益膚丸的薄層色譜鑒別

刁娟娟，李小玲，李新霞*

(1.新疆醫科大學 中心實驗室分析測試中心，新疆 烏魯木齊 830011；2.新疆醫科大學第二附屬醫院 藥劑科，新疆 烏魯木齊 830028)

·中藥工業·

益膚丸的薄層色譜鑒別

刁娟娟1，李小玲2，李新霞1*

(1.新疆醫科大學 中心實驗室分析測試中心，新疆 烏魯木齊 830011；2.新疆醫科大學第二附屬醫院 藥劑科，新疆 烏魯木齊 830028)

目的：建立益膚丸的薄層色譜鑒別方法。方法：采用薄層色譜法，分別以對照品或對照藥材為對照，對益膚丸中黨參、炒白術、白花蛇舌草、柴胡、苦參、黃柏、羌活、獨活、白芍、當歸十味藥材進行定性鑒別。結果：供試品色譜分離度好、斑點清晰，在對照品或對照藥材對應位置上顯相同顏色的斑點。結論：該方法簡便、重復性好、專屬性強，可用于益膚丸的質量控制。

益膚丸；薄層色譜鑒別

益膚丸是新疆昌吉州中醫院臨床常用經驗方劑，是由黨參、炒白術、白花蛇舌草、柴胡、苦參、黃柏、羌活、獨活、白芍、當歸十六味中藥經粉碎，再加煉蜜制成的小蜜丸，具有健脾化濕、活血潤膚、止癢的功能，主要用于治療慢性濕疹、銀屑病、神經性皮炎、皮膚瘙癢等癥。為有效控制該制劑質量，本文采用薄層色譜法對制劑中黨參、炒白術等十味中藥材進行鑒別，為益膚丸質量標準的建立提供參考。

1 儀器與試藥

LINOMAT 5半自動點樣儀、REPROSTAR 3薄層色譜數碼成像系統(CAMAG) ；KQ-500DE數控超聲波清洗器(40 kHZ，昆山市超聲儀器有限公司)；HH-S4數顯恒溫水浴鍋(金壇市醫療儀器廠)；AB135-S分析天平(METTLER TOLEDO)；硅膠G高效板(青島海洋化工廠)。

蛇床子素對照品、二氫歐山芹醇當歸酸酯對照品、苦參堿對照品、芍藥苷對照品、黨參對照藥材、白術對照藥材、白花蛇舌草對照藥材、柴胡對照藥材、苦參對照藥材、白芍對照藥材、當歸對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號分別為110822-201308，111583-201304，0805-200005，110736-201337，121057-201206，0925-9804，121183-201003，120992-201108，121019-201006，120905-201109，120927-201315)；異歐前胡素對照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批號：A0012)；鹽酸小檗堿對照品(上海源葉生物科技有限公司，批號：20130911)；益膚丸(昌吉回族自治州中醫醫院，批號分別為20140201，20140202，20140301)；黨參、炒白術、薏苡仁、土茯苓、苦參、白芍(新疆奇康哈博維藥有限公司)；茯苓、白鮮皮、白花蛇舌草、柴胡、關黃柏、羌活、獨活、生地黃、丹參、當歸(新疆本草堂中藥飲片有限公司)；甲醇、乙酸乙酯、甲苯等試劑均為分析純；水為蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 黨參的TLC鑒別

取益膚丸10 g，剪碎，加硅藻土5 g，研勻，加無水乙醇60 mL，超聲處理45 min，濾過，濾液蒸干。殘渣加水20 mL使溶解，濾過，濾液用乙酸乙酯20 mL萃取，棄去乙酸乙酯液，水層加鹽酸1 mL，加熱回流30 min，放冷，用三氯甲烷振搖提取3次，每次20 mL，合并三氯甲烷提取液，回收溶劑至干。殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺黨參的陰性樣品10 g，同法制成黨參陰性對照溶液。另取黨參對照藥材2 g，加水50 mL，煮沸30 min，濾過，濾液加鹽酸2 mL，加熱回流30 min，放冷，用三氯甲烷振搖萃取3次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇2 mL溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2015年版通則0502)試驗，吸取上述3種溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮(6∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以50%硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜圖中，在與對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色斑點，陰性對照無干擾，見圖1。

注：1.黨參對照藥材；2.黨參陰性對照；3.供試品201402014；供試品201402025；供試品20140301。圖1 黨參的TLC鑒別

2.2 炒白術的TLC鑒別

取益膚丸10 g，剪碎，加硅藻土5 g，研勻，加甲醇50 mL，超聲處理45 min，濾過，濾液蒸干，加水15 mL使溶解，加石油醚(30～60 ℃)振搖提取2次，每次15 mL，合并石油醚，揮干溶劑，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺炒白術的陰性樣品10 g，同法制成炒白術陰性對照溶液。另取炒白術對照藥材1.5 g，加水40 mL，煎煮30 min，放冷，濾過，濾液加石油醚(30～60 ℃)振搖提取2次，每次15 mL，合并石油醚，揮干溶劑，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2015年版通則0502)試驗，吸取上述3種溶液各6 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯(6∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以50%硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜圖中，在與對照藥材色譜相應位置上，紫外光(366 nm)下顯相同顏色熒光斑點，見圖2。

注：1、6.炒白術對照藥材；2～3.炒白術陰性對照；4～5.供試品20140201。圖2 炒白術的TLC鑒別

2.3 白花蛇舌草的TLC鑒別

取益膚丸10 g，剪碎，加硅藻土5 g，研勻，加甲醇50 mL，超聲處理45 min，濾過，濾液蒸干，加乙醇20 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液濃縮至2 mL，加水5 mL、鹽酸0.5 mL，加石油醚(60～90 ℃)振搖提取2次，每次8 mL，合并石油醚，揮干溶劑，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺白花蛇舌草的陰性樣品10 g，同法制成白花蛇舌草陰性對照溶液。另取白花蛇舌草對照藥材1 g，分別加水30 mL，煎煮30 min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇15 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液濃縮至2 mL，加水5 mL、鹽酸0.5 mL，用石油醚(60～90 ℃)振搖提取2次，每次8 mL，合并石油醚，蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2015年版通則0502)試驗，吸取供試品和陰性樣品溶液各2 μL，對照藥材溶液4 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙醇-濃氨水(7.5∶7.5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以50%硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜圖中，在與對照藥材色譜相應位置上，紫外光(366 nm)下顯相同的顏色熒光斑點，見圖3。

注：1、12.白花蛇舌草對照藥材；2～3.白花蛇舌草藥材溶液；4～5.白花蛇舌草陰性對照；6～7.供試品20140201；8～9.供試品20140202；10～11.供試品20140301。圖3 白花蛇舌草的TLC鑒別

2.4 柴胡的TLC鑒別

取制劑10 g，剪碎，加5 g硅藻土，研勻，加甲醇50 mL，超聲處理45 min，濾過，濾液蒸干，加水10 mL，用水飽和的正丁醇液提取3次，每次10 mL，合并正丁醇液，蒸干，加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺柴胡的陰性樣品10 g，同法制成柴胡陰性對照溶液。另取柴胡對照藥材1 g，加甲醇30 mL，超聲處理45 min，濾過，濾液濃縮成5 mL，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2015年版通則0502)試驗，吸取上述3種溶液各4 μL，分別點于同一硅膠G薄層板，以乙酸乙酯-乙醇-水(8∶2∶1)為展開條件，展開，取出，晾干，噴以2%對二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在60 ℃加熱至斑點顯示清晰，供試品色譜圖中，在與藥材色譜相應位置上，紫外燈(254 nm)下顯相同的黃色斑點，陰性對照無干擾，見圖4。

注：1、6.柴胡對照藥材；2.柴胡陰性對照；3.供試品20140201；4.供試品20140202；5.供試品20140301。圖4 柴胡的TLC鑒別

2.5 苦參的TLC鑒別

取益膚丸10 g，剪碎，加硅藻土5 g，研勻，加三氯甲烷60 mL、濃氨試液0.8 mL，超聲處理45 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺苦參的陰性樣品10 g，同法制成苦參陰性對照溶液。另取苦參對照藥材1 g，分別加三氯甲烷20 mL、濃氨試液0.4 mL，超聲處理45 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作為對照藥材溶液。另取苦參堿對照品，加乙醇制成質量濃度為1 mg·mL-1的對照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2015年版通則0502)試驗，吸取上述溶液各6 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-甲醇(8∶3∶0.5)為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀溶試液。供試品色譜圖中，在與對照藥材和對照品色譜相應位置上，白光下顯相同顏色斑點，見圖5。

注：1.苦參堿對照品；2.苦參對照藥材；3.苦參藥材溶液；4.苦參陰性對照；5.供試品20140201；6.供試品20140202；7.供試品20140301。圖5 苦參的TLC鑒別

2.6 黃柏的TLC鑒別

取益膚丸1 g，剪碎，加硅藻土0.5 g，研勻，加甲醇20 mL，超聲處理45 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺黃柏的陰性樣品5 g，加甲醇50 mL，同法制成黃柏陰性對照溶液。另取黃柏藥材0.5 g，同法制成黃柏藥材溶液。另取小檗堿對照品，加甲醇制成質量濃度為0.3 mg·mL-1的對照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2015年版通則0502)試驗，吸取上述溶液各3 μL，分別點于同一硅膠G薄層板，以甲苯-異丙醇-乙酸乙酯-甲醇-濃氨水(6∶1.5∶3∶1.5∶0.5)為展開劑，置氨蒸氣預飽和的展開缸內，展開，取出，晾干。供試品色譜圖中，在與對照品色譜相應位置上，紫外燈(366 nm)下顯相同的顏色熒光斑點，見圖6。

注：1.小檗堿對照品；2.黃柏樣品溶液；3、7.黃柏陰性對照；4.供試品20140201；5.供試品20140202；6.供試品20140301。圖6 黃柏的TLC鑒別

2.7 羌活的TLC鑒別

取制劑20 g，剪碎，加10 g硅藻土，研勻，加石油醚(60～90 ℃)80 mL提取，超聲處理45 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺羌活的陰性樣品20 g，同法制成羌活陰性對照溶液。另取羌活藥材1 g，加石油醚(60～90 ℃)25 mL，超聲處理45 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作為羌活藥材溶液。另取異歐前胡素對照品1.5 mg，加甲醇制成質量濃度為1.5 mg·mL-1的對照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2015年版通則0502)試驗，吸取上述溶液各4 μL，分別點于同一硅膠G薄層板，以環己烷-乙酸乙酯(6∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜圖中，在與對照品斑點相應位置上，紫外光(254 nm)下顯相同的顏色熒光斑點，見圖7。

注：1.異歐前胡素對照品；2.羌活樣品溶液；3.羌活陰性對照；4.供試品2014020；5.供試品20140202；6.供試品20140301。圖7 羌活的TLC鑒別

2.8 獨活的TLC鑒別

取益膚丸10 g，剪碎，加硅藻土5 g，研細，加甲醇60 mL，超聲處理45 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇4 mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺獨活的陰性樣品5 g，同法制成獨活陰性對照溶液。另取獨活藥材0.5 g，加甲醇20 mL，超聲處理45 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇4 mL使溶解，作為獨活藥材溶液。另取二氫歐山芹醇當歸酸酯對照品，加甲醇制成質量濃度為0.3 mg·mL-1的對照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2015年版通則0502)試驗，吸取上述溶液各3 μL，分別點于同一硅膠G薄層板，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(7∶3)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜圖中，在與對照品色譜相應位置上，紫外燈(366 nm)下顯相同的藍色熒光斑點，見圖8。

注：1、7.二氫歐芹醇當歸酸酯對照品；2.獨活藥材溶液；3.獨活陰性對照；4.供試品20140201；5.供試品20140202；6供試品20140301。圖8 獨活的TLC鑒別

2.9 白芍的TLC鑒別

取益膚丸10 g，剪碎，加硅藻土5 g，研勻，加乙醇60 mL，超聲處理45 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水15 mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次10 mL，合并正丁醇液，用水洗3次，每次10 mL，正丁醇液蒸干，殘渣加乙醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺白芍的陰性樣品10 g，同法制成白芍陰性對照溶液。另取白芍對照藥材0.5 g，加乙醇20 mL，超聲處理45 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水15 mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次10 mL，合并正丁醇液，用水洗3次，每次10 mL，正丁醇液蒸干，殘渣加乙醇2 mL使溶解，作為白芍對照藥材溶液。另取芍藥苷對照品，加乙醇制成質量濃度為1 mg·mL-1的對照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2015年版通則0502)試驗，吸取芍藥苷對照品溶液和白芍對照藥材溶液各2 μL，供試品溶液和陰性對照溶液8 μL分別點于同一硅膠G薄層板，以三氯甲烷-甲醇(6∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜圖中，在與對照品和對照藥材色譜相應位置上，白光下顯相同顏色斑點，見圖9。

注：1.芍藥苷對照品；2、3.白芍對照藥材；4.白芍陰性對照；5.供試品20140201；6.供試品20140202；7.供試品20140301。圖9 白芍的TLC鑒別

2.10 當歸的TLC鑒別

取益膚丸15 g，剪碎，加7.5 g硅藻土，研勻，加石油醚(60～90 ℃)70 mL提取，超聲處理45 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺當歸的陰性樣品15 g，同法制成當歸陰性對照溶液。另取當歸對照藥材0.5 g，分別加石油醚(60～90 ℃)20 mL提取，超聲處理45 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作為當歸對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2015年版通則0502)試驗，吸取上述溶液各4 μL，分別點于同一硅膠G薄層板，以環己烷-乙酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜圖中，在與對照藥材色譜相應位置上，紫外光(366 nm)下顯相同的顏色熒光斑點，見圖10。

注：1～2.當歸對照藥材；3.當歸陰性對照；4～5.供試品20140201；6～7.供試品20140202；8～9.供試品20140301。圖10 當歸的TLC鑒別

3 討論

對于黨參的鑒別曾按照《中華人民共和國藥典》2015版一部收載的黨參藥材鑒別方法，以黨參炔苷為對照進行鑒別[1]，陰性存在干擾。后改用強脊丸黨參鑒別的樣品前處理方法[2]，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶5∶2)、三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(10∶2∶0.5)等為展開劑，陰性均有干擾。參考寧心補腎丸黨參鑒別條件[3]，經調整甲苯-丙酮(6∶1)為最佳展開條件，該條件下，斑點清晰，分離效果好，Rf值適中，陰性無干擾。

炒白術的鑒別按照《中華人民共和國藥典》2015版一部收載的白術藥材鑒別方法，以蒼術酮為對照，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(50∶1)為展開劑，供試品色譜中未見對照品斑點。后改用健脾生血片中炒白術鑒別的樣品前處理方法，以三氯甲烷-丙酮(19∶1)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶2∶0.2)等為展開劑，陰性均有干擾。參考玉屏風顆粒中炒白術的鑒別條件，經調整展開劑為環己烷-乙酸乙酯(6∶1)，并在低溫環境下展開，該條件下，斑點清晰，分離效果好，陰性無干擾。

益膚丸是每100 g藥材粉末加120 g煉蜜制成，煉蜜中的糖分對鑒別的影響較大，因此，鑒別柴胡時，在供試品和陰性溶液的前處理中，采用正丁醇萃取，以減少糖分的干擾。

黃柏的鑒別采用《中華人民共和國藥典》2010版[4]一部收載的黃柏藥材的鑒別方法，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)的上層液為展開條件，色譜中斑點清晰，陰性無干擾，但展開時間較長。后采用鎖陽固經丸中黃柏的鑒別條件，以甲苯-異丙醇-乙酸乙酯-甲醇-濃氨水(6∶1.5∶3∶1.5∶0.5)為展開劑，置氨蒸氣預飽和的展開缸內展開，展開時間縮短，且色譜中斑點清晰，分離度好，陰性無干擾。

羌活的鑒別采用安泰巴布劑中羌活的鑒別方法，進行樣品前處理[4]，其中改用石油醚(60～90 ℃)代替乙醚提取，以三氯甲烷-乙酸乙酯(8∶2)為展開條件，陰性有干擾，經探索選定展開劑為環己烷-乙酸乙酯(6∶1)，斑點清晰，分離效果好，陰性無干擾。

白芍的鑒別試圖按照《中華人民共和國藥典》2015版一部收載的白芍藥材鑒別方法進行鑒別，陰性存在干擾。后采用八珍丸中白芍鑒別的樣品前處理方法，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.5)、三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨水(8∶1∶4∶1)等為展開劑，陰性均有干擾。后參考定坤丹中白芍鑒別條件，以三氯甲烷-甲醇(6∶1)為展開劑，該條件下，斑點清晰，分離效果好，Rf值適中，陰性無干擾。

當歸的鑒別采用《中華人民共和國藥典》2010版一部收載的當歸藥材的鑒別方法，其中改用石油醚(60～90 ℃)代替乙醚提取，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(8∶2)為展開劑，陰性有干擾。后采用歸脾丸中當歸的鑒別條件，以環己烷-乙酸乙酯(9∶1)為展開劑，斑點清晰，分離效果好，陰性無干擾。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015.

[2] 潘曉麗，張旭，彭騰，等.強脊丸質量標準研究[J].黑龍江醫藥，2009，22(5)：615-618.

[3] 蒙雙鵬，謝琳，郭鐘慧.寧心補腎丸質量標準研究[J].現代食品與藥品雜志，2007，17(5)：43-46.

[4] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010.

[5] 施佳平，陳土榮，袁偉彬，等.安泰巴布劑中當歸、獨活、羌活等藥味的鑒別研究[J].今日藥學，2010，20(10)：16-18.

TLCIdentificationofYifuPills

DIAO Juanjuan1，LI Xiaoling2，LI Xinxia1*

(1.AnalysisandTestingCenterofCentralLaboratory，XinjiangMedicalUniversity，Urumqi830011，China；2.PharmacyDepartmentoftheSecondAffiliatedHospital，XinjiangMedicalUniversity，Urumqi830028，China)

Objective：To establish TLC identification methods of Yifu pills.Methods：TLC was used to qualitatively identify Radix Condonopsis，Rhezoma Atractylodes (stir fried)，Herba Hedyotis Diffusae，Radix Bupleuri，Radix Sophorae Flavescentis，Cortex Phellodendri，Rhizoma et Radix Notopterygii，Radix Angelicae Pubescentis，Radix Peoniae Alba，Radix Angelicae Sinensis in Yifu Pills comparing with reference substances or control herbs.Results：The chromatograms of the test showed the same colour spots in the same position of the reference substances or the control herbs，and the spots were clear and well separated.Conclusion：This method is simple，repeatable，specific，it could be used for quality control of Yifu Pills.

Yifu Pills；TLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.10.021

2016-01-16)

*

李新霞，教授，博士生導師，研究方向：新藥開發研究；E-mail：lxx6668@163.com