肺炎支原體抗體兩種檢測方法的對比分析

羅桂香，周玉球，胡利清，吳洪秋，汪國慶，李　磊

(廣東省珠海市婦幼保健院檢驗科　519001)

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·臨床研究·

肺炎支原體抗體兩種檢測方法的對比分析

羅桂香，周玉球，胡利清，吳洪秋，汪國慶，李磊

(廣東省珠海市婦幼保健院檢驗科519001)

目的探討被動凝集法(PPA)和間接免疫熒光法(IIFA)在肺炎支原體(MP)感染早期診斷中的應用價值。方法對該院兒科2015年1～12月疑因MP感染的2 517例住院患兒采用PPA和IIFA檢測血清MP-IgM的結果進行回顧性分析，比較兩種方法檢測MP-IgM陽性率的差異。結果PPA和IIFA各檢出MP-IgM陽性976例和614例，陽性檢出率分別為38.77%和24.39%，PPA陽性檢出率明顯高于IIFA，差異有統計學意義(P<0.05)。兩法的陽性符合率為80.29%，陰性符合率為74.61%，總符合率為76.00%。同時采用兩種方法檢測MP-IgM，陽性檢出率可達到43.58%，敏感性明顯高于任一單一方法。結論PPA檢測MP-IgM較IIFA敏感，兩者聯合檢測可以提高MP感染診斷的陽性率。

肺炎支原體；肺炎支原體抗體；被動凝集法；間接免疫熒光法

肺炎支原體(MP)是小兒呼吸道感染的常見病原體之一，近年來發病率逐年增多[1]，嚴重威脅了兒童健康。MP感染由于肺部體征輕、病情輕重不一、影像學檢查缺乏特異性等，僅靠臨床診斷較為困難，極易導致誤診、漏診而延誤病情，造成全身多器官、多系統損害，病情嚴重者甚至死亡[2-3]。因此MP感染的早期診斷對臨床治療和預后有重要意義。MP的實驗室檢測方法有很多，包括MP培養、血清學方法和分子生物學方法等。本文回顧性分析2 517例MP肺炎患兒臨床資料，探討被動凝集法(PPA)和間接免疫熒光法(IIFA)檢測MP抗體在兒童MP感染早期的診斷價值。現報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇2015年1～12月在本院兒科住院同時做PPA和IIFA檢測的患兒2 517例，其中男1 552例，女965例，年齡1～9歲，中位年齡3歲。

1.2方法MP-IgM PPA和IIFA檢測試劑盒分別購自珠海麗珠試劑公司和鄭州安圖生物工程股份有限公司。采用日本Olympus公司生產的CX22LKDRFS1型熒光顯微鏡用于IIFA熒光觀察。嚴格按照檢測試劑盒說明書進行操作。PPA每次測試均設置陰性、陽性對照，與待測標本同時檢測。未致敏粒子反映圖像呈陰性結果，陰性對照和陽性對照出現預期結果，以血清稀釋度≥1∶40時出現陽性(+)反應圖像判定為陽性，將顯示出反映圖像為(+)時的最終稀釋倍數作為抗體滴度。IIFA每次測試均設置陰性、陽性對照，與待測標本同時檢測。待檢血清經過IgG吸附劑處理后，加在包被有MP抗原的生物玻片上，熒光顯微鏡下觀察內部質控孔陰性、陰性對照和陽性對照出現的預期結果，以標本中McCoy細胞中的MP出現蘋果綠熒光判斷為陽性，否則為陰性。

1.3統計學處理采用SPSS19.0統計軟件進行統計處理和分析，計數資料以例數或百分率表示，兩種檢測方法陽性率的比較采用配對χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2　結　　果

2.1年齡和季節的影響患兒MP感染存在年齡和季節差異。6個月以內的嬰幼兒感染率在6%以下，1～<4歲的患兒感染率在60%以上；11、12、8、10月MP感染陽性率較高。各年齡段及各月份的MP-IgM 陽性檢出率分布情況見圖1。

2.2檢測MP-IgM的陽性率采用PPA和IIFA從上述患兒血清中檢出MP-IgM陽性有976例和614例，陽性率分別為38.77%和24.39%，PPA檢測陽性率明顯高于IIFA，差異有統計學意義(χ2=216.96，P<0.05)。

2.3PPA和IIFA檢測的一致性兩種方法陽性符合率為80.29%(493/614)，陰性符合率為74.61%(1 420/1 903)，總符合率為76.00%。IIFA陽性PPA陰性有121例，IIFA陰性PPA陽性有483例。同時采用這兩種方法檢測MP-IgM，則陽性檢出率可達到43.58%，敏感性明顯高于任一單一方法。見表1。

表1　　PPA與IIFA測定MP-IgM結果比較(n)

3　討　　論

人類感染MP 6～7 d后，就產生IgM類抗體，2～4周達高峰，以后緩慢下降，持續時間短。IgG比IgM出現晚，在感染兩周后逐漸升高，持續時間較長[4-5]。一般情況下，血清中IgM抗體陽性提示MP早期感染，IgG抗體陽性提示既往感染，IgM、IgG及IgA均為陽性提示初次感染或現癥感染，且不能排除再次感染的可能。由于各地氣候、環境不同，MP感染陽性率有明顯季節差異[6]。從調查結果可知，珠海地區冬、秋季患兒的MP-IgM陽性檢出率較高。這主要是因為珠海秋、冬季節氣候溫和且干燥，適宜于MP的生存和傳播而致MP流行。此外，患兒的年齡也影響MP感染的陽性率。≤6個月患兒MP感染率不到6%，1～<4歲患兒MP感染則超過60%。MP主要經飛沫傳播，≤6個月嬰幼兒MP感染率低與其被動免疫和外界接觸較少密切相關。而1～<4歲幼兒多為學齡前兒童，自身的免疫系統尚在建立和發育之中，尚不健全，且相對于≤6個月嬰幼兒，活動的空間和接觸的人群也會廣些，因此，容易感染MP。該結果與文獻[7-8]的嬰兒期MP肺炎陽性率低，幼兒期陽性率逐漸增高的結論吻合。

本研究結果顯示，PPA和IIFA檢測MP-IgM陽性符合率為80.29%，陰性符合率為74.61%，總符合率為76.00%，PPA檢測MP-MP陽性率明顯高于IIFA(P<0.05)。造成這種差異的根本原因是PPA除了檢測MP-IgM外，還包括了MP-IgG和MP-IgA，因此，靈敏度比IIFA高，但特異度遜色于后者。IIFA和PPA檢測同為陽性，如本文報道的493例患兒，結合臨床表現、療效和愈后，提示為MP現癥感染或近期感染。值得注意是，對于嬰幼兒或免疫功能低下者以及一些早期MP感染患者，產生的MP-IgM少，甚至不產生，PPA檢測有可能為陰性[9-10]。IIFA雖可在MP急性感染期檢出低水平的MP-IgM，但可能對MP中后期感染的檢測無能為力。因此，對于這些臨床上高度懷疑為MP感染但PPA和IIFA測試為陰性的患兒，有待做進一步檢查或過幾天抽血復查。本研究中尚有部分病例出現兩者結果不一致的情況，這是由于患兒在MP感染的不同階段或重復感染或存在自身抗體時所致。基于以上的研究結果，臨床上有必要同時采用PPA和IIFA檢測MP抗體，能提高實驗診斷MP感染的能力。本研究結果也證實了以上觀點。

綜上所述，PPA和IIFA檢測MP各有優劣。PPA不需任何設備、易于開展，特異度和靈敏度基本滿足臨床需求，可作為檢測MP早期感染的診斷方法。IIFA特異性強、操作簡便、快速、重復性好，檢測結果陽性基本可以確定為MP感染。因此，建議臨床聯合應用PPA和IIFA檢測，結合患者情況綜合分析MP抗體陰陽性的臨床意義，提高MP感染早期診斷的確診率。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.17.043

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1673-4130(2016)17-2460-02

2016-03-12

2016-05-19)