骨肉瘤Saos-2細胞Set7/9基因沉默及基因治療靶點構建

施星臣　耿哲　施鑫鶴

骨肉瘤Saos-2細胞Set7/9基因沉默及基因治療靶點構建

施星臣耿哲施鑫鶴

目的：構建沉默的人Set7/9的真核表達載體，篩選其穩定轉染的骨肉瘤Saos-2細胞株，評價干擾效果以及對骨肉瘤相關基因表達和細胞增殖的影響，為臨床骨肉瘤基因治療提供新靶點。方法：依據靶向序列，構建人Set7/9基因的shRNA和對照載體，穩定轉染骨肉瘤細胞Saos-2。應用Real-time PCR以及Western-blot方法檢測其基因和蛋白質水平，確定該基因的沉默情況。結果：構建載體Set7/9-shRNA，Real-time PCR和Western-blot結果顯示，沉默后Set7/9基因和蛋白表達明顯被抑制，而與其相關的Sirt1、Suv39h1蛋白表達水平提高，細胞增殖率增加。結論：沉默Set7/9基因后，上調與其相關的Sirt1和Suv39h1蛋白表達水平，Set7/ 9基因在骨肉瘤Saos-2細胞系中可能調控其的表達。此外，細胞增殖效率增加表明Set7/9具有抑制骨肉瘤Saos-2細胞增殖的作用。

Set7/9；Saos-2細胞；Western-blot

【Abstract】Objective：To silencehuman gene Set7/9 and screen outstable transfection cell line in Saos-2，and investigate the impact ofknockdown ofSet7/9 and influence to theexpression of the related genes.Supplynew target forclinical testand therapy.M ethods：The target oligowasdesigned by thesoftand synthesized，shRNA interferencevectorand the controlvectorwere constructed and transfected into Saos-2 cells.Then Real-time PCR and western-blotwere performed for detection of knockdown of Set7/9.Results：The shRNA interference vector wasconstructed and transfected into Saos-2 cellssuccessfully，comparedwith thenegative controlgroup，theexpression ofSet7/9wasdramatically down-regulated.Meanwhile，expression of related protein Sirt1 up regulated.Conclusion：Down regulation the expression of Set7/9 can upregulate Sirt1and Suv39h1，imply thatSet7/9may regulate theirexpression in Saos-2，and suppress theproliferation.

【Keywords】Set7/9；Saos-2 cells；Western-blot

骨肉瘤（Osteosarcoma，OS）又稱為成骨肉瘤，是從間質細胞系發展而來的一種最常見的原發性骨惡性腫瘤，在兒童和年輕成人中具有高侵襲性和遠端高發轉移性［1］。小兒骨惡性腫瘤治療包括新輔助化療和手術技術，治療方法雖有巨大進步，但仍有大量的復發或轉移的病例［2，3］。骨肉瘤的治愈率約為25%，治愈水平幾乎停滯在20年前［4，5］。因此，迫切需要研究其發病機制，為藥物研究提供新的靶點，從而為臨床給出新的治療方案。

表觀遺傳學方面的研究逐漸成為熱點，其在腫瘤發生和發展中的作用也不斷被揭示，其中越來越多的報道探討了SET結構域在腫瘤發生、發展中的作用［6，7］。SET結構域是蛋白賴氨酸甲基化轉移酶（protein ysine methyltransferases，PLMTs或PKMTs）家族成員［8，9］。……