簡析牛結核病的檢測

張學峰內蒙古包頭市達茂聯合旗農牧業局

簡析牛結核病的檢測

張學峰
內蒙古包頭市達茂聯合旗農牧業局

牛結核病（Bovine Tubercu1osis,BTB）是由牛分枝桿菌（Mycobacterium bovis）引起的一種人獸共患的慢性消耗性傳染病，可通過感染牛的分泌物或排泌物或牛奶等經消化道或呼吸道傳染人或者其它動物，此外，BTB還導致奶牛逐進性消瘦、產乳率和乳質下降、肺結核及其它器官結核和損害等。BTB對牛和人的健康仍然存在嚴重威脅，是國際動物衛生組織（OIE）規定必須通報的疾病之一，在我國列為二類動物疫病。在中國，由于奶牛飼養量增加和以個體或私營企業飼養為主的飼養模式，BTB呈現蔓延趨勢。

一、BTB的免疫反應情況

準確監測是奶牛場有效防控BTB的前提，如何選擇有效的檢測方法就顯得尤為重要。牛早期感染牛分枝桿菌，機體免疫為細胞免疫，此時應選擇針對細胞免疫的檢測方法如γ-干擾素檢測法和結核菌素（PPD）試驗；牛感染BTB到中后期才出現體液免疫，此階段產生的特異性抗體可以被常見的抗體檢測方法檢測到，如：BTB抗體檢測ELISA和膠體金試紙條。牛感染牛分枝桿菌后免疫反應示意圖如下：

由于結核病的特殊的免疫學特性以及復雜的病理變化和免疫應答，一種診斷方法很難對結核病做出準確的診斷，醫院在對人的結核病進行確診時都要采用好幾種方法進行反復試驗；檢測BTB也是如此，BTB的診斷也必須要綜合幾種不同的診斷方法互相彌補不足，盡可能地提高檢測的敏感性和特異性、排除非特異性因素的干擾，降低因誤診帶來的經濟損失。

二、BTB檢測方法介紹

γ-干擾素檢測法：通過檢測牛感染BTB后外周血中致敏淋巴細胞再次受到牛型結核菌素或禽型結核菌素刺激所釋放的特異性γ-干擾素，針對牛結核病細胞免疫階段，早期感染階段。商品化的試劑盒采用ABS-ELISA方法，大大提高了檢測靈敏度，是OIE推薦認可的BTB診斷方法。該方法克服了PPD判讀的主觀性，縮短了反應時間，已經在許多國家（澳大利亞、愛爾蘭、美國）用于BTB的檢測。

PPD試驗：針對BTB感染中前期有效，在相當數量的PPD試驗陽性牛中找不到特征病變，分不到細菌，或者分到非典型的分支桿菌，有5%的假陽性（7/ 98）。可以用比較結核菌素試驗降低假陽性率，方法就是同時注射禽型PPD和牛型PPD，根據兩種結核菌素的皮厚差值而判斷結果。

抗體檢測ELISA：ELISA試劑盒采用融合蛋白做為檢測抗原能大幅度提高ELISA檢測方法的敏感性，特異地檢測到BTB體液免疫階段所產生的抗體即中晚期（無變應期）的抗體，目前國內外很多廠家均有生產和銷售商品化的BTB抗體檢測ELISA試劑盒。

膠體金試紙條：運用膠體金層析技術特異性地檢測BTB體液免疫階段所產生的抗體即中晚期 （無變應期）的抗體，適用于臨床上奶牛有咳嗽、消瘦或者是下痢的疑似結核病牛只的欄間現場檢測，無需專業人士和儀器設備，具有快速、簡便的優勢。

幾種檢測方法的特點如下：

方法 　優勢 　缺點 　檢測階段PPD試驗 　價格相對便宜，傳統方法 　耗時、費力、費人，結果因人為因素有所誤差，可疑牛需重檢，有假陽性結果中前期，細胞免疫階段干擾素檢測 　結果準確，OIE和出入境檢疫的確診方法操作較為繁瑣，需要專業實驗室和人員，成本較高中前期，細胞免疫階段抗體ELISA 　特異、敏感、準確、快速，能大批量檢測需要專業實驗室和人員 　中后期，體液免疫階段金標卡 　特異、準確、快速，無需儀器設備和專業人員，適合現場檢疫敏感性不如 G-干擾素檢測、ELISA等方法，成本略高中后期，體液免疫階段γ-

目前采集血液進行實驗室檢測即可覆蓋牛結核感染的所有階段。

三、推薦BTB檢測方案

方案1：實驗室平行檢測

PPD檢測按照國標（GB/T18645－2002），應用牛提純結核菌素皮內變態反應進行檢測。當然采用PPD檢測復核γ-干擾素陽性試驗結果是比較穩妥的方式，但PPD試驗比較費時費力，并不適用于大范圍的檢測，并且與非致病性環境分枝桿菌（土壤分枝桿菌、禽型分枝桿菌等）有交叉反應，假陽性率高；故此僅僅是推薦選擇性采用。

平行檢測的優勢在于能快速、準確地檢測全群所有階段的感染牛，是普查牛群牛結核病最快捷和最全面的檢測方案，減少了假陰性牛群的存在，對凈化牛群意義重大；但需要全群做兩項檢測，增加了檢測成本和陽性牛處理成本。

方案2：序列檢測方案

序列檢測方案使用牛結核γ-干擾素ELISA試劑盒進行初篩，陰性再用牛結核病ELISA試劑盒或膠體金試紙條進行檢測，相較于方案1平行檢測節約了檢測成本，減少了假陽性牛的處理費用，節約了凈化成本；但也可能保留了假陰性牛，對牛結核病感染情況的監測摸底不徹底，延長了凈化時間。

四、檢測要求分析

要達到牛結核病的凈化，比較好的做法是：檢測細胞免疫的γ-干擾素檢測法或PPD試驗與檢測血清抗體的ELISA方法或膠體金試紙條配合使用，互相彌補不足，盡可能地提高檢測的敏感性和特異性、排除非特異性因素的干擾，降低因誤診帶來的經濟損失。

1.發現病牛應立即撲殺，也可隔離飼養，定期檢測。若有開放性結核病灶，立即撲殺，并無害化處理。優秀的高產奶牛或種牛，可用鏈霉素或者異煙肼利福平治療。

2.對疑似牛隔離飼養，1月后復檢。仍為疑似，繼續隔離。過25～30天重檢，結果仍疑似按照陽性處理。

3.污染牛群一年檢疫4次。陽性牛進行分群。剩余的陰性牛應間隔30～45天，連續監測3次，陰性者為假定健康群。該群或陽性率3%以下，應該每年2次以上的檢疫。若無陽性牛在經過1～1.5年連續3次檢疫，結果為陰性者，確定為健康群。