液質(zhì)聯(lián)用法的測量不確定度的研究進(jìn)展

孫灌寧

【摘 要】目的：提高液質(zhì)聯(lián)用法的測量不確定度的普及與運(yùn)用水平。方法：精選匯總了近年來國內(nèi)采用液質(zhì)聯(lián)用法評定不確定度方面發(fā)表的論文。結(jié)果與討論總結(jié)不確定度評定的主要參數(shù)，指出了目前研究中存在的主要問題，以期為今后的研究提供基礎(chǔ)資料。

【關(guān)鍵詞】不確定度；液質(zhì)聯(lián)用；研究進(jìn)展

0 概述

1993年，BIPM（國際計量局）、ISO（國際標(biāo)準(zhǔn)化組織）、IFXX（國際臨床化學(xué)聯(lián)會）等七個國際組織聯(lián)合制定了《測量不確定度表示指南》[1]，將測量不確定度定義為：“與測量結(jié)果相關(guān)聯(lián)的一個參數(shù)，用以表征合理地賦予被測量之值的分散性”，即不確定度用于表達(dá)測量結(jié)果的分散程度，是一個可用數(shù)字描述的定量概念[2]。，測量的水平越高，試驗質(zhì)量越高，則測量不確定度越?。环粗嗳?。測量不確定度評定的包括以下幾步：第一，規(guī)定被測量；第二，識別不確定度的來源；第三，不確量化定度分量；第四，計算合成不確定度；第五，報告不確定度[3]。隨著時代的發(fā)展，檢測手段和檢驗方法的逐步完善，為了更合理、科學(xué)地控制質(zhì)量，測量不確定度被引入食品藥學(xué)領(lǐng)域[3]。

液相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（Liquid Chromatography-Massspectrometry）是20世紀(jì)發(fā)展起來的一門綜合分析技術(shù)，該技術(shù)在天然藥物化學(xué)成分分離和鑒定、藥物動力學(xué)和藥物代謝產(chǎn)物研究、蛋白質(zhì)分離和鑒定、殘留物分析、臨床診斷研究等方面都具有廣泛的應(yīng)用[4]。作為目前最重要的分離和鑒定分析方法之一的技術(shù)，其不確定度的評定也理所應(yīng)當(dāng)受到充分重視。近年來液質(zhì)聯(lián)用測定的不確定度評定也有不少文獻(xiàn)報道，但由于液質(zhì)聯(lián)用測定不像傳統(tǒng)光譜或高效液相色譜法測定參數(shù)簡單、重現(xiàn)性好，不同儀器、不同參數(shù)、不同目標(biāo)物質(zhì)……甚至不同分析時間均產(chǎn)生不同誤差，因此不確定度的評定也相對復(fù)雜。

本文綜述了近年來發(fā)表的在食品藥品等領(lǐng)域液質(zhì)聯(lián)用法評定不確定度的主要文獻(xiàn)。

1 液質(zhì)聯(lián)用法的測量不確定度評定

張清華、楊勁、賀英等[5]采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測定曲克蘆丁血藥濃度，用自底向上法與方法學(xué)驗證數(shù)據(jù)相結(jié)合的方法，計算相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度和合成相對不確定度。結(jié)果：提取回收率和標(biāo)準(zhǔn)曲線是最主要不確定度分量。其中，標(biāo)準(zhǔn)曲線分量大小與濃度范圍和重復(fù)次數(shù)密切相關(guān)。

楊杰、譚潔，鄒建軍[6]，評價了液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定氯吡格雷羧酸代謝物SR26334血藥濃度的不確定度，結(jié)果20μg/L的SR26334的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為0.816μg/L，擴(kuò)展不確定度為1.63μg/L。結(jié)論是樣品前處理和標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合是濃度測定結(jié)果的主要的不確定度來源。

武利慶、王晶[7]比對了直接流動注射電噴霧質(zhì)譜法和液質(zhì)聯(lián)用電噴霧質(zhì)譜法測定牛血清白蛋白相對分子質(zhì)量的測量不確定度：直接流動注射法較液質(zhì)聯(lián)用法測定擴(kuò)展不確定度高。作者認(rèn)為：液質(zhì)聯(lián)用電噴霧質(zhì)譜法測定結(jié)果的中心值與理論值更為接近主要是由于在直接流動注射分析時樣品中殘留的緩沖鹽和少量的多肽等雜質(zhì)可能與牛血清白蛋白形成加合物，使相對分子質(zhì)量測定結(jié)果發(fā)生偏差；而液質(zhì)聯(lián)用測定時經(jīng)過色譜柱的分離和脫鹽，雜質(zhì)對相對分子質(zhì)量測定結(jié)果的影響大大降低。

徐淑暖、韓媛媛、陳硯朦等通過超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定動物源性食品中氯霉素的殘留[8]量，內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果：不確定度的來源主要是標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合、待測樣品的制備時、回收率和樣品測定的重復(fù)性等。作者對測量不確定度較大的原因進(jìn)行了討論，并對計算方法進(jìn)行簡化，認(rèn)為樣品中氯霉素的含量低，對照品稀釋步驟較多，引入貢獻(xiàn)最大。并且待測樣品基底和前處理復(fù)雜，造成回收率偏低，引入的不確定度較大。作者將與天平稱量操作的重復(fù)性、定容體積重復(fù)性和移液體積重復(fù)性這幾項重復(fù)性分量合并為總測量過程的一個分量，由測量結(jié)果的重復(fù)性表示，不再單獨(dú)計算。

任雪冬、劉成雁、林雪征等[9]對畜禽肉中十種磺胺類獸藥殘留檢測的不確定度進(jìn)行了分析和評定。結(jié)果：標(biāo)準(zhǔn)品的配制、稀釋，標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)，樣品回收率對樣品的相對不確定度貢獻(xiàn)較大。作者同樣認(rèn)為樣品前處理中樣本制備、提取、凈化等環(huán)節(jié)帶來的污染或損失，基質(zhì)干擾，儀器進(jìn)樣、檢測器響應(yīng)等誤差均可以通過增加回收率實驗考察不確定度貢獻(xiàn)。

2 結(jié)果與討論

測定不確定度與測量誤差既有區(qū)別，又有聯(lián)系。誤差是客觀存在的測量結(jié)果與真值之差。但由于真值往往不知道，無法準(zhǔn)確得到。測量不確定度是說明測量分散性的參數(shù)，由分析和評定得到，因而與人的認(rèn)識程度有關(guān)[10]。測量誤差很小，但對不確定度的認(rèn)識不足，計算的不確定度可能較大；反之分析估計不足，給出的不確定度比實際偏小。因此，科學(xué)的評估方法是關(guān)鍵。

高效液相色譜法評估測量不確定度的文獻(xiàn)較多，鑒于液質(zhì)聯(lián)用法與普通高效液相色譜法的主要區(qū)別：測量濃度范圍低和基質(zhì)效應(yīng)。采用液質(zhì)聯(lián)用法評定測量不確定度的文獻(xiàn)多得出結(jié)論：不確定度來源主要為標(biāo)準(zhǔn)曲線和前處理。這主要是由于低濃度需要更多的稀釋步驟，減少基質(zhì)效應(yīng)需要更復(fù)雜的樣品前處理步驟，更需要進(jìn)行回收率的驗證；為了消除前處理回收率的變化，可以引入內(nèi)標(biāo)定量，而內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的回收率和基質(zhì)效應(yīng)又需要進(jìn)一步驗證。因此，采用液質(zhì)聯(lián)用法評定測量不確定度時應(yīng)著重關(guān)注基質(zhì)效應(yīng)和回收率的問題，并且避免重復(fù)計算。

【參考文獻(xiàn)】

[1]顧志榮，金巖，師富貴.不確定度評定在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2014，10（04）：79-81.

[2]中國實驗室國家認(rèn)可委員會.化學(xué)分析中不確定度的評估指南[M].北京：中國計量出版社，2002：11-32.

[3]陸明，范國榮，汪楊，陳桂良，楊美成，陳?？?測量不確定度在藥品檢測領(lǐng)域的研究進(jìn)展[J].中國藥事，2013，27（05）：485-492.

[4]雷勇勝，宋麗明，蔣慶峰.液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在藥物的有關(guān)物質(zhì)分析中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代儀器，2011，17（04）：9-13+8.

[5]張清華，楊勁，賀英，湯麗玲，杜迎翔.對液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定曲克蘆丁血藥濃度的不確定度評價[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2010，26（01）：68-70.

[6]楊杰，譚潔，鄒建軍.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定氯吡格雷羧酸代謝物SR26334血藥濃度的不確定度評價[J].中國新藥與臨床雜志，2013，32（08）：664-668.

[7]武利慶，王晶.電噴霧質(zhì)譜法測定牛血清白蛋白相對分子質(zhì)量及測定結(jié)果的不確定度評估[J].化學(xué)分析計量，2007，16（1）：20-25.

[8]徐淑暖，韓媛媛，陳硯朦，彭寨玉，張少彬. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定動物源性食品中氯霉素殘留量的不確定度評定[J].華南預(yù)防醫(yī)學(xué)，2014，40（05）：454-458.

[9]任雪冬，劉成雁，林雪征，趙海波.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定畜禽肉中十種磺胺類獸藥殘留的不確定度評定[J].中國獸藥雜志，2011，45（05）：20-25.

[10]王麗楠，楊美華，陳建民.不確定度分析在藥物研究中的應(yīng)用[J].中草藥，2008（03）：464-467

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