HPLC測定虛燥更平濃縮丸中梓醇的含量△

趙麗，姜林，李曉瑾*

(1.新疆醫(yī)科大學(xué) 中醫(yī)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830011；2.新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所，新疆 烏魯木齊 830002)

·中藥工業(yè)·

HPLC測定虛燥更平濃縮丸中梓醇的含量△

趙麗1，2，姜林1，李曉瑾1，2*

(1.新疆醫(yī)科大學(xué) 中醫(yī)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830011；2.新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所，新疆 烏魯木齊 830002)

目的：探索建立虛燥更平濃縮丸的質(zhì)量控制方法。方法：采用HPLC法，色譜柱為Sepax HP-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液(1∶99)；體積流量為1.0 mL·min-1；檢測波長為210 nm；柱溫為30 ℃。結(jié)果：在上述條件下，梓醇進(jìn)樣量0.042 9～0.2145 mg·mL-1呈良好的線性關(guān)系，按照加入梓醇濃度低、中、高分別測得樣品加樣回收率為100.41%、99.99%、100.08%，相對應(yīng)的RSD值為0.60%、0.72%0.47%，該方法精密度、重復(fù)性均良好，RSD均小于2.0%。結(jié)論：該方法簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好，能有效測定虛造更平濃縮丸中梓醇的含量。

虛燥更平濃縮丸；梓醇；高效液相色譜法

圍絕經(jīng)期綜合征俗稱更年期綜合征，是指女性的卵巢功能逐漸衰退，雌激素水平隨之下降，出現(xiàn)以植物神經(jīng)功能紊亂為主，伴有神經(jīng)心理癥狀的一組癥候群[1-3]。中醫(yī)稱這一時期婦女的癥狀為“經(jīng)斷前后諸證”[4-5]。虛燥更平濃縮丸是新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑，本方由生地黃、桑葚、酸棗仁、羅布麻葉等六味藥材組成。其主要功能為補(bǔ)虛潤燥、平肝安神。主要用于治療由婦女圍絕經(jīng)期綜合征引起的眩暈、頭痛、失眠、烘熱汗出、煩燥易怒、口干唇燥、胸悶、心悸、耳鳴、健忘、情志異常、記憶減退、手足麻木等[6-7]。為擺脫之前散劑的缺點(diǎn)，同時也為更好地服務(wù)于患者，本課題組采用現(xiàn)代的技術(shù)和工藝，將其制成丸劑—虛燥更平濃縮丸。遵照方劑學(xué)中君臣佐使的關(guān)系，本研究以君藥生地黃中梓醇為主要評價指標(biāo)，建立高效液相色譜法監(jiān)控丸劑質(zhì)量的方法，為虛燥更平濃縮丸的質(zhì)量控制及新藥研發(fā)提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

waters e2695高效液相色譜儀、waters2998PDA檢測器；Metter AE163電子天平；KQ5200DA型超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)；UPT-Ⅱ-10型制水機(jī)(成都超純科技有限公司，編號：T060214)。

1.2 試藥

梓醇對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110808-201210，純度≥98.1%)；生地黃、桑葚、酸棗仁等藥材購自安徽亳州市中正藥材飲片有限公司(批號分別為20140206，20140208，20140301)；甲醇、乙腈為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Sepax HP-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液(1∶99)；檢測波長為210 nm；流速為1.0 mL·min-1；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。理論塔板數(shù)按梓醇峰計(jì)算不得低于2500。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的梓醇對照品4.29 mg，置于10 mL容量瓶中，加入流動相溶解并稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度為0.429 mg·mL-1的對照品儲備液。

2.3 梓醇的全波長掃描

精密吸取2.2中對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，在紫外200～400 nm進(jìn)行3D全波長掃描，得到最大吸收波長為210 nm，見圖1。

圖1 梓醇的全波長掃描

2.4 供試品溶液的制備

取虛燥更平濃縮丸，研磨(過四號篩)，精密稱取藥物粉末1.0 g置于100 mL具塞錐形瓶中，加入30 mL甲醇，精密稱定，超聲提取30 min，取出，待冷卻后，用甲醇補(bǔ)充減失的重量，搖勻，過濾。取續(xù)濾液10 mL至蒸發(fā)皿中，蒸至近干后用流動相溶解，轉(zhuǎn)溶至10 mL容量瓶內(nèi)，用流動相定容至刻度后，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，過0.45 μm濾膜，作為供試品溶液。

2.5 陰性樣品溶液的制備

取缺生地黃的處方藥材，按虛燥更平濃縮丸制備工藝制成缺生地黃的陰性樣品，按2.4方法制備陰性樣品溶液。

2.6 線性關(guān)系考察

精密吸取2.2梓醇對照品儲備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制得對照品溶液。每次取10 μL依次進(jìn)樣，測定峰面積。以梓醇對照品的質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)，色譜峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得梓醇回歸方程為Y=233 717X-4089，r=0.999 8。結(jié)果表明，梓醇在0.429～2.145 μg呈良好的線性關(guān)系。

2.7 專屬性試驗(yàn)

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按2.1色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖。見圖2。從色譜圖中可以看出，本測定條件的專屬性強(qiáng)，陰性樣品對梓醇的含量測定無干擾。

2.8 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液10 μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，計(jì)算RSD為1.25%，表明本方法精密度良好。

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液(批號：20141103)，分別在制備后0、2、4、6、8、10、12、24 h進(jìn)樣測定，測定梓醇的峰面積RSD值為1.23%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號供試品(批號：20141103)按2.4方法平行制備5份供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測定梓醇的峰面積，計(jì)算RSD為1.3%，表明本方法重復(fù)性良好。同時測得梓醇的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4.25 mg·g-1。

2.11 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的同一供試品(批號：20141103)9份，研細(xì)，混勻，分別取細(xì)粉1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，每份分別精密加入對照品稀釋液，濃度從低、中、高分別測定梓醇的含量，余下按2.4方法操作，分別吸取供試品溶液各10 μL，按2.1色譜條件測定梓醇的含量，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

注：A.梓醇對照品；B.供試品；C.陰性樣品；1.梓醇。圖2 虛燥更平濃縮丸及對照品HPLC圖

表1 梓醇加樣回收試驗(yàn)

2.12 樣品測定

取虛燥更平濃縮丸樣品5批，分別按2.4項(xiàng)下制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，每個批號平行3份，每次進(jìn)樣2次。結(jié)果見表2。

表2 虛造更平濃縮丸5批的檢測結(jié)果

3 討論

本實(shí)驗(yàn)對虛燥更平濃縮丸的樣品處理方法進(jìn)行研究，分別采用甲醇回流提取、甲醇超聲波提取等方法進(jìn)行提取，發(fā)現(xiàn)提取效果基本一致。甲醇超聲提取法的提取時間短，提取效率稍高，故選擇了甲醇超聲提取法。而續(xù)濾液蒸干轉(zhuǎn)溶的過程中發(fā)現(xiàn)，流動相溶解的效果要優(yōu)于甲醇和水，故最終采用上述方法進(jìn)行供試品制備。

梓醇是一種環(huán)烯醚萜葡萄糖苷類化合物，通過全波長掃描法我們發(fā)現(xiàn)，其最大吸收波長為210 nm，故選其為本法的檢測波長[8-9]。

本研究按照測定方法學(xué)研究的要求，對虛燥更平濃縮丸中梓醇含量測定過程中的色譜條件、線性關(guān)系、專屬性、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收率等因素條件分別進(jìn)行考察。結(jié)果表明，本方法操作方便、線性關(guān)系良好、專屬性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、重復(fù)性好、加樣回收率符合要求，可作為該制劑的含量測定方法。該方法的確立，可為虛燥更平濃縮丸的質(zhì)量控制和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供有力依據(jù)，也為其深入研究及新藥研發(fā)提供參考。

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RP-HPLCDeterminationofCatalpolinXuzaoGengpingConcentratedPill

ZHAOLi1，2，JIANGLin2，LIXiaoJin1，2*

(1.TraditionalChineseMedicineCollegeofXinjiangMedicalUniversity，Urumqi830011，China；2.XinjiangInstituteofChineseMateriaMedicaandEthicalMateriaMedica，Urumqi830002，China)

Objective：To establish a method for quality control of Xuzao Gengping concentrated pill.Methods：Catalpol was determined by using RP-HPLC with waters column of Sepax HP-C18(250 mm×4.6 mm，5μm)，acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution as mobile phase，flow rate at 1.0 mL·min-1，detection wavelength 210 nm and column temperature at 30 ℃.Results：Catalpol presented a good linear relationship at the range of 0.042 9～0.214 5 mg·mL-1，According to join catalpa alcohol concentration high，medium and low respectively measured sample average and recovery was：100.41%，99.99%，100.08%，the RSD values corresponding to：0.60%，0.72%，0.47%.Conclusion：The established method is simple，accurate，high sensitivity，good reproducible，and is suitable for effective determination of Xuzao Gengping concentrated pill.

Xuzao Gengping concentrated pill；catalpol；HPLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.4.026

2015-09-06)

“十二五”自治區(qū)科技重大專項(xiàng)(201130105)；海南省引進(jìn)集成應(yīng)用專項(xiàng)YJJC20120008

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李曉瑾，碩士生導(dǎo)師，研究員，研究方向：中藥資源；Tel：(0991)2665614，E-mail：xjlxj@126.com