HELQ蛋白在原發性肝細胞性肝癌中表達的臨床意義

劉芳平　鄭素芳　羅慶豐　高　文　饒華民

?

HELQ蛋白在原發性肝細胞性肝癌中表達的臨床意義

劉芳平鄭素芳羅慶豐高文饒華民

目的分析HELQ 蛋白表達與原發性肝細胞性肝癌臨床病理特征和預后的關系。方法收集71例原發性肝細胞性肝癌，應用免疫組化技術檢測HELQ蛋白在原發性肝細胞性肝癌中的表達情況。結果HELQ蛋白在原發性肝細胞性肝癌中的陽性表達率為30.99%，HELQ蛋白陽性表達與原發性肝細胞性肝癌患者的腫瘤大小、衛星灶、腫瘤Edmonson-steiner分級、血清AFP水平、TNM分期有顯著相關性，HELQ蛋白陽性表達與原發性肝細胞性肝癌患者的性別、年齡、包膜受侵、門靜脈癌栓脈和脈管浸潤無顯著相關性。結論HELQ蛋白在原發性肝細胞性肝癌中表達水平下降，HELQ蛋白在原發性肝細胞性肝癌中發揮抑癌基因的作用。

原發性肝細胞性肝癌；HELQ蛋白；抑癌基因

(The Practical Journal of Cancer,2016,31:1222～1224)

我國為原發性肝細胞性肝癌(primary hepatocellular carcinoma，HCC，簡稱肝癌)高發地區，原發性肝細胞性肝癌高侵襲性和高增殖活性是導致原發性肝細胞癌導致較高死亡率的原因之一，同時肝內播散及多中心發生，及其癌細胞轉移過程都需借助于其細胞表面的活性分子相互作用。研究表明HELQ基因可幫助修復細胞增殖時DNA復制過程中所發生的所有的DNA損傷,如果這一基因缺失或發生缺陷，DNA錯誤就有可能增加，從而提高了癌癥形成的機會[1]。本研究通過檢測HELQ蛋白在原發性肝細胞性肝癌中的表達情況，并分析原發性肝細胞性肝癌患者的臨床病理特征和HELQ蛋白表達的相關性，探討HELQ蛋白在原發性肝細胞性肝癌發生發展中的作用機制。

1　材料與方法

1.1一般資料

收集江西省腫瘤醫院收治的原發性肝細胞性肝癌患者單純手術切除的癌組織標本71例，年齡32～72歲，平均(45.0±4.5)歲，男性65例，女性6例。所有患者術前均未接受放射治療、化學治療及射頻消融治療，術后腫瘤組織標本經病理檢查診斷為原發性肝細胞性肝癌。

1.2方法

兔抗人HELQ蛋白多克隆抗體免疫組化試劑盒購自(美國Novus biologicals公司)。對原發性肝細胞性肝癌的組織石蠟塊進行4 μm連續切片，經過二甲苯脫蠟后，過氧化氫滅活內源性過氧化物酶，構櫞酸鹽緩沖液(PH=6.0)進行熱抗原修復，滴加 HELQ蛋白抗體(滴度為1∶300)于標本玻片上，置于濕盒內4 ℃冰箱過夜。復溫至室溫，PBS洗去多余的HELQ蛋白抗體，滴加Maxvision二抗試劑，濕盒內室溫孵育1 h；以磷酸鹽緩沖液(PBS)替代抗體為陰性對照。DAB光鏡下監控顯色，出現淡黃色顆粒時終止顯色，蘇木精復染，封片。顯微鏡下觀察及其分析記錄實驗結果。結果采用免疫組化半定量法[2]，用染色強度聯合陽性細胞百分比進行評分：染色強度分為：0分，陰性；1分，弱陽性；2分，中度；3分，強陽性；陽性細胞百分比分級：陽性細胞0%，0分；0%～25%，1分；25%～50%，2分；50%～75%，3分；>75%，4分。染色強度和陽性細胞百分比評分分為4個等級：0分為陰性，1～3分為+，4～8分為++，9～12分為+++。

1.3統計學處理

應用SPSS 16.0統計軟件進行分析，采用χ2檢驗分析HELQ蛋白表達與原發性肝細胞性肝癌臨床病理特征之間的相關性。P<0.05為差異有統計學意義。

2　結果

HELQ蛋白在原發性肝細胞性肝癌中陽性表達率為30.99%，HELQ蛋白陽性表達與原發性肝細胞性肝癌患者的腫瘤大小、衛星灶、腫瘤Edmonson-steiner分級、血清AFP水平、TNM分期具有顯著相關性(P<0.05)，HELQ蛋白陽性表達與原發性肝細胞性肝癌患者的性別、年齡、包膜受侵、門靜脈癌栓脈和脈管浸潤無顯著相關性(P>0.05)，見表1。

3　討論

我國為原發性肝細胞性肝癌高發地區，無論是原發性肝細胞性肝癌發生、發展還是轉移和復發的防治均是當前研究的熱點和重點，研究表明原發性肝細胞性肝癌發生發展過程都需借助于其細胞核內的活性分子之間的一系列相互作用，促進腫瘤細胞的增殖，調節腫瘤的生長。本究通過檢測原發性肝細胞性肝癌腫瘤組織HELQ蛋白表達和其臨床病理參數關系，探索HELQ蛋白在原發性肝細胞性肝癌表達臨床意義，探索HELQ蛋白在原發性肝細胞性肝癌的診斷和預測預后中臨床價值。

HELQ因子是近年來發現的1種多功能DNA解螺旋酶，能催化雙鏈DNA沿3-5’方向解螺旋功能酶，在DNA損傷修復及維護基因組穩定性中起著重要作用,HELQ(又名Hel308)是1種核因子，其基因定位于4q21，蛋白質相對分子量為124.5 kDa，由1101個氨基酸構成[3-4]。HELQ因子可幫助修復細胞增殖時DNA復制過程中所發生的所有的DNA損傷，維持肝細胞穩定。如果這一基因缺失或發生缺陷，DNA錯誤就有可能增加，從而提高了癌癥形成的機會[5]。本研究檢測結果顯示HELQ蛋白的表達隨著原發性肝細胞性肝癌患者的腫瘤增大、衛星灶增加和腫瘤Edmonson-steiner分級、血清AFP水平增加而減少，表明HELQ蛋白在原發性肝細胞性肝癌中起著抑癌基因的作用，有研究證實原發性肝細胞性肝癌當其腫瘤直徑超過3 cm時腫瘤的分化程度將會降低，腫瘤的惡性程度和侵襲能力將會升高，同時研究結果表明HELQ蛋白表達的缺失與原發性肝細胞性肝癌的增殖能力的指標密切相關。對于其功能引起原發性肝細胞性肝癌發生機制的研究目前還處于起步階段，仍需要進行更多的實驗以證實。英國癌癥研究中心倫敦研究所發現缺失HELQ基因一個拷貝的小鼠其形成卵巢癌的可能性提高2倍，甚至缺失僅一個拷貝也足以導致小鼠形成更多的腫瘤,進一步研究是否能做為卵巢癌的治療靶點[6]。因此HELQ在腫瘤生長中起著十分重要的作用。同時研究表明HELQ蛋白的表達與原發性肝細胞性肝癌的脈管浸潤，門靜脈癌栓無關，可能與原發性肝細胞性肝癌的轉移浸潤的機制與HELQ基因的調控途徑不同，需要進一步研究。

表1　HELQ蛋白表達水平與原發性肝細胞性肝癌臨床病理特征的關系/例

深入地研究HELQ 基因功能將有助于闡明原發性肝細胞性肝癌的發病機制，進一步探索HELQ 基因是否與原發性肝細胞性肝癌的抑癌基因，進而為今后更準確地治療原發性肝細胞性肝癌提供新的靶點。

[1]Alabert C,Bukowski-Wills JC,Lee SB,et al.Nascent chromatin capture proteomics determines chromatin dynamics during DNA replication and identifies unknown fork components〔J〕.Nat Cell Biol,2014,16(3):281.

[2]許良中,楊文濤.免疫組織化學反應結果的判斷標準〔J〕.中國癌癥雜志，1996，6(4)：229.

[3]Adelman CA,Lolo RL,Birkbak NJ,et al.HELQ promotes RAD51 paralogue-dependent repair to avert germ cell loss and tumorigenesis〔J〕.Nature,2013，502(7471):381.

[4]Muzzini DM,Plevani P,Boulton SJ,et al.Caenorhabditis elegans POLQ-1 and HEL-308 function in two distinct DNA interstrand cross-link repair pathways〔J〕.DNA Repair (Amst),2008,7(6):941.

[5]Huehls AM,Wagner JM,Huntoon CJ,et al.Identification of DNA repair pathways that affect the survival of ovarian cancer cells treated with a poly(ADP-ribose) polymerase inhibitor in a novel drug combination〔J〕.Molec Pharmacol,2012,82(4):767.

[6]Meindl A,Eirich K,Engert S,et al.Germline RAD51C mutations confer susceptibility to ovarian cancer〔J〕.Nature Genet,2012,44(5):475.

(編輯：吳小紅)

Clinical Significance of HELQ Protein in Primary Hepatocellular Carcinoma

LIU Fangping,ZHENG Sufang,LUO Qingfeng,et al.

Wannian Hospital of Traditional Chinese Medicine,Shangrao,335500

ObjectiveTo investigate the correlation of HELQ protein expression and clinicopathological features and prognosis of primary hepatocellular carcinoma(HCC).MethodsImmunohistochemistry staining was used to detect HELQ protein expression in 71 cases of primary hepatocellular carcinoma.ResultsThe positive expression rate of the MORC2 protein was 30.99% in the 71 primary hepatocellular carcinoma cases,there had significant relation between the positive rate of the HELQ protein and size,satellite focal,Edmonson-steiner grade,AFP of blood,and TNM stage of the primary hepatocellular carcinoma (P<0.05).There had no significant relation between the positive rate of the HELQ protein and age,sex,tumor capsule invasion,invasion of portal vein(PV)and vessel of the primary hepatocellular carcinoma.ConclusionHELQ protein expression decreases in the primary hepatocellular carcinoma,and it is a tumor suppressor gene of the primary hepatocellular carcinoma .

Primary hepatoceIlular carcinoma；HELQ protein；Tumor suppressor gene

江西省衛生廳基金項目(編號：20164068)

335500 江西萬年縣中醫院(劉芳平,鄭素芳)；330029 江西省腫瘤醫院(羅慶豐,高文,饒華民)

鄭素芳

10.3969/j.issn.1001-5930.2016.08.002

R735.7

A

1001-5930(2016)08-1222-03

2016-03-08

2016-03-21)