參麥注射液對腦梗死大鼠免疫抑制治療作用的實驗研究

方芳，盧軍鋒，王奇，馮為民

參麥注射液對腦梗死大鼠免疫抑制治療作用的實驗研究

方芳，盧軍鋒，王奇，馮為民

目的探討參麥注射液對卒中后免疫抑制的影響。方法將55只小鼠分為假手術組、對照組和給藥組。制作大鼠腦梗死模型后，給藥組動物給予腹腔注射參麥注射液，假手術組、對照組給予腹腔注射0.9%氯化鈉注射液。手術后第3天，對照組、給藥組大鼠經鼻吸入肺炎鏈球菌。連續監測大鼠體質量、肛溫。3 d后處死大鼠，留取胸腺、脾臟、肺部組織病理切片。結果與假手術組比，造模后對照組大鼠體質量、胸腺指數、脾臟指數下降，肛溫升高；給藥后，給藥組大鼠體質量、胸腺指數、脾臟指數高于對照組，肛溫則低于對照組（＜0.05）。對照組肺組織病理切片顯示肺組織內可見大量炎性細胞浸潤，而給藥組炎癥反應明顯減輕。結論參麥注射液可以增強腦梗死大鼠對細菌的免疫力，對卒中后免疫抑制有一定的治療作用。

參麥注射液；腦梗塞；大鼠；免疫抑制

腦梗死又稱缺血性卒中，中醫稱之為卒中或中風。本病發病率逐年升高，急性卒中患者約85%出現并發癥［1］，并發癥嚴重影響患者的康復，甚至導致患者死亡，而感染是增加卒中后患者致死率及致殘率的首要原因。目前有實驗室和臨床證據證實腦卒中后免疫抑制可能是導致腦卒中后感染的主要原因［2］。參麥注射液是由人參、麥冬兩味藥物提取精制而成，具有大補元氣、益氣固脫、養陰生津之功效，在臨床上廣泛應用。參麥注射液能夠提高機體對各種物理、化學、生物等不良影響的耐受能力，增強機體的抵抗力和對環境的適應能力。本研究探討參麥注射液對卒中后免疫抑制的治療作用，報道如下。

1　資料與方法

1.1材料采用SPF級SD雄性大鼠55只（由浙江中醫藥大學動物房提供），體質量280～350 g，年齡9～13周。將55只小鼠置于20℃、自然光線、明暗交替環境下飼養，適應1周。分為假手術組15只，對照組20只，給藥組20只。

1.2方法

1.2.1模型制作 （1）采用羊血普通瓊脂培養基培養肺炎鏈球菌，液體培養基擴大培養，收獲后0.5%苯酚殺菌后置4℃備用。（2）腦梗死動物模型制作。采用線栓法阻塞大鼠大腦中動脈制作大鼠腦梗死模型。手術前常規禁食、消毒，采用水合氯醛（350 mg/kg）腹腔注射麻醉，在手術顯微鏡下實施大鼠大腦中動脈栓塞模型手術［3-4］。麻醉后約10 min，固定大鼠，去毛、碘伏消毒；在頸部正中作1.5cm切口，上自頸部與下頜反折處，下自胸骨角；從胸鎖乳突肌和頸前肌群之間向深部分離，顯露頸動脈鞘，充分游離右側頸總動脈、頸外動脈和頸內動脈；分別用6-0絲線結扎頸外動脈（ECA）根部和頸總動脈（CCA）離分叉8 mm處，頸內動脈（ICA）和CCA套線，壓閉ICA阻斷血流以控制剪開CCA后血液反流；于CCA離分叉約5 mm處剪一小口，置入尼龍栓線至ICA套線處，單結輕微結扎CCA套線，將助栓線沿ICA方向插入1.8 cm；導線放置2h后拔出，清理縫合切口。假手術組僅分離出頸動脈，然后即縫合切口。將大鼠放回鼠籠，自由飲食。

1.2.2給藥方法線栓阻塞大腦中動脈開始后即給予各組大鼠腹腔注射左氧氟沙星針100 mg/kg，每2小時1次，總6次。給藥組動物于手術后同時給予腹腔注射參麥注射液10 ml/kg，連續6 d，每天2次；對照組、假手術組于術后同時給予腹腔注射0.9%氯化鈉注射液10ml/kg，連續6 d，每天2次。在實驗過程中，每天按時喂藥，同時給予飼料，并定時觀察、記錄小鼠的體質量、肛溫。

1.2.3鏈球菌肺炎模型制作［5］手術后第3天，將3組大鼠模型采用10%水合氯醛（350mg/kg）腹腔注射麻醉，然后對照組、給藥組經鼻腔滴入20 l肺炎鏈球菌懸浮液，假手術組鼻腔滴入20 l滅菌蒸餾水，同時保持大鼠口腔閉合，并且固定頭部向上保持直立位15min，以確保最大程度的吸入鏈球菌。完成后正常喂養，并定時觀察、記錄小鼠的體質量、肛溫。

1.2.4標本采集與處理大鼠感染模型制作3 d后，使用10%水合氯醛（350 mg/kg）腹腔注射麻醉，在無菌條件下，使用70%酒精將大鼠清洗消毒。斷頭取血，將血液連續稀釋后放置于血液瓊脂培養皿中培養。并立即摘取胸腺和脾臟，稱重后將血液離心取上清液，－70℃保存待測。將大鼠胸廓切開，取出部分肺組織，加無菌磷酸鹽緩沖溶液研杵搗碎，將肺組織混懸液鋪于血液瓊脂培養皿中，放置于37℃，含5%CO2和20%O2的N2中培養12 h后計數肺炎鏈球菌菌落。將肺組織浸沾多聚甲醛后在4℃環境下放置48 h，然后使用石蠟固定。切片機切成10 l，用蘇木精和伊紅染色。

1.3檢測指標 （1）體質量和體溫：各組動物在造模、用藥過程中對體質量、體溫進行連續觀察。（2）胸腺、脾臟臟器指數：各組動物胸腺、脾臟用電子天平稱重，除以其相應體質量即得每只小鼠胸腺、脾臟指數。（3）肺組織切片：由2名未知實驗研究分組的研究人員評估并選擇每個動物肺組織切片20張，采用HE染色法進行染色。參照以下病理組織學標準對切片進行評估：肺泡擴張，肺泡壁增厚，血管周圍組織實變，細支氣管周圍水腫，肺泡內和周圍白細胞浸潤。

1.4統計方法應用SPSS 16.0統計軟件進行分析，采用 檢驗進行組間比較，＜0.05差異有統計學意義。

2　結果

2.1大鼠體質量情況3組大鼠在肺炎模型造模前體質量差異無統計學意義；造模后，對照組大鼠體質量呈明顯下降趨勢，造模第4、5、6天其體質量顯著低于假手術組（均＜0.05）。給藥組肺炎模型造模后體重變化不明顯，造模第4、5、6天其體質量顯著高于對照組（均＜0.05）。見表1。

2.2大鼠肛溫情況3組大鼠在肺炎模型造模前體溫差異無統計學意義；造模后，對照組體溫上升，造模后第4、5、6天其體溫顯著高于假手術組（均＜0.05）。給藥組肺炎模型造模后體溫變化不明顯，術后第4、5、6天其體溫顯著低于對照組（均＜0.05）。見表2。

2.3大鼠臟器指數情況與假手術組相比，對照組大鼠胸腺指數和脾臟指數均低（均＜0.05）；給藥組大鼠胸腺指數和脾臟指數低于對照組（均＜0.05）。見表3。

表1　各組間大鼠體質量　g

表2　大鼠肛溫　℃

表3　大鼠臟器指數　mg/g

2.4肺組織切片假手術組：肺組織結構正常，肺泡形態清晰，氣道、血管及肺泡間隔有輕度炎癥反應。對照組：肺泡壁增厚，血管、氣道和肺泡間隔可見大量炎細胞浸潤（中性粒細胞、嗜酸細胞和淋巴細胞）。給藥組：炎細胞浸潤主要存在于氣道和血管周邊，肺泡間隔周邊有較少炎細胞浸潤，相對模型組，炎癥反應明顯減輕（較假手術組重）。見封二彩圖1。

3　討論

近年來，人們認識到腦卒中是一種能夠引起多系統受累的疾病，神經系統和免疫系統是互相調節、保持機體平衡的兩大系統。神經系統對輸入的免疫信號進行加工后主要通過三條信號通路輸出，影響外周的免疫活動［6-7］。腦卒中干擾了兩系統之間的正常聯絡，導致卒中誘導的炎癥及卒中誘導的免疫抑制。

本研究顯示，腦梗死大鼠在吸入肺炎鏈球菌后，對照組和給藥組均出現體溫升高的炎癥反應，而對照組大鼠體溫增加更加明顯，且持續時間較長。并且，對照組大鼠體質量也出現顯著降低，考慮與對照組大鼠炎癥反應明顯，機體消耗較大有關。提示在給予參麥注射液治療后，大鼠對炎癥反應的抵抗力較對照組有所提升。

胸腺和脾臟是重要的免疫器官，其臟器指數可在一定程度上反映機體免疫功能的強弱。本研究顯示，腦梗死后大鼠胸腺、脾臟指數等降低，從側面提示卒中后大鼠的免疫功能出現了抑制的表現；而給藥組相比于對照組胸腺、脾臟指數提升，說明參麥注射液表現出了免疫促進作用。

綜上所述，參麥注射液對大腦中動脈阻塞大鼠的免疫抑制具有一定的治療作用，可以減輕卒中后肺炎的發病程度。本實驗未觀察到死亡率，以及炎癥介質和炎癥因子改變情況，可在進一步實驗中進行研究。在臨床腦梗死患者的治療中，可根據患者的辨證分型考慮給予參麥注射液治療。

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10.3969/j.issn.1671-0800.2016.04.021

R743

A

1671-0800（2016）04-0458-02

2015-12-21

（本文編輯：孫海兒）

浙江省醫學會臨床科研基金（2013ZYC-A47）

310007杭州，杭州市中醫院

方芳，Email:2534475481@ qq.com