不同工藝制備米黨參抗應(yīng)激反應(yīng)及質(zhì)量對(duì)比研究△

羅春麗，陳海昕，王文娟，趙致*

(1.貴州大學(xué)，貴州 貴陽(yáng) 550025；2.貴州省中藥材繁育與種植工程實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550025)

·中藥工業(yè)·

不同工藝制備米黨參抗應(yīng)激反應(yīng)及質(zhì)量對(duì)比研究△

羅春麗1，2，陳海昕1，王文娟1，趙致1，2*

(1.貴州大學(xué)，貴州 貴陽(yáng) 550025；2.貴州省中藥材繁育與種植工程實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550025)

目的：通過(guò)以米作為輔料研究不同工藝制備米黨參，對(duì)比不同炮制品抗應(yīng)激作用及指標(biāo)性成分含量差異，為探究米制黨參合理工藝提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：以鮮黨參為原料，粳米為輔料，通過(guò)不同工藝制備黨參炮制品，以抗應(yīng)激作用為參考指標(biāo)，同時(shí)結(jié)合品質(zhì)分析結(jié)果進(jìn)行比較研究。結(jié)果：以米湯炙、60 ℃烘干法炮制所得米制黨參在抗應(yīng)激作用及指標(biāo)性成分含量方面均優(yōu)于傳統(tǒng)米炒黨參。結(jié)論：米制黨參可考慮以米湯為輔料，采用炙法制備，其炮制工藝、炮制原理及輔料用量有待進(jìn)一步研究確定。

黨參；粳米；指標(biāo)性成分；抗應(yīng)激反應(yīng)

黨參為桔梗科草本植物黨參Codonopisispilosula(Franch.)Nannf、素花黨參CodonopsispilosulaNannf.var.modesta(Nannf.)L.T.Shen 或川黨參CodonopisistangshenOliv.的干燥根，具有補(bǔ)中益氣、健脾益肺之功能。主治脾肺虛弱、氣短心悸、食少便溏、虛喘咳嗽、內(nèi)熱消渴等癥。黨參主產(chǎn)于山西、甘肅、陜西、四川等省。黨參中主要含有萜類、甾醇類、酚酸類、黃酮類等物質(zhì)，具有免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞增殖及降脂等作用[1-3]。米制黨參為《中華人民共和國(guó)藥典》2010版所收載[3]，其氣變清香，能增強(qiáng)和胃、健脾止瀉作用，多用于脾胃虛弱、食少、便溏等[4]；黨參多糖能提高小鼠體力及運(yùn)動(dòng)耐力，提高小鼠抗運(yùn)動(dòng)性疲勞能力的作用，黨參多糖能降低實(shí)驗(yàn)小鼠運(yùn)動(dòng)疲勞后血清中乳酸的含量[5]；黨參多糖對(duì)羥基自由基也存在清除作用[6-9]。查閱文獻(xiàn)，相關(guān)米炒黨參炮制工藝方面的研究相對(duì)較少，采用米湯炙方法未見(jiàn)報(bào)道。筆者通過(guò)以米作為炮制輔料，重點(diǎn)對(duì)比采用固體輔料米炒與液體輔料米湯炙在抗應(yīng)激作用及指標(biāo)性成分含量上的差異，以期確定更加合理的炮制方法及工藝，提升米制黨參質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為進(jìn)一步的開(kāi)發(fā)和利用黨參提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1200型高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司)；101-4型電熱鼓風(fēng)干燥箱(北京科偉永興儀器有限公司)；TP-213型電子天平(丹佛儀器北京有限公司)；KQP-800KDE超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲波儀器有限公司)。

1.2 試藥

葡萄糖對(duì)照品、黨參炔苷對(duì)照品(中食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為110833-200503，111732-201206)；乙腈為色譜純；其余試劑均為分析純。

本實(shí)驗(yàn)所用黨參采自貴州省畢節(jié)地區(qū)威寧縣海拉鄉(xiāng)黨參栽培基地，經(jīng)貴州大學(xué)生科院趙財(cái)副教授鑒定為桔梗科植物素花黨參CodonopsispilosulaNannf.var.modesta(Nannf.)L.T.Shen；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)自重慶市，為SPF級(jí)KM小鼠，合格證號(hào)：SCXK(渝)-2012-0006。

2 方法

2.1 黨參炮制品的制備

黨參片：將鮮品先晾曬兩天，然后邊揉搓(防止皮肉分離)邊烘干，測(cè)定水分，達(dá)到中華人民共和國(guó)藥典要求后，切片密封，常溫保存。

米炒黨參：取1000 g黨參片，照《中華人民共和國(guó)藥典》2010版一部(附錄Ⅱ D)用米拌炒至表面深黃色，取出，篩去米，放涼。每1000 g黨參片用米200 g。

米炙黨參：1)取1000 g黨參片，用適量米湯拌勻，悶潤(rùn)至藥透汁盡，文火炒至表面顏色加深，取出，放涼；2)取1000 g黨參片，用適量米湯拌勻，悶潤(rùn)至藥透汁盡，60 ℃烘干，取出，放涼。米湯制備為1 kg粳米加2 kg水，熬至米無(wú)白心，過(guò)濾即得。每1000 g黨參片用米200 g。

清炒黨參：取1000 g黨參片，照《中華人民共和國(guó)藥典》2010版一部(附錄Ⅱ D)文火炒至表面深黃色，取出，放涼。

2.2 黨參不同炮制品質(zhì)量檢測(cè)

2.2.1水分測(cè)定 取上述處理制黨參飲片分別粉碎，過(guò)二號(hào)篩，按《中華人民共和國(guó)藥典》2010版一部水分測(cè)定法項(xiàng)下烘干法(附錄Ⅸ H第一法)測(cè)定。

2.2.2灰分測(cè)定 按《中華人民共和國(guó)藥典》2010版一部灰分測(cè)定法項(xiàng)下總灰分測(cè)定法(附錄Ⅸ K)測(cè)定。

2.2.3 浸出物測(cè)定 測(cè)定按《中華人民共和國(guó)藥典》2010版一部(附錄Ⅹ A)項(xiàng)下熱浸法測(cè)定，用45%乙醇作為溶劑。

2.2.4 黨參多糖含量測(cè)定 參閱王桂紅等[10]黨參多糖含量測(cè)定方法，采用硫酸-苯酚法測(cè)定黨參不同炮制品中多糖含量。

對(duì)照品溶液的制備：取105 ℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品適量，精密稱定，加水溶解并定量制成質(zhì)量濃度為90 μg·mL-1的溶液，即得。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分別置10 mL具塞試管中，加水至1.0 mL，精密加5%苯酚溶液1 mL，搖勻，再精密加硫酸5 mL，搖勻，置沸水浴中加熱20 min，取出，放入冰浴中冷卻5 min，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見(jiàn)分光光度法在488 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。回歸方程為Y=0.010 1X-0.008 2(r=0.998 2)。

供試品溶液的制備：供試品50 ℃烘至恒重后，取樣品粉末過(guò)三號(hào)篩約0.3 g，精密稱定，加水200 mL，加熱回流提取2 h。提取液轉(zhuǎn)移至250 mL量瓶中，用適量水分次洗滌容器，洗液轉(zhuǎn)移至同一量瓶中，放冷，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)。精密吸取續(xù)濾液5 mL，置50 mL離心管中，精密加入無(wú)水乙醇25 mL，搖勻，冷藏1 h，取出，離心(4 000 r·min-1)20 min，棄去上清液，必要時(shí)濾過(guò)。沉淀加80%乙醇洗滌2次，每次8 mL，離心，棄去上清液，沉淀加熱水溶解并轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。

測(cè)定法：精密量取供試品溶液1 mL，置10 mL具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“精密加5%苯酚溶液1 mL”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中無(wú)水葡萄糖的量，計(jì)算即得。

2.2.5 HPLC法測(cè)定黨參炔苷含量 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：色譜柱為依利特 Hypersil-ODS2柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為乙腈-0.01%磷酸水溶液(30∶70)；流速為1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)為268 nm；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為10 μL。理論塔板數(shù)以黨參炔苷峰計(jì)算應(yīng)不低于6000；黨參炔苷峰與其他雜質(zhì)峰分離度大于1.5。

供試品制備：取樣品粉末約1.5 g，精密稱定，每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)重復(fù)，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲提取(功率為100 W，頻率為50 HZ)60 min，取出放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，用0.45 μm有機(jī)微孔濾膜過(guò)濾，即得。

對(duì)照品溶液制備：取黨參炔苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并制成質(zhì)量濃度為1 mg·mL-1的黨參炔苷溶液，即得。

2.3 黨參不同炮制品抗應(yīng)激作用對(duì)比

2.3.1 抗疲勞實(shí)驗(yàn) 每組雌雄小鼠各6只，共6組。按劑量設(shè)計(jì)連續(xù)給樣品15 d，于末次灌胃后30 min將小鼠放入水中游泳，水深30 cm，水溫(25±0.5)℃，記錄小鼠自游泳開(kāi)始至死亡的時(shí)間。

2.3.2 耐缺氧實(shí)驗(yàn) 每組雌雄小鼠各6只，共6組。按劑量設(shè)計(jì)連續(xù)給樣品15 d，于末次灌胃后30 min將各鼠分別放入含有20 g堿石灰的250 mL磨口廣口瓶中(加堿石灰用于吸收CO2，避免CO2中毒影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果)，瓶蓋上涂抹適當(dāng)凡士林密封，記錄小鼠的存活時(shí)間。

2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法

采用Excel 2003和DPS 2012統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行完全隨機(jī)單因素試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析。

3 結(jié)果

3.1 黨參不同炮制品水分、灰分及浸出物測(cè)定結(jié)果

黨參不同炮制品水分、灰分及浸出物測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 酸不溶性灰分、水分含量、浸出物數(shù)據(jù)處理結(jié)果 (%)

根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2010版要求，灰分為不得過(guò)5.0%，水分不得過(guò)16.0%，浸出物不得少于55.0%。由表1可知水分、灰分及浸出物含量全部符合中華人民共和國(guó)藥典要求，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.2 黨參不同炮制品黨參多糖含量測(cè)定結(jié)果

按2.2.4項(xiàng)下方法測(cè)定黨參不同炮制品中黨參多糖含量：米湯炙，60 ℃烘干，多糖含量為24.2%；米湯炙，炒干，多糖含量為16.7%；米炒，炒干，多糖含量為16.3%；清炒黨參多糖含量為16.0%；黨參片多糖含量為17.2%。其中1號(hào)組米湯炙烘干法炮制下的多糖含量最高，其次是5號(hào)黨參片的多糖含量較高。

3.3 HPLC法測(cè)定黨參不同炮制品黨參炔苷含量結(jié)果

按方法項(xiàng)下2.2.5項(xiàng)下方法測(cè)定黨參不同炮制品黨參炔苷含量：米湯炙，60 ℃烘干，炔苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.41 mg·g-1；米湯炙，炒干，炔苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.98 mg·g-1；米炒，炒干，炔苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.23 mg·g-1；清炒黨參炔苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.91 mg·g-1；黨參片炔苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.00 mg·g-1。

由含量測(cè)定結(jié)果及圖1可知，米湯炙，烘干法炮制下的黨參炔苷含量最高，其次是3號(hào)米炒法較高。結(jié)果說(shuō)明1號(hào)組米湯炙烘干法炮制方法下黨參炔苷含量最高，若以黨參炔苷作為黨參指標(biāo)性成分進(jìn)行含量檢測(cè)，則此種炮制方法在黨參加工炮制中可借鑒采用。

綜合多糖及黨參炔苷含量測(cè)定結(jié)果，均得出米湯炙烘干法制備所得優(yōu)于傳統(tǒng)米炒加工方法米制黨參。

3.4 黨參不同炮制品抗應(yīng)激作用對(duì)比

黨參不同炮制方法對(duì)小鼠的抗應(yīng)激實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 小鼠耐缺氧和抗疲勞時(shí)間

注：與空白對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01；與黨參片組比較★★P<0.01。

數(shù)據(jù)分析處理結(jié)果顯示：耐缺氧能力米湯炙烘干組、米湯炙炒干組及黨參片組與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)(P<0.05)；米湯炙烘干組、米湯炙炒干組與黨參片組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。抗疲勞實(shí)驗(yàn)米湯炙烘干組、米湯炙炒干組、米炒組、清炒組與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；米湯炙烘干組、米湯炙炒干組、米炒組與黨參片組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。綜合實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，米湯炙炒干炮制后的黨參抗應(yīng)激作用明顯高于空白對(duì)照組及生黨參片組，且炮制過(guò)后的黨參抗應(yīng)激作用優(yōu)于未炮制過(guò)的黨參。

注：A.米湯炙，烘干；B.米湯炙，炒干；C.米炒；D.清炒；E.生品；F.黨參炔苷對(duì)照品；1.黨參炔苷。圖1 米制黨參中黨參炔苷HPLC圖

3.5 綜合評(píng)分法優(yōu)選黨參炮制方法

通過(guò)研究黨參不同炮制品抗應(yīng)激作用及質(zhì)量對(duì)比來(lái)找出合理的炮制方法，主要考慮不同炮制品抗應(yīng)激作用及炔苷、多糖含量。按其權(quán)重設(shè)定評(píng)分比例：耐缺氧30%、抗疲勞30%、炔苷含量20%、多糖含量20%。黨參不同炮制方案綜合評(píng)分結(jié)果見(jiàn)表3。

從綜合評(píng)分結(jié)果可以看出，1號(hào)米湯炙烘干炮制法得分最高，其同時(shí)在耐缺氧、抗疲勞、炔苷和多糖含量4項(xiàng)中分別得分最高。所以通過(guò)研究黨參不同炮制品抗應(yīng)激作用及質(zhì)量對(duì)比得出，1號(hào)米湯炙烘干法是最佳的炮制方法。

表3 黨參的不同炮制方案綜合評(píng)分

注：耐缺氧分?jǐn)?shù)=(耐缺氧值/耐缺氧最高值)×30；抗疲勞分?jǐn)?shù)=(抗疲勞值/抗疲勞最高值)×30；炔苷分?jǐn)?shù)=(炔苷值/炔苷最高值)×20；多糖分?jǐn)?shù)=(多糖值/多糖最高值)×20。

4 討論

《中華人民共和國(guó)藥典》2010版黨參項(xiàng)下并無(wú)指標(biāo)性成分含量測(cè)定，是否增加黨參炔苷和多糖含量作為黨參及米制黨參的質(zhì)量控制檢測(cè)指標(biāo)有待進(jìn)一步研究完善。黨參抗應(yīng)激作用顯示，米制黨參作用強(qiáng)于黨參片，這與前人研究結(jié)論米炒黨參抗疲勞能力弱于黨參片[4]結(jié)論并不一致，有待進(jìn)一步研究分析。

筆者首次以米湯炙法制備黨參炮制品—米黨參，旨在研究同樣以米作為輔料，對(duì)米的處理方式不同會(huì)對(duì)黨參產(chǎn)生的影響。以米提取所得米湯，按炙法的方式使黨參將米湯吸收進(jìn)入藥材組織內(nèi)部后，對(duì)藥材的外觀性狀、內(nèi)在質(zhì)量以及藥理作用產(chǎn)生了積極影響。研究結(jié)果表明，所制米湯炙黨參指標(biāo)性成分含量明顯高于傳統(tǒng)米炒黨參。

結(jié)果顯示，米制后黨參炔苷含量均有提高，但粳米中并不含有黨參炔苷，是何原因?qū)е潞吭黾樱写M(jìn)一步分析研究。

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ComparativeStudyonAnti-stresseffectandQualityofRiceProcessedCodonopsisRadixwithDifferentProcessTechnology

LUOChunli1，2，CHENHaixin1，WANGWenjuan1，ZHAOZhi1，2*

(1.GuizhouUniversity，Guiyang，Guizhou550025，China；2.GuizhouLaboratoryforBreedingandPlantingEngineeringofTraditionalChineseMedicinalMaterials，Guiyang，Guizhou550025，China)

Objective：To study comparatively the anti-stress effect and quality of rice processed Codonopsis Radix with different process technology，with the aim of further development of Codonopsis Radix.Methods：With fresh root ofCodonopsispilosulaand polished round-grained rice as experimental materials，preparations of different processed products of different drying methods were carried out.The quality of the products was analyzed and evaluated with anti-stress effect as parameter.Results：The quality of Codonoptsis Radix prepared with rice soup and 60 ℃ drying is better than that with the traditional method in terms of anti-stress effect and content of indicative components.Conclusion：It is suitable to use rice soup for rice processed Codonoptsis Radix.Further study is needed for processing technology and accessory materials.

Codonopsispilosula；polished round-grained rice；the index components；anti-stress reaction

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.4.024

2015-01-08)

貴州省科技廳中藥現(xiàn)代化項(xiàng)目(黔科合中藥字[2012]5006-3號(hào))；貴州省科技廳創(chuàng)新人才團(tuán)隊(duì)建設(shè)項(xiàng)目(黔科合人才團(tuán)隊(duì)[2010]4006)；貴州省科技廳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室計(jì)劃項(xiàng)目(黔科合計(jì)Z字[2010]4015)；貴州省藥用植物繁育與種植人才基地(黔人領(lǐng)發(fā)[2013]15號(hào))

*

趙致，教授，研究方向：藥用植物生產(chǎn)理論及技術(shù)研究；E-mail：zzhao@gzu.edu.cn