濕潤燒傷膏對糖尿病性潰瘍大鼠創面組織晚期糖基化終末產物及其受體表達的影響研究

李杰輝，王 麗，張春霞，狄鉀騏，李 輝

?

濕潤燒傷膏對糖尿病性潰瘍大鼠創面組織晚期糖基化終末產物及其受體表達的影響研究

李杰輝，王 麗，張春霞，狄鉀騏，李 輝

目的探討濕潤燒傷膏(MEBO)干預糖尿病性潰瘍創面愈合的作用機制。方法于2015年6月選取145只12周齡的SPF級健康雄性SD大鼠，采用隨機數字表法將其分為空白組(35只)和糖尿病模型組(110只)，糖尿病模型組采用腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)制備糖尿病大鼠模型，8周后選取空白組30只及糖尿病模型組成模大鼠90只，糖尿病模型組成模大鼠再采用隨機數字表法分為模型組、MEBO組及貝復濟組，每組30只，4組均制備潰瘍模型。成功后MEBO組予MEBO紗條、貝復濟組予重組牛堿性成纖維細胞生長因子外用溶液浸透紗條、空白組及模型組予0.9%氯化鈉溶液紗條局部換藥處理，1次/d。分別于創面干預后第3、6、12天，每次隨機選取10只大鼠，觀察創面愈合速率；取相同位點創面組織，應用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測晚期糖基化終末產物(AGEs)、核因子κB(NF-κB)水平，熒光PCR技術檢測AGE受體(RAGE)mRNA表達水平，HE染色觀察創面組織炎性細胞浸潤、成纖維細胞及血管生成情況。結果造模8周后，糖尿病模型組體質量低于空白組，血糖水平高于空白組(P<0.01)?？瞻捉M、模型組、MEBO組和貝復濟組第3、6、12天創面愈合速率比較，差異均有統計學意義(P<0.01)；其中模型組、MEBO組、貝復濟組創面愈合速率低于空白組，MEBO組、貝復濟組創面愈合速率高于模型組；第6、12天時，貝復濟組創面愈合速率低于MEBO組(P<0.05)。空白組、模型組、MEBO組和貝復濟組第3、6、12天創面組織AGEs水平比較，差異均有統計學意義(P<0.01)；其中模型組、MEBO組、貝復濟組創面組織AGEs水平高于空白組，MEBO組、貝復濟組創面組織AGEs水平低于模型組(P<0.05)?？瞻捉M、模型組、MEBO組和貝復濟組第3、6、12天創面組織NF-κB水平比較，差異均有統計學意義(P<0.05)；其中第6、12天時，模型組創面組織NF-κB水平高于空白組，MEBO組創面組織NF-κB水平低于模型組；第12天時，貝復濟組創面組織NF-κB水平高于空白組、低于模型組(P<0.05)。空白組、模型組、MEBO組、貝復濟組第3、6、12天創面組織RAGE mRNA表達水平比較，差異均有統計學意義(P<0.05)；其中第6、12天時，模型組、貝復濟組創面組織RAGE mRNA表達水平高于空白組，MEBO組創面組織RAGE mRNA表達水平低于模型組(P<0.05)。病理結果顯示：干預后第12天，與模型組比較，MEBO組和貝復濟組能明顯促進成纖維細胞及新生毛細血管生長，減少炎性細胞浸潤，其中MEBO組更為明顯。結論MEBO能明顯促進糖尿病性潰瘍創面愈合，其機制可能與調控創面組織AGEs、NF-κB及RAGE mRNA的表達有關。

糖尿?。粷儯粷駶櫉齻啵煌砥谔腔K末產物；NF-κB

李杰輝，王麗，張春霞，等.濕潤燒傷膏對糖尿病性潰瘍大鼠創面組織晚期糖基化終末產物及其受體表達的影響研究[J].中國全科醫學，2016，19(26)：3153-3159.[www.chinagp.net]

LI J H，WANG L，ZHANG C X，et al.Effect of MEBO on advanced glycosylation end products and their receptors in wound tissue of rats with diabetic skin ulcer[J].Chinese General Practice，2016，19(26)：3153-3159.

糖尿病創面愈合是炎性細胞、修復細胞、細胞外基質及細胞因子等多因素共同參與并高度協調、相互調控的復雜過程[1]，任一環節的異常均可導致創面難愈合，其中晚期糖基化終末產物(advanced glycosylation end products，AGEs)異常蓄積所致皮膚“隱性損害”與糖尿病創面難以愈合機制密切相關。濕潤燒傷膏(MEBO)是皮膚再生醫療技術(MEBT/MEBO)的核心藥物，目前廣泛應用于各種皮膚潰瘍創面的修復，尤其是慢性潰瘍創面[2-3]，本研究通過腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型，并在此基礎上制備糖尿病性潰瘍模型，觀察MEBO對創面組織AGEs、核因子κB(NF-κB)水平，及對AGE受體(RAGE)mRNA水平及病理結構的影響，探討MEBO干預糖尿病性潰瘍創面愈合的相關機制。

1　材料與方法

1.1實驗動物健康雄性SD大鼠145只，12周齡，SPF級，體質量(220±30)g，由廣西醫科大學實驗動物中心提供，許可證號：SCXK桂2009-0002。大鼠飼養于20～25 ℃、相對濕度為(60±10)%環境中，單籠適應性飼養2周后用于實驗。

1.2藥品與試劑MEBO(汕頭市美寶制藥有限公司)，STZ(美國Sigma公司)，重組牛堿性成纖維細胞生長因子外用溶液(貝復濟，珠海億勝生物制藥有限公司)，低精蛋白鋅胰島素注射液(江蘇萬邦生化醫藥股份有限公司)，Trizol(Invitrogen公司)，PrimeScriptTMⅡ 1st Strand cDNA Synthesis Kit(TaKaRa公司)，Power SYBR? Green PCR Master Mix(ABI公司)，大鼠AGEs、NF-κB p65酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒(NeoBiolab公司)。引物設計及合成由中山大學達安基因股份有限公司完成。引物序列如下：RAGE上游引物：5′-GGAATTGTCGATGAGGGGAC-3′，下游引物：5′-CAACAGCTGAATGCCCTCTG-3′；β-actin上游引物：5′-TCCGTAAAGACCTCTATGCC-3′，下游引物：5′-AAAGCCATGCCAAATGTCTC-3′。

1.3儀器美迪信血糖儀及配套血糖試紙(天津億朋醫療器械股份有限公司)，3900臺式高通量DNA合成儀(ABI公司)，9700 PCR儀(ABI公司)，7500全自動熒光PCR儀(ABI公司)，Multiskan Go全波長全自動多功能酶標儀(Thermo Fisher Scientific公司)，HC-3018R高速冷凍離心機(安徽中科中佳科學儀器有限公司)，FSH-2A可調高速勻漿機(金壇市國旺實驗儀器廠)。

1.4方法

1.4.1模型制備2015年6月，糖尿病大鼠模型：SD大鼠給予65 mg/kg STZ(枸櫞酸鈉緩沖液溶解)腹腔注射，注射體積1 ml/kg，在注射前和注射后每周采用電子秤稱量大鼠體質量，采用剪尾法應用美迪信血糖儀檢測隨機血糖水平，如果造模前血糖<8.9 mmol/L，造模后血糖≥16.7 mmol/L，體質量明顯下降并且經病理證實胰島細胞被破壞者，視為糖尿病模型誘導成功[4]。潰瘍模型：將大鼠麻醉后，背部剃毛，呈腹臥位固定于固定板上，用直徑為18 mm的圓形圖章在距肩胛骨下緣水平線下2 cm處脊柱正中皮膚上印出標記，碘伏消毒，用組織剪按照標記線剪去全層皮膚(深至筋膜)，制備圓形皮膚缺損創面[5]。

1.4.2分組及干預方法采用隨機數字表法將SD大鼠分為空白組(35只)和糖尿病模型組(110只)，糖尿病大鼠模型誘導8周后，選成模大鼠90只，再采用隨機數字表法分為模型組、MEBO組及貝復濟組，每組30只，并選空白組大鼠30只制備潰瘍創面模型。各組創面制備成功后即開始創面干預治療，將B型粘貼傷口敷料(5 cm×8 cm)粘貼大鼠背部，通過裁切暴露傷口。治療前予0.01%呋喃西林液處理創面，MEBO組創面外敷兩層MEBO紗條(0.2 g/cm2)，貝復濟組創面外敷兩層重組牛堿性成纖維細胞生長因子外用溶液浸透紗條(60 U/cm2)，空白組與模型組創面局部外敷兩層0.9%氯化鈉溶液紗條，各組均按照創面大小剪成小塊貼于創面上，再加蓋兩層消毒干紗布，換藥后膠布固定，換藥1次/d，不做其他干預措施。各組大鼠單籠飼養，自由飲水和喂食，隔日更換墊料。

1.4.3標本采集各組大鼠分別于創面干預后第3、6、12天，每次隨機取10只大鼠觀察創面的大體情況，并計算創面愈合率，麻醉后取相同位點創面組織，一部分勻漿進行ELISA檢測，一部分以10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，切片備病理檢測，另一部分將其放置在液氮中保存備熒光PCR檢測。

1.4.4指標檢測

1.4.4.1創面愈合速率采用透明膜標記法，以創傷后即刻測量的創面面積為創傷面積，以各時間點取材時測量的面積為時間點創面面積，愈合面積=創傷面積-時相點創面面積；創面愈合速率=(愈合面積/創傷面積)×100%。

1.4.4.2創面組織AGEs、NF-κB水平測定取部分創面組織在冰水中漂洗后，拭干稱重，剪碎，按1∶9 0.9%氯化鈉溶液體積，制備10%組織勻漿，采用3 000 r/min離心10 min，離心半徑15 cm，取上清液，按照ELISA試劑盒說明書采用定量免疫競爭法檢測AGEs、NF-κB水平：試驗前將10 μl平衡液加入100 μl樣本中，將處理后的樣本和標準品按每孔100 μl依次加入后，再每孔加入50 μl酶聯親和物，充分混勻，覆膜37 ℃孵育1 h后，用預先稀釋好的洗液300 μl洗板，反復清洗5次并扣干孔內剩余液體，每孔按照次序分別加入50 μl底物A和B，避光室溫孵化15 min，加50 μl終止液終止反應。立即應用酶標儀在450 nm下讀取OD值，根據標準曲線計算AGEs、NF-κB水平。

1.4.4.3創面組織RAGE mRNA表達測定取液氮凍存的組織加入Trizol 1 ml，按試劑盒說明書提取總RNA。5 μg RNA變性處理后，在10 μl反轉錄體系〔5×Prime Script Ⅱ Buffer 4 μl、RNase Inhibitor(40 U/μl)0.5 μl、Prime Script Ⅱ RTase(200 U/μl)1 μl、RNase free dH2O 4.5 μl〕經30 ℃ 10 min、50 ℃ 60 min、95 ℃ 5 min擴增合成cDNA，將制備好的cDNA進行PCR擴增，擴增體系如下：2×Power SYBR? Green PCR Master Mix 12.5 μl，上游引物(10 pmol/μl)0.5 μl，下游引物(10 pmol/μl)0.5 μl，cDNA模板2 μl，ddH2O 9.5 μl。PCR擴增條件：95 ℃預變性15 min，然后94 ℃變性15 s，55 ℃退火延伸45 s，共40個循環。以β-actin作為內參基因，分析Ct值，采用2-ΔΔCt法分析mRNA相對表達量。

1.4.4.4創面組織病理觀察取10%甲醛溶液固定皮膚組織，常規組織脫水，石蠟包埋，4 μm切片，脫蠟，HE染色，脫水透明封固，顯微鏡下觀察創面組織炎性細胞浸潤、成纖維細胞及血管生成情況。

2　結果

2.1體質量和血糖水平造模前，空白組和糖尿病模型組體質量、血糖水平比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；造模后，糖尿病模型組體質量低于空白組，血糖水平高于空白組，差異均有統計學意義(P<0.01，見表1)。

2.2創面愈合速率空白組、模型組、MEBO組和貝復濟組第3、6、12天創面愈合速率比較，差異均有統計學意義(P<0.01)；其中第3天時，模型組、MEBO組、貝復濟組創面愈合速率低于空白組，MEBO組、貝復濟組創面愈合速率高于模型組，差異均有統計學意義(P<0.05)；第6、12天時，模型組、MEBO組、貝復濟組創面愈合速率低于空白組，MEBO組、貝復濟組創面愈合速率高于模型組，貝復濟組創面愈合速率低于MEBO組，差異均有統計學意義(P<0.05，見表2)。

表1　兩組大鼠體質量和血糖水平比較±s)

表2　4組大鼠造模后不同時間創面愈合速率比較±s，%)

注：MEBO=濕潤燒傷膏；與空白組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與MEBO組比較，cP<0.05

2.3創面組織AGEs水平空白組、模型組、MEBO組和貝復濟組第3、6、12天創面組織AGEs水平比較，差異均有統計學意義(P<0.01)；其中模型組、MEBO組、貝復濟組創面組織AGEs水平高于空白組，MEBO組和貝復濟組創面組織AGEs水平低于模型組，差異均有統計學意義(P<0.05，見表3)。

表3　4組大鼠造模后不同時間創面組織AGEs水平比較

注：與空白組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05

2.4創面組織NF-κB水平空白組、模型組、MEBO組和貝復濟組第3、6、12天創面組織NF-κB水平比較，差異均有統計學意義(P<0.05)；其中第3天時，模型組創面組織NF-κB水平低于空白組，MEBO組、貝復濟組創面組織NF-κB水平高于空白組和模型組；第6天時，模型組創面組織NF-κB水平高于空白組，MEBO組創面組織NF-κB水平低于模型組；第12天時，模型組創面組織NF-κB水平高于空白組，MEBO組創面組織NF-κB水平低于模型組，貝復濟組創面組織NF-κB水平高于空白組、低于模型組，差異均有統計學意義(P<0.05，見表4)。

表4　各組大鼠造模后不同時間創面組織NF-κB水平比較

注：與空白組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05

2.5創面組織RAGE mRNA的表達空白組、模型組、MEBO組、貝復濟組第3、6、12天創面組織RAGE mRNA表達水平比較，差異均有統計學意義(P<0.05)；其中第3天時，模型組創面組織RAGE mRNA表達水平高于空白組，MEBO組創面組織RAGE mRNA表達水平低于模型組，貝復濟組創面組織RAGE mRNA表達水平高于空白組、MEBO組，低于模型組；第6天時，模型組、貝復濟組創面組織RAGE mRNA表達水平高于空白組，MEBO組創面組織RAGE mRNA表達水平低于模型組；第12天時，模型組、貝復濟組創面組織RAGE mRNA表達水平高于空白組，MEBO組創面組織RAGE mRNA表達水平低于模型組，差異均有統計學意義(P<0.05，見表5)。

2.6創面組織病理觀察HE染色鏡下顯示：造模后第3天，各組創面組織均可見出血壞死，有肉芽組織生長，空白組可見較多成纖維細胞和新生毛細血管生成，伴有明顯炎性細胞浸潤；MEBO組和貝復濟組次之；模型組新生血管生成數量及炎性細胞浸潤數量較少。造模后第6天，空白組創面肉芽組織生長旺盛，可見大量成纖維細胞和新生毛細血管增生，炎性細胞浸潤數量減少；模型組創面肉芽組織生長較緩，可見大量炎性細胞浸潤和部分新生毛細血管增生；與模型組比較，MEBO組和貝復濟組創面肉芽組織生長較快，伴有不同程度炎性細胞浸潤，成纖維細胞數量較多，新生毛細血管更加豐富，其中MEBO組更為明顯。造模后第12天，空白組創面肉芽組織逐漸向瘢痕組織轉化，可見少量炎性細胞浸潤，毛細血管數量減少，膠原纖維增多；模型組創面仍處在肉芽組織生長期，可見較多炎性細胞浸潤和新生毛細血管增生；與模型組比較，MEBO組創面肉芽組織較少，部分向瘢痕組織轉化，可見膠原纖維，有較少炎性細胞浸潤；貝復濟組介于兩者之間(見圖1，本文彩圖詳見本刊官網www.chinagp.net電子期刊相應文章附件)。

表5　4組大鼠造模后不同時間創面組織RAGE mRNA表達水平比較

注：與空白組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與MEBO組比較，cP<0.05

3　討論

糖尿病是臨床常見病、多發病，隨著老齡化社會的到來，其發病率呈逐年上升趨勢。據WHO數據資料統計，全球已有糖尿病患者1.85億左右，預測到2025年全世界糖尿病患病人數將達到3.33億[6]。糖尿病患者皮膚易受損傷，損傷后常伴有創面血管發生遲滯、神經病變以及感染，易形成慢性難愈合創面，嚴重影響患者生活質量。因此，糖尿病創面的治療是目前創面研究的難點和熱點。

糖尿病創面愈合是一個炎性細胞、修復細胞及細胞因子等多因素共同參與、相互調控的復雜生物學過程，其中細胞增殖(包括血管生成及成纖維細胞增生)是創面愈合的關鍵。目前重組牛堿性成纖維細胞生長因子(貝復濟)廣泛應用于臨床治療潰瘍創面，該藥可刺激創面組織分泌堿性成纖維細胞生長因子，促進內皮細胞及新生毛細血管形成，促進肉芽組織生長，加快上皮細胞爬行，促進創面愈合[7]，故本研究選用貝復濟為對照藥物。研究表明MEBO可顯著提高創面肉芽組織中血管內皮生長因子、堿性成纖維細胞生長因子、表皮生長因子mRNA的表達，促進創面成纖維細胞的分裂增殖及新生毛細血管的增殖，加速創面愈合[8-9]。本研究結果亦顯示，MEBO組和貝復濟組均可促進創面愈合，且愈合后期MEBO組創面愈合速率高于貝復濟組，提示MEBO能較快促進創面愈合。

注：MEBO=濕潤燒傷膏

圖1大鼠造模后不同時間創面組織病理圖(HE染色，×100)

Figure 1Pathological figure of wound tissue at different time points

現代研究表明糖尿病患者的皮膚組織存在“隱性損害”，即在未損傷狀態下已存在組織細胞學的改變，這種改變是內源性的，雖不造成皮膚破損或斷裂等可見損害，但會使皮膚易損性增加[10-11]。這種“隱性損害”主要由局部皮膚組織的高糖環境及AGEs的蓄積所致，因此AGEs的產生和蓄積是糖尿病皮膚創面修復“失控”的本質。故本研究對MEBO干預糖尿病性潰瘍創面組織中AGEs的相關機制進行了研究。

受體途徑是AGEs作用的主要途徑，RAGE是目前已知研究最多、較為深入的AGEs受體，很多細胞的表面如內皮細胞、單核-巨噬細胞、血管平滑肌細胞等均有RAGE的表達[12-13]。在糖尿病狀態下，循環及內皮下基質中AGEs不斷增多，內皮細胞等細胞膜上特異受體RAGE的表達亦增強，AGEs與RAGE結合，啟動一系列受體信號轉導途徑[14]。本研究結果顯示，糖尿病性潰瘍大鼠模型第3、6、12天創面組織中AGEs水平及RAGE mRNA表達水平均較空白組明顯升高；與模型組比較，MEBO組相應時間點創面組織中AGEs水平及RAGE mRNA表達水平降低，提示MEBO能夠通過干預AGEs-RAGE信號上游基因表達影響創面愈合。

AGEs-RAGE信號轉導通路有多個作用位點，其中NF-κB是一種重要的效應分子。AGEs與RAGE結合后，可引起氧化應激[15-16]，并通過激活p38 ras蛋白及MAP途徑激活NF-κB[17-19]。NF-κB是一種多效炎性核轉錄因子，參與免疫調控和炎性細胞增殖等多種生理、病理過程[20-21]。NF-κB的活化可以刺激眾多靶基因表達，如TF、p21 Ras、ERK1/2及RAGE本身的表達。這些基因的激活可以使白介素(IL)-1β、IL-6、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、胰島素樣生長因子(IGF)、血管內皮細胞黏附分子1(VCAM-1)、細胞間黏附分子1(ICAM-1)等炎性因子、生長因子及黏附分子等分泌增加，從而觸發瀑布式炎性反應，形成惡性循環，引起持續的細胞功能損傷和紊亂，影響糖尿病創面愈合。本研究結果顯示，糖尿病性潰瘍大鼠模型干預第3天時創面組織中NF-κB水平尚低，病理顯示炎性細胞浸潤數量較少，在干預第6天和第12天時創面組織中NF-κB水平持續升高，病理顯示大量炎性細胞浸潤，提示創面炎癥呈過激狀態。與模型組比較，MEBO組第3天創面組織中NF-κB水平升高，第6、12天時均明顯下降，病理顯示其能明顯促進成纖維細胞及新生毛細血管生長，減少炎性細胞浸潤，提示MEBO能通過調控AGEs-RAGE信號轉導通路中NF-κB表達水平影響創面愈合。

綜上所述，MEBO能明顯促進糖尿病性潰瘍大鼠創面愈合，顯著降低創面組織AGEs、RAGE mRNA表達水平，調控NF-κB表達水平，改善創面炎性細胞浸潤，提示其促進糖尿病性潰瘍創面愈合的機制可能與調控創面組織AGEs-RAGE信號轉導通路有關，對信號轉導通路下游相關炎性因子、生長因子及黏附分子的影響，有待后續實驗進一步研究明確。

作者貢獻：李杰輝進行實驗設計與實施、資料收集整理、撰寫論文、成文并對文章負責；王麗、張春霞、狄鉀騏、李輝進行實驗實施、資料整理、數據處理。

本文無利益沖突。

[1]付小兵.糖尿病足及其相關慢性難愈合創面的處理[M].2版.北京：人民軍醫出版社，2013：3.

[2]唐乾利，黃欣，王宇，等.濕潤暴露療法/濕潤燒傷膏治療慢性難愈合創面的超微病理及絲裂原活化蛋白激酶激酶和c-myc mRNA表達的機制研究[J].中國全科醫學，2015，18(3)：294-299.

TANG Q L，HUANG X，WANG Y，et al.Ultrastructural pathology and the mechanism ot expression ot MAPKK mRNA & c - myc mRNA ot chronic retractory wound treated by MEBT/MEBO[J].Chinese General Practice，2015，18(3)：294-299.

[3]TANG Q L，HAN S S，FENG J，et al.Moist exposed burn ointment promotes cutaneous excisional wound healing in rats involving VEGF and bFGF[J].Mol Med Rep，2014，9(4)：1277-1282.

[4]陸樹良，青春，謝挺，等.糖尿病皮膚“隱性損害”的機制研究[J].中華創傷雜志，2004，20(8)：468-473.

LU S L，QING C，XIE T，et al.Research on olfactory mechanism of the cutaneous "underlying disorder" in diabetic rats[J].Chinese Journal of Trauma，2004，20(8)：468-473.

[5]趙就禹，付小兵，雷永紅，等.大鼠小面積全層皮膚缺損創面模型的制備[J].感染、炎癥、修復，2008，9(1)：62-64.

[6]吳菁，谷衛.糖尿病診治新進展——解讀美國糖尿病學會《2010版糖尿病診療指南》[J].中華全科醫師雜志，2010，9(10)：668-671.

[7]商振球，桂志紅，王華富，等.重組牛堿性成纖維細胞生長因子治療壓瘡的臨床療效系統評價[J].中國藥物與臨床，2013，13(12)：1593-1595.

[8]唐乾利，韓珊珊，付軍，等.MEBT/MEBO對皮膚創面愈合過程中VEGF、bFGF、EGF mRNA表達影響的研究[J].右江民族醫學院學報，2012，34(5)：597-601.

TANG Q L，HAN S S，FU J，et al.The effect of MEBT/MEBO on the expression of VEGF,bFGF and EGF mRNAs during skin wound healing[J].Journal of Youjiang Medical University for Nationalities，2012，34(5)：597-601.

[9]唐乾利，郭璐，王權勝，等.MEBT/MEBO對血管內皮細胞粗面內質網影響的實驗研究[J].中國燒傷創瘍雜志，2010，22(4)：252-257.

TANG Q L，GUO L，WANG Q S，et al.Experimental study of effect of MEBT/MEBO on rough endoplasmic reticulum of vascular endothelial cell[J].The Chinese Journal of Burns Wounds & Surface Ulcers，2010，22(4)：252-257.

[10]陸樹良.解讀創面修復“失控”本質，拓寬創面愈合研究視野[J].創傷外科雜志，2007，9(4)：289-292.

LU S L.Nature of wound healing with controllable disorder[J].Journal of Traumatic Surgery，2007，9(4)：289-292.

[11]陸樹良，謝挺，牛軼雯，等.糖尿病合并創面難愈的機制研究[J].藥品評價，2011，8(7)： 17-21.

LU S L，XIE T，NIU Y W，et al.Mechanism research of diabetic wound hard to be cured[J].Drug Evaluation，2011，8(7)： 17-21.

[12]陳賓，牛軼雯，謝挺，等.糖尿病大鼠皮膚組織糖代謝紊亂與皮膚神經病變相關性研究[J].中華燒傷雜志，2011，27(2)：139-144.

CHEN B，NIU Y W，XIE T，et al.Relationship between cutaneous glycometabolic disorders and cutaneous neuropathy in diabetic rats[J].Chinese Journal of Burns，2011，27(2)：139-144.

[13]呂翠，劉洪娟，劉曉麗，等.晚期糖基化終末產物受體及其抑制劑的研究進展[J].中國藥理學通報，2013，29(4)：452-456.

LYU C，LIU H J，LIU X L，et al.The research progress on RAGE and RAGE inhibitor[J].Chinese Pharmacological Bulletin，2013，29(4)：452-456.

[14]FARMER D G，KENNEDY S.RAGE，vascular tone and vascular disease[J].Pharmacol Ther，2009，124(2)：185-194.

[15]牛軼雯，繆明遠，董煒，等.晚期糖基化終末產物與其受體對糖尿病創面氧化應激反應的影響[J].中華燒傷雜志，2012，28(1)：32-35.

NIU Y W，MIAO M Y，DONG W，et al.Effects of advanced glycation end products and its receptor on oxidative stress in diabetic wounds[J].Chinese Journal of Burns，2012，28(1)：32-35.

[16]劉繼松.氧化應激和糖尿病創面的延遲愈合[J].蚌埠醫學院學報，2010，35(7)：756-757.

[17]CLIFTON D R，RYDKINA E，FREEMAN R S，et al.NF-κB activation during infection of endothelial cells involves the activation of catalytic IκB kinases IKKα and IKKβ and phosphorylation-proteolysis of the inhibitor protein IκBα[J].Infect Immun，2005，73 (1)：155-165.

[18]吳起,王甲漢,劉亮，等.p38絲裂原活化蛋白激酶和核因子-κB促進創面血管化的機制探討[J].暨南大學學報(自然科學與醫學版),2015,36(2):131-135.

WU Q，WANG J H，LIU L，et al.Study of the mechanisms of p38 MAPK and NF-κB in promoting angiogenesis in scald wounds[J].Journal of Jinan University(Natural Science & Medicine Edition),2015,36(2):131-135.

[19]李亞清,嚴建平,許武林,等.核因子-κB和p38絲裂原活化蛋白激酶調節脂多糖誘導的氣道上皮細胞白細胞介素8的表達[J].中國藥理學通報,2011,27(2):182-186.

LI Y Q,YAN J P,XU W L,et al.Induction of interleukin-8 by lipopolysaccharide in human airway epithelial cells via NF-κB and p38 mitogen-activated protein kinase[J].Chinese Pharmacological Bulletin,2011,27(2):182-186.

[20]李利,方強.核因子-κB的結構和功能研究及與全身炎癥反應綜合征的關系[J].國外醫學(臨床生物化學與檢驗學分冊),2005,26(11):792-794.

LI L,FANG Q.Structure and function of nuclear factor-kappa B and its relation to SIRS[J].Foreign Medical Sciences(Clinical Biochemistry and Laboratory Medicine),2005,26(11):792-794.

[21]朱妮.核轉錄因子NF-κB及其抑制劑的研究進展[J].中國生物制品學雜志，2011，24(7)：869-872.

ZHU N.Progress in research on NF-κB and its inhibitor[J].Chinese Journal of Biologicals，2011，24(7)：869-872.

(本文編輯：賈萌萌)

Effect of MEBO on Advanced Glycosylation End Products and Their Receptors in Wound Tissue of Rats with Diabetic Skin Ulcer

LIJie-hui，WANGLi，ZHANGChun-xia，DIJia-qi，LIHui.TheFirstAffiliatedHospitalofGuangxiUniversityofChineseMedicine，Nanning530023，China

Correspondingauthor：LIJie-hui，theFirstAffiliatedHospitalofGuangxiUniversityofChineseMedicine，Nanning530023，China；E-mail：182209537@qq.com

ObjectiveTo explore the mechanism of MEBO in the treatment of diabetic skin ulcer.MethodsA total of 145 healthy male SD rats(aged 12 weeks old)in a SPF grade were randomly assigned to blank group(35 rats)and diabetic model group(110 rats)by random number table method in July 2015.Diabetic model was induced by intraperitoneal injection of streptozotocin，8 weeks later，30 rats in blank group were selected，and 90 successful diabetic rat models were equally divided into diabetic model group，MEBO group and BFGF group with 30 rats in each group，the ulcer models were induced.Rats in MEBO group were treated with MEBO gauze，rats in BFGF group were treated with BFGF gauze，rats in blank group and model group were treated with 0.9% sodium chloride injection gauze，the dressing of each case was changed once a day.At the 3rd，6th and 12th day after intervention，10 rats of each group were selected randomly to investigate wound healing rate.The wound tissue of the same site was obtained for test，levels of AGEs and NF-κB were measured by ELISA，the expression level of RAGE mRNA was measured by fluorescent PCR，and the inflammatory cells，fibroblast and new capillary were observed by HE staining.Results8 weeks after models were established，the body mass of rats in diabetic model group was significantly lower than that in blank group，the blood glucose level of rats in diabetic model group was significantly higher than that in blank group(P<0.01).At the 3rd，6th and 12th day after intervention，there was significant difference in wound recovery rate among blank group，model group，MEBO group and BFGF group(P<0.01)；the wound recovery rate of model group，MEBO group and BFGF group was lower than that of bland group respectively，and the wound recovery rate of MEBO group and BFGF group was higher than that of model group respectively；at the 6th and 12th day after intervention，the wound recovery rate of BFGF group was lower than that of MEBO group(P<0.05).At the 3rd，6th and 12th day after intervention，there was significant difference in AGEs level among blank group，model group，MEBO group and BFGF group(P<0.01).AGEs level of model group，MEBO group and BFGF group was higher than that of blank group respectively，while AGEs level of MEBO group and BFGF group was lower than that of model group(P<0.05).At the 3rd，6th and 12th day after intervention，there was significant difference in level of NF-κB among blank group，model group，MEBO group and BFGF group(P<0.05)；at the 6th and 12th day after intervention，level of NF-κB of model group was higher than that of blank group and MEBO group respectively；at the 12th day after intervention，level of NF-κB of BFGF group was higher than that of blank group and was lower than that of model group respectively(P<0.05).At the 3rd，6th and 12th day after intervention，there was significant difference in expression level of RAGE mRNA among bland group，model group，MEBO group and BFGF group(P<0.05).At the 6th and 12th day after intervention，the expression level of RAGE mRNA of model group and BFGF group was higher than that of blank group respectively，and expression level of RAGE mRNA of MEBO group was lower than that of model group(P<0.05).Pathological results showed that，at the 12th day after intervention,compared with model group，faster growth of the fibroblast and new capillary and less infiltration of inflammatory cells were found in MEBO group and BFGF group，especially among MEBO group.ConclusionMEBO could obviously promote the healing of diabetic skin ulcer by regulating the expression of AGEs，NF-κB and RAGE mRNA in wound tissue.

Diabetes mellitus；Ulcer；MEBO；AGEs；NF-kappa B

國家自然科學基金資助項目(81302975)

530023廣西南寧市，廣西中醫藥大學第一附屬醫院(李杰輝，張春霞，狄鉀騏，李輝)；廣西壯族自治區中醫藥研究院(王麗)

李杰輝，530023廣西南寧市，廣西中醫藥大學第一附屬醫院；E-mail：182209537@qq.com

R 632.1

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2016.26.006

2016-03-29；

2016-07-15)