿霉素更快速地進入到腫瘤細胞。檢測濃度范圍之內細胞存活率超過80%。但是，FITC以及SP5多肽鏈接將會對細胞毒性不造成任何影響，見表1。

表1　不同材料對293T細胞的毒性作用

3　討論

在對腫瘤藥物靶向載體進行研究時，靶向劑所具有的靶向性將會對載體的靶向性能造成影響，能是否對腫瘤產生靶向作用［6］。目前研究較為普遍的是適配子、單克隆抗體、多肽和配體。多肽則是因為結構簡單，所以利用化學合成的方法快讀進行合成，和單克隆抗體相比較，其結構較為穩定，不會出現變性，所以，受到較多的關注［7］。

該文實驗結果表明實驗在1、2、3 h和4 h內的四種不同材料產生的毒性作用不同，這就說明時間長短將會對腫瘤靶向性藥物效果造成不同的影響。其中其中G4-Ac毒性為90%、G4-Ac-FITC為87%、而G4-Ac-FITC-SP5-52細胞毒性為97%。受體—配體介導的NLC屬于發展前景較好的主動TCS，其選擇的材料具有生物相容性良好、無毒安全的特征，其機體耐受性較為顯著，穩定劑滿足通用安全標準的表面活性要求，通過使用高壓乳均勻法進行制備，該種方法相對成熟，得到的粒徑相對較小、分布相對狹窄，能夠更好地避免對人體造成有害附加劑、有機溶劑的使用，特別是運用在熱量條件下性能不穩定的藥物中能夠產生更加顯著的效果［8］。根據高勇等［6］進行的分析，充分表明塑料試管中加入懸浮狀的 HUVEC細胞為0.5 mL、0～10 pg/tube的RGD0.1 mg，其反應體積為0.7 mL。這和該文研究存在一定的相似性，該文主要是測量不同藥物材料不同時間內的效果，但是，其得出的測量結果存在差異。另一種措施就是針對PAMAM表層部分進行乙酰化修飾，屏蔽部分正電荷，從根本上降低表層正電荷密度，減少細胞毒性［9］。

總之，G4-FITC-SP5-52體外展示出腫瘤所具有的良好性能，并逐漸轉變成了腫瘤臨床治療過程中的主要靶向藥物載體。

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［5］王志紅，周琳，王春峰，等.miR-143在胰腺癌組織中的表達及臨床意義［J］.世界華人消化雜志，2016（10）：1520-1525.

［6］高勇，何勝利，鐘高仁，等.血管內皮細胞靶向性Tyr-RGDPEG-PEI納米基因載體的合成及其生物特性的初步研究［J］.藥學學報，2009（9）：1034-1039.

［7］董云肖，楊力，潘長江.磁性納米Fe_3O_4顆粒的表面改性及其在腫瘤治療中的應用［J］.材料導報，2013，1（24）：44-49.

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To Explore the Cell Targeting Tumor Targeting Drug Carrier

HU Jun
Department of Oncology，Nanjing Red Cross Hospital，Jiangsu Province，Nanjing，Jiangsu Province，210001 China

R73

A

1674-0742（2016）08（c）－0043-03

10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.24.043

2016-05-25）

胡俊（1971.5-），江蘇泗洪人，碩士，副主任醫師，研究方向：實體腫瘤化療及姑息支持治療。