類風濕關節炎外周血TLR4表達及其與IL-37水平的相關性

萬麗麗，王曉東，慈春增

1.濰坊醫學院臨床醫學院，山東濰坊 261042；2.濰坊醫學院附屬醫院免疫風濕科，山東濰坊 261042

類風濕關節炎外周血TLR4表達及其與IL-37水平的相關性

萬麗麗1，王曉東2，慈春增2

1.濰坊醫學院臨床醫學院，山東濰坊 261042；2.濰坊醫學院附屬醫院免疫風濕科，山東濰坊 261042

目的 研究類風濕關節炎（RA）外周血Toll樣受體4（TLR4）表達水平，并觀察其與白介素-37（IL-37）的相關性。方法 選取2015年5月—2016年5月濰坊醫學院附屬醫院收治的45例RA患者為研究組，另選取同期骨21例關節炎患者為骨關節炎組，健康體檢者21名為對照組，應用流式細胞儀檢測入選者外周血TLR4表達，并觀察其與IL-37水平相關性。 結果 研究組TLR4陽性率和IL-37水平為（28.43±3.21）%和（78.56±8.97）ng/L，均顯著高于骨關節炎組的（10.21±4.32）%、（17.25±5.68）ng/L和對照組的（13.08±2.05）%、（10.08±2.56）ng/L，比較差異具有統計學意義（P＜0.05），骨關節炎組和對照組比較差異無統計學意義（P＞0.05）；相關性分析顯示：TLR4陽性率與IL-37水平呈正相關關系。結論 RA患者外周血TLR4表達上調，且與IL-37水平呈正相關關系。

類風濕關節炎；Toll樣受體4；白介素-37

類風濕關節炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一種全身性自身免疫病，以對稱性、多關節慢性破壞為主。RA與遺傳、環境及多因素存在相關性，但是迄今發病機制尚不確切[1]。Toll樣受體（toll-like receptor，TLR）是一種跨膜蛋白，其在RA發病中的作用越來越受重視。Toll樣受體4（tolllike receptor-4，TLR4）是被首先發現的TLR，能識別病原體相關模式分子來激活機體免疫系統，啟動一系列信號傳導通路，產生炎性因子[2]。白介素-37（Interleukin-37，IL-37）是一種抗炎性細胞因子，能抑制過度炎性反應，起到保護作用[3]。該研究旨在分析2015年5月—2016年5月濰坊醫學院附屬醫院免疫風濕科收治的45例RA患者外周血TLR4表達水平，并觀察其與IL-37的相關性，為臨床診療提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年5月—2016年5月該院免疫風濕科收治的45例RA患者為研究組，所有患者均符合RA的診斷標準[4]，經疾病活動評分顯示病情活動，并排除細菌、病毒感染。男性10例，女性35例，年齡35～70歲，平均年齡（41.3±2.1）歲，均另選取同期骨關節炎患者21例為骨關節炎組，男性5例，女性16例，年齡34～70歲，平均年齡（40.8±1.3）歲，健康體檢者21名為對照組，男性6名，女性15名，年齡35～70歲，平均年齡（41.2±2.3）歲，3組入選者年齡和性別比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

抽取3組入選者空腹清晨靜脈血約4 mL，將其放置于抗凝管中，應用流式細胞儀檢測TLR4表達陽性情況，應用酶聯免疫吸附法 （Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測血清中IL-37表達水平。流失細胞檢測應用熒光標記單克隆抗體為抗人CD14-FITC、抗人TLR4-PE，ELISA試劑盒為IL-37試劑盒。

1.3 觀察指標

觀察各組外周血TLR4陽性率和IL-37水平，并分析TLR4陽性率與IL-37水平的相關性。

1.4 統計方法

應用SPSS 17.0統計學軟件分析和處理數據，計量資料用（±s）表示，應用t檢驗，應用Pearson相關分析TLR4陽性率與IL-37水平的相關性，以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 研究組和骨關節炎組比較

研究組TLR4陽性率和IL-37水平均顯著高于骨關節炎組，比較差異具有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 研究組和骨關節炎比較（±s）

表1 研究組和骨關節炎比較（±s）

組別TLR4陽性率（%） IL-37（ng/L）研究組（n=45）骨關節炎組（n=21）tP 28.43±3.21 10.21±4.32 5.023 0.021 78.56±8.97 17.25±5.68 7.937 0.015

2.2 各組比較

研究組TLR4陽性率和IL-37水平均顯著高于對照組，比較差異具有統計學意義（P＜0.05），見表2。同時，比較了表1和表2中骨關節炎組和對照組TLR4陽性率和IL-37水平的差異，結果顯示兩組間差異無統計學意義（P＞0.05）。

表2 研究組和對照組比較（±s）

表2 研究組和對照組比較（±s）

組別TLR4陽性率（%） IL-37（ng/L）研究組（n=45）對照組（n=21）tP 28.43±3.21 13.08±2.05 4.984 0.024 78.56±8.97 10.08±2.56 8.015 0.011

2.3 相關性分析

Pearson相關性分析顯示TLR4陽性率與IL-37水平呈正相關關系（r=0.805，P＜0.05），見圖1。

圖1 RA患者IL-37（ng/L）與7LR4（%）相關性

3 討論

RA屬于自身免疫性疾病，免疫功能異常是引起RA的主要發病機制。滑膜炎是RA的基本病理改變，而炎癥反應發揮重要作用。雖有研究證實，RA是在抗原的驅動下，由多因素共同參與引起，但是至今仍不明確。早期研究多致力于T、B細胞的研究，試圖探討T細胞及B細胞在RA免疫反應中的作用[5]。近年來，TLR逐漸被學者所重視，其在RA發生和發展中發揮一定作用。TLR能連接天然和獲得性免疫危險信號，可以促進炎性因子受體表達[6]。當機體發生感染、免疫紊亂時，TLR可以分子模擬、表位擴散、模糊識別等引起免疫紊亂，使大量炎性因子產生，參與炎性反應，介導RA發生和發展過程。TLR4是目前研究最廣泛的TLR受體，主要識別細菌脂多糖，然后再CD14協助下調控炎性反應。已有研究證實[7]，TLR4會于RA淋巴細胞和滑膜纖維母細胞的表面高表達。

IL-37主要由12條β鏈構成，結構與白介素-18具有相似性，存在5種不同異構體，其中IL-37b結構最大，是主要表達的功能單位。IL-37也是先天性炎癥免疫抑制劑，可以抑制促炎因子的信號通路，抑制STATs1-4磷酸化，進而削弱炎癥作用，對炎癥反應具有抑制作用；IL-37還可以與SMAD3形成復合物，對STAT1及STAT3具有拮抗作用，起到抑制炎癥反應作用。有研究顯示[8-9]，IL-37能有效抑制腫瘤壞死因子α，抑制中性粒細胞活化，降低肝細胞分泌促炎性因子和趨化因子，也會減少對肝細胞的損傷，進而形成良性循環。該研究顯示，研究組TLR4陽性率和IL-37水平為（28.43±3.21）%和（78.56±8.97）ng/L，均顯著高于骨關節炎組的（10.21±4.32）%、（17.25±5.68）ng/ L和對照組的（13.08±2.05）%、（10.08±2.56）ng/L，與姚茹冰等[9]，楊超等人[10]研究結果具有相似性，姚茹冰研究顯示RA組TLR4表達明顯高于健康對照組，楊超等人研究顯示，RA組治療前IL-37為 （244.31±50.42）ng/L明顯高于對照組的（14.35±8.18）ng/L，說明RA患者會出現TLR4表達上調，IL-37表達水平也會升高，分析其原因：RA發病與免疫紊亂存在較大關系，免疫紊亂會刺激TLR4表達上調，進而促進炎性反應發生；IL-37能抑制炎性反應，而RA患者機體存在較高炎性反應，會刺激IL-37表達升高來抑制炎性反應。不同炎性因子刺激IL-37水平升高，但是不同細胞及組織具體誘導機制尚不確切，有待進一步解決。但IL-37和炎癥因子均參與RA的發生和發展，并能通過抑制炎性因子來發揮保護機制，提示臨床上可以通過提高IL-37水平來治療RA。該研究還發現，TLR4陽性率與IL-37水平呈正相關關系，分析其原因為：RA患者會出現TLR4表達上調，且在炎性因子的刺激下，TLR4信號通路會反復激活，刺激炎性因子表達升高，IL-37是炎癥因子的抑制劑，可以代償性的因炎癥因子增加而增加，IL-37介導負反饋調節來降低RA患者過度炎性反應，因此TLR4陽性率與IL-37水平呈正相關關系。

綜上所述，RA患者外周血中會出現TLR4陽性率高表達，也會出現IL-37水平表達升高，IL-37水平升高對患者具有一定保護作用，TLR4與IL-37存在正相關關系。

（

）

[1]錢雷,藺昕,陳瑋，等.類風濕關節炎患者外周血單核細胞亞群的變化及其意義[J].中國免疫學雜志,2016,32(10):1519-1523,1531.

[2]楊新蕾,張卓莉.多種信號通路在類風濕關節炎發病機制中的研究進展[J].中華風濕病學雜志,2016,20(7):498-500.

[3]陳歡雪,王曉非.白細胞介素37在類風濕關節炎發病機制中的作用[J].中國醫科大學學報,2014,43(3):275-276,283.

[4]李雪,栗占國.2015年亞洲太平洋地區風濕病學學會聯盟類風濕關節炎治療建議[J].中華風濕病學雜志,2016,20(4): 286-288.

[5]王貴,黃晶,徐慧慧,等.高遷移率族蛋白1和Treg細胞與類風濕關節炎相關性的研究進展[J].風濕病與關節炎,2016, 5(7):60-64.

[6]王麗.類風濕關節炎患者血清白細胞介素6、白細胞介素17、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子和腫瘤壞死因子α水平檢測的臨床意義[J].中國基層醫藥,2016,23(16):2454-2457.

[7]楊濱州,張育.維生素D與TLR、Tregs、Th17在類風濕性關節炎發病機制中的作用研究進展[J].實用藥物與臨床,2015, 18(9):1115-1118.

[8]孫淑銀,王穎翠.血清白細胞介素－37水平與類風濕關節炎發病及病情進展的相關性[J].中國老年學雜志,2016,36 (20):5115-5117.

[9]姚茹冰,王圓圓,蔡輝,等.脂多糖對類風濕關節炎外周血單核細胞Toll樣受體4、髓樣分化因子88蛋白表達的影響[J].安徽醫藥,2016,20(9):1673-1675.

[10]楊超,劉榮臻,張曉延,等.類風濕性關節炎患者血清中IL-37水平變化的探索研究[J].中華全科醫學，2014,12 (7):1035-1037.

Expression of TLR4 in Peripheral Blood of Patients with Rheumatoid Arthritis and Its Correlation with IL-37 Level

WAN Li-li1，WANG Xiao-dong2，CI Chun-zeng2
1.Weifang Medical University,Clinical Medicine College，Weifang,Shandong Province,261042 China；2.Affiliated Hospital of Weifang Medical University,Immune Department of rheumatism,Weifang,Shandong Province,261042 China

Objective To study the expression level of Toll like receptor 4(TLR4)in peripheral blood in rheumatoid arthritis(RA),and to observe the interleukin-37 (IL-37)correlation.Methods 45 patients with RA who were admitted to affiliated Hospital of Weifang Medical University from May 2015 to May 2016 were selected as the study group,another 21 patients with osteoarthritis of the same period were selected as osteoarthritis group,21 cases of healthy persons were as control group,the expression of TLR4 in peripheral blood was detected by flow cytometry,and to observe the correlation between the level of IL-37 and the level of.Results The positive rate of TLR4 and the level of IL-37 in the study group were（28.43±3.21）%and（78.56±8.97）ng/L,they were significantly higher than（10.21±4.32）%,（17.25±5.68）ng/L in the osteoarthritis group and（13.08±2.05）%,（10.08±2.56）ng/L in the control group,the difference was statistically significant(P＜0.05),there was no significant difference between the osteoarthritis group and the control group(P＞0.05);Correlation analysis showed that:the positive rate of TLR4 was positively correlated with IL-37 level.Conclusion TLR4 expression in peripheral blood of patients with RA are up regulation,and it is positively correlated with the level of IL-37.

Rheumatoid arthritis;Toll like receptor 4;Interleukin-37

R36

A doi 10.11966/j.issn.2095-994X.2016.02.04.08

2016-10-21；

2016-11-25

萬麗麗（1989.8-），女，山東臨沂人，碩士，研究方向：風濕病學。

慈春增（1962.4-），男，山東濰坊人，本科，主任醫師，研究方向：風濕病學，E-mail：986779932@qq.com。