益腎填精助孕方結合免疫治療習慣性流產療效觀察

陳蓉，周華友，閆清雅

（廣州中醫藥大學第二附屬醫院，廣東省中醫院婦科，廣東廣州　510120）

益腎填精助孕方結合免疫治療習慣性流產療效觀察

陳蓉，周華友，閆清雅

（廣州中醫藥大學第二附屬醫院，廣東省中醫院婦科，廣東廣州510120）

【目的】探究益腎填精助孕方結合淋巴細胞主動免疫治療習慣性流產（HA）封閉抗體（BA）陰性患者的臨床療效。【方法】將139例BA陰性的HA患者隨機分為治療組70例與對照組69例。對照組給予單純淋巴細胞主動免疫治療，治療組給予淋巴細胞主動免疫結合益腎填精助孕方（仙芪益真膠囊和仙子益真膠囊）治療。觀察2組BA轉陽率及安胎療效。【結果】（1）BA轉陽率比較：治療后，治療組的BA轉陽率為82.86%，優于對照組的60.87%，差異有統計學意義（P＜0.05）。（2）安胎療效比較：治療后，治療組的總有效率為87.14%，優于對照組的66.67%，差異有統計學意義（P＜0.05）。【結論】對BA陰性的HA患者用益腎填精助孕方結合淋巴細胞主動免疫治療較單純淋巴細胞免疫治療更有效。

習慣性流產；封閉抗體；淋巴細胞主動免疫治療；益腎填精助孕方；仙芪益真膠囊；仙子益真膠囊

習慣性流產（habitual abortion，HA）指連續自然流產3次及3次以上者。國內外報道原因不明習慣性流產約占流產患者的40%～70%［1］。此類患者往往經歷多次妊娠和流產，給患者身心帶來極大痛苦，而且由此可能導致家庭不和與婚姻破裂。HA病因除染色體異常、黃體功能不足、甲狀腺功能減退、子宮發育不良等因素外，還有一部分患者流產原因不明。有研究表明原因不明習慣性流產的發生與免疫因素密切相關［2］。免疫因素確切的HA患者，其發病機理還未完全明了。本院前期臨床研究表明益腎填精助孕方治療HA療效顯著，但在免疫治療療效方面缺乏實驗室依據。本研究采用益腎填精助孕方結合淋巴細胞主動免疫治療HA，并與單純使用淋巴細胞主動免疫治療進行療效比較，旨在對HA病因及中醫藥療效做進一步深入研究。現將研究結果報道如下。

1　對象與方法

1.1研究對象本研究病例均為2014年9月～2016年1月在廣東省中醫院婦科門診接受治療的HA患者，共139例。采用隨機數字表法將患者隨機分為治療組70例和對照組69例。

1.2診斷標準（1）西醫診斷標準參照《婦產科學》［3］擬定：連續自然流產3次或3次以上者。（2）中醫診斷標準參照《中醫婦科學》［4］擬定：妊娠期出現陰道少量流血，時下時止，腰酸腹痛墜脹。

1.3納入標準來本院就診的139例患者，均經以下篩查：①血清中封閉抗體（blocking antibody，BA）陰性；②女方行B超及常規的婦科檢查，排除生殖器解剖結構異常及生殖道感染；③內分泌檢查（性激素）基本正常；④夫妻雙方染色體核型篩查陰性；⑤女方抗精子抗體、抗內膜抗體、抗磷脂抗體等免疫性抗體檢測為陰性；⑥男方精液檢查基本正常，性生活正常；⑦夫妻雙方除外肝炎、艾滋病、梅毒等傳染病，肝腎功能和血常規正常；⑧所選患者確診為習慣性流產，所有患者及家屬均簽署了知情同意書。

1.4治療方法

1.4.1對照組單純給予淋巴細胞主動免疫治療。淋巴細胞主動免疫治療：首選配偶血液，如配偶有傳染性疾病，則選用無血緣關系第三方健康他人的血液。無菌條件下抽取供者靜脈血8～10 mL，肝素抗凝，用10 mL生理鹽水稀釋；沿離心管壁緩慢加到等量淋巴細胞分離液上，旋緊管蓋，2 000 r/min，離心30 min；吸取含有淋巴細胞的白膜層，加入適量無菌生理鹽水重復洗滌3次；小心將白膜層重懸并調整外周血單個核細胞（PBMC）濃度為2×107～4×107個/mL，淋巴細胞比例占75%以上，懸液總量約1～2 mL，準備皮下注射。整個過程應嚴格無菌操作。用皮內注射的方法，注入女方前臂皮下6點，左右手臂交替進行。注射后24 ～28 h，局部可出現直徑0.2～0.6 cm大小不等的紅潤硬結，以后逐漸消失。孕前4次為1個療程，間隔3～4周治療1次，1個療程后復查BA，陰性者繼續下一個療程治療，BA轉陽者建議在6個月之內妊娠。確診妊娠后，前3個月再加強行免疫治療2次，間隔2～3周。如果半年內未孕，再適當延長免疫治療時間。

1.4.2治療組給予淋巴細胞主動免疫結合益腎填精助孕方治療。（1）淋巴細胞主動免疫治療同對照組。（2）益腎填精助孕方治療：使用本院研制的仙芪益真膠囊（益真I號）［由巴戟天、淫羊藿、黃芪、當歸、枸杞子、川續斷等組成，經精制加工提取制成顆粒裝膠囊，每粒含生藥1.09 g，批準文號為（99）穗衛醫制（省）字第B-032號］，每日3次，每次3粒。仙子益真膠囊（益真II號）［由熟地黃、女貞子、旱蓮草、川續斷、菟絲子、淫羊藿等組成，經精制加工提取制成顆粒裝膠囊，每粒含生藥1.65 g，批準文號為（99）穗衛醫制（省）字第B-033號］，每日3次，每次3粒。2種膠囊交替口服，非經期使用，經期停服。療程同對照組。

1.5療效標準根據《中藥新藥臨床研究指導原則》［5］及《中醫病證診斷和療效標準》［6］擬定。治愈：陰道流血停止，腰腹疼痛消失，子宮大小與孕周相符，B超檢查胚胎發育正常。顯效：陰道流血停止，腰酸腹痛明顯改善，子宮大小與孕周相符，B超檢查胚胎發育正常。有效：陰道流血停止，腹脹痛、腰酸墜脹癥狀有所改善，子宮大小與孕周相符，B超檢查胚胎發育正常。無效：經治療，出血、腹痛、腰酸痛同前或加重，胚胎停止發育。

1.6統計方法采用SPSS 17.0統計軟件進行統計分析。計數資料用率或構成比表示，組間比較用 χ2檢驗；計量資料用均數 ±標準差（±s）表示，若方差齊性及服從正態分布，組間比較采用t檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.12組患者基線資料比較表1結果顯示：2組HA患者的年齡及流產次數比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），表明2組的基線特征基本一致，具有可比性。

表1　2組患者年齡及流產次數比較Table 1　Comparison of age and abortion frequency of both groups　（±s）

表1　2組患者年齡及流產次數比較Table 1　Comparison of age and abortion frequency of both groups　（±s）

組別對照組治療組N 69 70 N年齡/歲30.3±3.1 31.0±3.3 N流產/次3.0±1.1 3.1±1.3

2.22組患者治療后BA轉陽率比較表2結果顯示：治療組的BA轉陽率為82.86%，優于對照組的60.87%，2組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.32組患者安胎療效比較表3結果顯示：治療組的總有效率為87.14%，優于對照組的66.67%，2組安胎療效比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。

表2　2組患者治療后BA轉陽率比較Table 2　Comparison of rate for BA turning positive in both groups after treatment

表3　2組患者安胎療效比較Table 3　Comparison of anti-abortion effect of both groups　n（p/%）

3　討論

從現代生殖免疫的觀點來看，HA的發生是母胎之間免疫狀態失衡導致免疫排斥的結果［7］，是由于患者對胚胎抗原免疫反應不足，即患者由于對胚胎同種異體抗原無法產生足夠的BA而使胚胎得不到免疫防護而流產。正常妊娠時，夫婦人類白細胞抗原（HLA）不相容，胚胎所帶的父系HLA能刺激母體免疫系統并產生抗配偶淋巴細胞的特異性IgG 抗HLA，從而封閉母體淋巴細胞對滋養層細胞的細胞毒作用，保護胚胎或胎兒免受排斥，被認為是維持妊娠所必需的BA。體外研究顯示，妊娠時母體可產生致敏T細胞，它能破壞胚胎細胞，但致敏T細胞的殺傷功能可被移植，然而習慣性流產的婦女80%～90%測不到這種特異性的BA，體內存在未被抑制的細胞。這些細胞可直接作用于胚胎，或通過釋放炎性介質間接損害胎兒或胎盤，從而導致流產發生。本課題組經過多年的臨床試驗和研究發現，淋巴細胞主動免疫療法能有效地阻止BA缺乏，且未發現其對母兒有明顯副反應。

本院院內制劑益腎填精助孕方經過多年的臨床經驗總結，為婦科調經助孕效果顯著的經驗方，其方包括仙芪益真膠囊（益真I號）和仙子益真膠囊（益真Ⅱ號）。仙芪益真膠囊以巴戟天、淫羊藿溫補腎陽，暖煦胞宮；黃芪補氣生血，當歸養血活血，二者相配為補氣生血配伍藥對；枸杞子為植物種仁，味厚質潤，以補髓填精見長；川續斷益氣養血，補陰攝陽，使其“陽得陰助而生化無窮”。仙子益真膠囊以熟地黃合二至丸養血滋陰，填精益髓；其中川續斷歸肝腎經，補腎強膝；菟絲子補益肝腎；淫羊藿溫腎壯陽，補陽益陰，使其“陰得陽升而泉源不竭”。全方共奏陰陽平補，益腎填精助孕之功效。

益腎填精助孕方，臨床上仙子益真膠囊和仙芪益真膠囊序貫應用，共奏溫腎助陽、益精養血種子之功效。該法順應腎中陰陽消長變化和卵巢間周期性變化規律，根據月經周期不同階段針對性用藥，促進腎中陰陽平衡及其協調轉化，促進腎—天癸—沖任—胞宮軸的功能趨向正常，全面改善下丘腦—垂體—卵巢軸的內分泌功能，促進卵泡發育，從而健全黃體功能以助孕。腎氣充盛，腎精充足，胎元自安。

益真Ⅰ號補元陽、Ⅱ號益真陰，既助腎陽又助腎陰，達到陰陽互補，互相平衡。補腎是調經種子的大法。徐珉等［8］觀察了補腎中藥益真Ⅰ、Ⅱ號膠囊對高齡不孕婦女圍排卵期卵巢間質血流的影響，圍排卵期卵巢間質血流的改變可間接反映卵子質量、卵巢儲備的提高。因而認為補腎中藥具有改善卵子質量，提高卵巢儲備的作用。顧春曉等［9］在補腎法治療黃體不健性不孕癥的臨床研究中得出結論：補腎中藥周期療法是治療黃體不健性不孕癥的有效療法，可促進腎中陰陽平衡及其協調轉化，達到健全黃體功能以助孕的目的。

本研究通過觀察益腎填精助孕方結合淋巴細胞主動免疫治療習慣性流產封閉抗體陰性患者的臨床療效，發現在中醫補腎及免疫療法共同調節下，其可以提高不明原因的習慣性流產患者的再次妊娠成功率，是一種高效可行的方法，易于臨床操作，且未發現明顯的副作用，具有重要的臨床應用價值。同時我們還需擴大樣本量，以進一步深入了解其具體的效應機制。

［1］林其德.原因不明復發性流產的基礎與臨床研究進展［J］.中華婦產科雜志，2003，38（8）：48l.

［2］楊素娟，江靜，郝桂敏，等.主動免疫治療原因不明習慣性流產的臨床研究［J］.實用婦產科雜志，2007，23（5）：300.

［3］樂杰.婦產科學［M］.7版.北京：人民衛生出版社，2008：85.

［4］馬寶璋.中醫婦科學［M］.6版.上海：上海科學技術出版社，2001：127.

［5］鄭筱萸.中藥新藥臨床研究指導原則（試行）［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2002：230-231.

［6］國家中醫藥管理局.中醫病證診斷和療效標準［M］.南京：南京大學出版社，1994：72.

［7］顏衛華，范麗安，楊鈺琴，等.HLA-G多態性與原因不明習慣性流產相關性研究［J］.中國免疫學雜志，2002，18（2）：120.

［8］徐珉，黃健玲，司徒儀，等.補腎中藥益真Ⅰ、Ⅱ號膠囊對高齡不孕婦女圍排卵期卵巢間質血流的影響［J］.中國現代醫學雜志，2008，18（7）：833.

［9］顧春曉，徐珉，李麗蕓.補腎法治療黃體不健性不孕癥30例臨床研究［J］.國醫論壇，2008，23（4）：18.

【責任編輯：陳建宏】

Clinical Observation of Habitual Abortion Patients Treated by Yishen Tianjing Zhuyun Prescription Together with Active Lymphocyte Immunotherapy

CHEN Rong，ZHOU Huayou，YAN Qingya
（Dept.of Gynecology of Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，the Second Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510120 Guangdong，China）

ObjectiveTo investigate the therapeutic effect of Yishen Tianjing Zhuyun Prescription（a Chinese herbal recipe consisting of Xianqi Yizhen Capsules and Xianzi Yizhen Capsules，having the actions of strengthening kidney-essence and promoting gestation）together with active lymphocyte immunotherapy for habitual abortion （HA）patients.Methods A total of 139 HA outpatients with negative blocking antibodies（BA）were randomly divided into treatment group（70 cases）and control group（69 cases）.The control group was treated only with active lymphocyte immunotherapy，while the treatment group was treated with Yishen Tianjing Zhuyun Prescription and active lymphocyte immunotherapy.Results（1）After treatment，the BA-positive rate was 82.86%in the treatment group and was 60.87%in control group，and there existed significant difference between the two groups（P＜0.05）.（2）The total anti-abortion effective rate was 87.14%in the treatment group and was 66.67%in control group，the difference being significant between the two groups（P＜0.05）. Conclusion Yishen Tianjing Zhuyun Prescription combined with active lymphocyte immunotherapy is more effective than active lymphocyte immunotherapy alone for the treatment of HA patients with negative BA.

habitual abortion；blocking antibody；active lymphocyte immunotherapy；Yishen Tianjing Zhuyun Prescription；Xianqi Yizhen Capsules；Xianzi Yizhen Capsules

R714.21；R271.9

A

1007-3213（2016）05-0642-03

10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2016.05.006

2016-04-06

陳蓉（1970-），女，副主任醫師，醫學碩士；E-mail:13725499613@163.com

廣東省科技計劃項目（編號:2014807）