畬藥擱公扭根的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

王偉影，毛菊華

(麗水市食品藥品檢驗(yàn)所，浙江 麗水 323000)

畬藥擱公扭根的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

王偉影，毛菊華*

(麗水市食品藥品檢驗(yàn)所，浙江 麗水 323000)

目的：完善畬藥“擱公扭根”的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：運(yùn)用顯微鑒別法、高效液相色譜法分別對(duì)擱公扭根的粉末顯微特征、指標(biāo)性成分(沒食子酸)進(jìn)行測定；參照《中華人民共和國藥典》2010版附錄相關(guān)方法對(duì)擱公扭根水分、總灰分和醇溶性浸出物進(jìn)行測定。結(jié)果：擱公扭根粉末顯微特征明顯；沒食子酸的線性范圍為3.881～38.81 μg·mL-1(r=0.999 7)，平均加樣回收率為99.47%(n=6)，RSD=1.22%。14批擱公扭根樣品的測定結(jié)果表明，沒食子酸的含量為0.28%～1.46%，水分、總灰分和醇溶性浸出物分別為5.0%～10.2%、1.4%～3.6%和14.4%～41.8%。結(jié)論：研究所得方法簡便、準(zhǔn)確，可用于擱公扭根的質(zhì)量控制。

畬藥；擱公扭根；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；沒食子酸；高效液相色譜法

畬藥擱公扭根為薔薇科植物掌葉覆盆子RubuschingiiHu的干燥根及根莖[1]，主要分布于浙江、江蘇、安徽、江西和福建等華東地區(qū)，多生長于低海拔至中海拔的林緣、山坡、灌叢、路邊和溝邊等土壤較濕潤地段。畬醫(yī)常以掌葉覆盆子根入藥，名為“擱公扭根”，認(rèn)為其可祛風(fēng)止痛、明目退翳、和胃止嘔，主要用于結(jié)核性瘺管，結(jié)核病所致的脊柱壓迫癥等，在畬醫(yī)中應(yīng)用較為廣泛[1-2]。《浙江省中藥炮制規(guī)范》2005年版以畬藥名“擱公扭根”收載該品種，但無具體檢驗(yàn)項(xiàng)目[3]。筆者從鑒別(粉末顯微特征)、檢查(水分、總灰分)、含量測定(高效液相色譜)方面系統(tǒng)地研究擱公扭根的質(zhì)控方法，以期收入新版《浙江省炮制規(guī)范》，有效評(píng)價(jià)擱公扭根的質(zhì)量。

1 儀器與材料

1.1 儀器

OLYMPUS系統(tǒng)顯微鏡(奧林巴斯公司)；Memmert UNE400自然對(duì)流烘箱(德國Memmert有限公司)；程控箱式電爐SXL-1008(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；Agilent 1260高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；二極管陣列檢測器(美國安捷倫公司)；Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)(美國安捷倫公司)；XS105DU電子天平(瑞士梅特勒公司)；水浴鍋(上海梅香儀器公司)。

1.2 試藥

沒食子酸對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110831-200803，含量：90.1%)；乙腈和磷酸為色譜純(Merck)，水為娃哈哈純凈水。

擱公扭根藥材：自行采集4批樣品，經(jīng)本所李水福主任中藥師鑒定為薔薇科植物掌葉覆盆子RubuschingiiHu的根及根莖，干燥，分別粉碎，過二號(hào)篩，備用。樣品信息見表1。

表1 擱公扭根藥材樣品信息

2 方法與結(jié)果

2.1 顯微鑒別

2.1.1 方法 取適量藥材粉末過五號(hào)篩后按粉末制片法制作粉末片，在顯微鏡下觀察和照相。

2.1.2 結(jié)果 本品粉末黃白色至淺棕色。淀粉粒甚多，單粒類球形、三角狀卵形或不規(guī)則形，直徑 3～18 μm，臍點(diǎn)點(diǎn)狀、裂縫狀或人字狀；復(fù)粒2～8分粒組成。石細(xì)胞單個(gè)或成群散在，類方形、類圓形或長橢圓形。具緣紋孔導(dǎo)管散在。纖維較多，有的含黑色分泌物。木栓細(xì)胞長方形，壁呈連珠狀增厚。見圖1。

注：1.淀粉粒；2.木栓細(xì)胞；3.緣紋孔導(dǎo)管；4.石細(xì)胞；5.纖維。圖1 擱公扭根藥材顯微鑒別圖

2.2 檢查

2.2.1 水分的測定 取各批次擱公扭根2～4 g，平行2份，各精密稱定，照《中華人民共和國藥典》(《中國藥典》)2010年版一部附錄ⅨH 水分測定第一法進(jìn)行測定。結(jié)果見表2。

2.2.2 總灰分的測定 取各批次擱公扭根2 g，平行2份，各精密稱定，照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅨK 總灰分測定法進(jìn)行測定。結(jié)果見表2。

2.3 浸出物的測定

取各批次擱公扭根2～4 g，平行2份，各精密稱定，以50%乙醇為溶劑，照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅨA醇溶性浸出物測定法項(xiàng)下的熱浸法測定。結(jié)果見表2。

表2 擱公扭根藥材水分、總灰分、浸出物檢查結(jié)果

2.4 含量測定(高效液相色譜法)

2.4.1 色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱為Agilent SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)(美國安捷倫公司)；甲醇-0.4%磷酸(5∶95)為流動(dòng)相，流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；檢測波長：273 nm；自動(dòng)進(jìn)樣，進(jìn)樣量均為5 μL，理論板數(shù)按沒食子酸計(jì)不低于3000。對(duì)照品溶液和供試品溶液的色譜圖見圖2。在該色譜條件下，沒食子酸與其他成分無干擾，理論塔板數(shù)均在5000以上，具有良好的分離效果。

注：A.沒食子酸對(duì)照品；B.供試品。圖2 擱公扭根藥材及對(duì)照品HPLC圖

2.4.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸對(duì)照品適量，加甲醇制成38.81 μg·mL-1(折算后)的溶液，作為儲(chǔ)備液。

2.4.3 供試品溶液的制備 取樣品粉末約0.3 g，精密稱定，精密加入4.2%鹽酸溶液50 mL，稱定重量，加熱回流提取3 h，取出放冷，以4.2%鹽酸溶液補(bǔ)足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液2 mL置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，濾液即為供試品溶液。

2.4.4 線性關(guān)系考察 精密吸取上述儲(chǔ)備液適量，分別制成沒食子酸質(zhì)量濃度為3.881、7.762、15.52、23.29、31.05、38.81 μg·mL-1的對(duì)照品溶液，各精密吸取5 μL，按2.4.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，以峰面積(Y)對(duì)濃度(X)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為Y=17.5478X-4.934 4(r=0.999 7)，表明沒食子酸在3.881～38.81 μg·mL-1與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4.5 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，按2.4.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，計(jì)算沒食子酸峰面積的RSD=1.04%(n=5)，結(jié)果顯示精密度良好。

2.4.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批擱公扭根(編號(hào)：GGNG-1)，共6份，照2.4.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.4.1項(xiàng)下色譜條件測定，計(jì)算沒食子酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.68%，RSD=1.40%(n=6)。

2.4.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取2.4.6項(xiàng)下供試品溶液，分別在0、4、8、12、24 h時(shí)進(jìn)樣測定，結(jié)果沒食子酸峰面積的RSD=0.37%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的擱公扭根(編號(hào)：GGNG-1)6份，各約0.15 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入沒食子酸對(duì)照品溶液(1.015 6 mg·mL-1)1.0 mL，再分別精密加入甲醇49.0 mL，按2.4.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.4.1項(xiàng)下色譜條件測定，計(jì)算擱公扭根的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。

表3 擱公扭根中沒食子酸加樣回收率試驗(yàn)(n=6)

注：沒食子酸對(duì)照品加入量均為1.015 6 mg。

2.4.9 樣品含量測定 取不同編號(hào)的擱公扭根，平行2份，按2.4.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.4.1項(xiàng)下色譜條件測定，按干燥品計(jì)算沒食子酸的含量，結(jié)果見表4。

表4 擱公扭根中沒食子酸的含量測定(n=2)

3 討論

3.1 浸出物的測定

擱公扭根中含黃酮苷、萜類及有機(jī)酸類物質(zhì)，極性相對(duì)較大，筆者考察了甲醇(純甲醇，70%甲醇、50%甲醇水溶液)、乙醇(95%乙醇、70%乙醇、50%乙醇水溶液)等溶劑系統(tǒng)，結(jié)果顯示以50%乙醇為溶劑，熱浸法提取所得浸出物含量最高。

3.2 含量測定

經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)華東覆盆子根中含有大量的沒食子酸，現(xiàn)代藥理研究表明，沒食子酸具有抗炎、抗氧化、抑菌、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等功能[4]。筆者以沒食子酸含量為指標(biāo)，在參考有關(guān)資料[5-7]基礎(chǔ)上考察了超聲和加熱回流兩種提取方法，發(fā)現(xiàn)回流提取得到的沒食子酸含量較高，故筆者采用加熱回流提取法。在加熱回流的基礎(chǔ)上，考察了50%甲醇、70%乙醇和3%鹽酸等水溶液對(duì)沒食子酸的提取能力，結(jié)果顯示3%鹽酸水溶液提取的沒食子酸含量最高。在選取鹽酸水溶液為提取溶劑的基礎(chǔ)上，考察鹽酸水溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(4.2%、6.4%、8.5%)、用量(25、50、80 mL)、以及提取時(shí)間(1、2、3 h)對(duì)測定結(jié)果的影響，根據(jù)結(jié)果選擇以4.2%鹽酸水溶液50 mL、加熱回流3 h為樣品提取方法。

3.3 限度標(biāo)準(zhǔn)制定建議

實(shí)驗(yàn)收集不同產(chǎn)地不同采收時(shí)間的擱公扭根共14批，樣品有一定的代表性，水分、總灰分、浸出物、含量測定的結(jié)果分別為5.0%～10.2%、1.4%～3.6%、14.4%～41.8%和0.28%～1.46%。根據(jù)測定結(jié)果，結(jié)合《中國藥典》中已有的同類藥材的標(biāo)準(zhǔn)、《中國藥典》附錄藥材和飲片檢定通則及國家藥品標(biāo)準(zhǔn)(中藥)研究制定技術(shù)要求，建議規(guī)定擱公扭根的水分不得多于12.0%；總灰分不得多于4.0%；以干燥品計(jì)算醇溶性浸出物不得少于15.0%；以干燥品計(jì)算沒食子酸不得少于0.40%。

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[3] 浙江省食品藥品監(jiān)督管理局.浙江省中藥炮制規(guī)范[S].北京：科學(xué)技術(shù)出版社，2005：353.

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StudyonQualityStandardofTraditionalSheMedicine"Gegongniugen"

WANGWeiying，MAOJuhua*

(LishuiInstituteforFoodandDrugControl，Lishui323000，China)

Objective：To improve the quality standard of traditional she medicine—Ge gongniugen.Methods：The microscopical characteristics were identified by microscopical method，and index ingredient (Gallic acid) were determined by HPLC.The water content，total ash and ethanol-soluble extractives were determined according to the method in appendix of "pharmacopoeia of people’s republic of china".Results：Characteristics of microscopical identification of Ge gongniugen were obviously.A good linearity of psoralen was at 3.881～38.81 μg·mL-1(r=0.999 7)，and the average recovery rate was 99.47% (n=6)，RSD=1.22%.The content of gallic acid in 14 batches of Ge gongniugen was in the range of 0.28%-1.46%.The results of water content，total ash and ethanol-soluble extractives were in the range of 5.0%-10.2%，1.4%-3.6% and 14.4%-41.8%，respectively.Conclusion：This method is simple，accurate，applicable for the quality control of Ge gongniugen.

Traditional She medicine；Ge gongniugen；quality standard；gallic acid；HPLC

2015-06-29)

麗水市科技局項(xiàng)目(2012CXTD09-05)；麗水市科技局項(xiàng)目(2012CXTD11-03)；麗水市科技局項(xiàng)目(2014JYZB04)

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毛菊華，主管中藥師，碩士，研究方向：中藥與天然藥物活性成分質(zhì)量評(píng)價(jià)與研究；E-mail：maomaotou198712@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.5.011