黃體酮對妊娠絨毛表達肝素結合性表皮生長因子的影響

劉素菊,劉衛艷,蘭紅賀,馬慧娟，李　杰

(一汽總醫院 婦產科,吉林 長春130011)

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黃體酮對妊娠絨毛表達肝素結合性表皮生長因子的影響

劉素菊,劉衛艷,蘭紅賀,馬慧娟，李杰*

(一汽總醫院 婦產科,吉林 長春130011)

早孕期流產是產科并發癥之一，影響者很多女性的生殖健康。其中自然流產率為10%到15%，且80%為早期流產，40%-60%為不明原因的流產。流產有著較為復雜的病因，如環境飲食因素、血型不合、生殖道的解剖畸形、胚胎染色體異常、免疫因素、感染性疾病、內分泌失調等。HB-EGF是近年來發現的一種肽類生長因子，該因子與早期妊娠及女性生殖等關系密切。據研究HB-EGF與妊娠著床相關，導致妊娠子宮內膜容受性差，從而引起胚胎種植失敗，使臨床妊娠率降低[1]。據報道肝素結合性表皮生長因子為著床窗期必須的重要參與因子，該因子在著床期可直接進行調控胚胎著床[2]。Stavreus-Evers等[3]研究了人類胚胎種植窗期子宮內膜中HB-EGF和胞飲突的關系，證實肝素結合性表皮生長因子參與者人類胚泡著床時受精卵的黏附和穿透，并為重要參與因子之一。另有報道，肝素結合性表皮生長因子增進間質細胞及子宮內膜細胞增殖，促進分泌中期的高表達及介導胚泡著床，促使滋養層細胞的生長、分化，進而侵入子宮內膜，維持胎盤的形成和成功妊娠[4]。綜合上述，可見在妊娠早期，肝素結合性表皮生長因子扮演者十分重要的角色。本研究是采用免疫組化技術方法檢測黃體酮保胎治療后妊娠絨毛中HB-EGF表達水平，探討黃體酮是否可對體內HB-EGF表達有影響。

1　資料和方法

1.1資料來源

選用2013年1月至2015年01月在吉林大學第四醫院(一汽總醫院)婦產科就診患者，選取正常妊娠絨毛組織20例作為對照組，同時期正常妊娠通過黃體酮治療保胎的絨毛組織20例作為實驗組，采用免疫組化方法檢測各組絨毛組織中HB-EGF的表達。分組依據及診斷標準以豐有吉主編的《婦產科學》(第2版)作為參考，組間年齡均值及妊娠天數無明顯差異(P>0.05)；所有研究對象均無吸煙及孕期大量服藥史；無孕期感染史；無輸血及免疫治療史；無其他妊娠合并癥及并發癥。

1.2方法

1.2.1標本的采集及制備由同一術者采用400-500mmHg負壓吸宮術將妊娠絨毛完整吸出，取出后5min內使用生理鹽水沖洗后，用10%福爾馬林固定液固定，固定24h后，石蠟包埋、切成厚度約4μm切片。1.2.2檢測方法使用兔抗人HB-EGF多克隆抗體進行1∶100稀釋，免疫組織化學SP-9710及DAB試劑盒，操作過程嚴格依照試劑盒的使用說明書進行、DAB顯色、蘇木精復染、光學顯微鏡下觀察。

1.3結果判定

在光學顯微鏡下觀察組織切片的顯色，以鏡下觀察到細胞漿內及細胞膜淡黃至棕黃色顆粒為標準，著色強度高于背景非特異性染色者為陽性。評估標準依照陽性細胞百分率及染色強度得分之和進行判定。染色強度:0 分為無(不著色)；1分為弱陽性(淡黃色) ；2分為中等陽性(黃色) ；3分為強陽性(棕黃色)。 陽性細胞百分率:無陽性細胞判定為0分；陽性細胞總數小于25%判定為1分；陽性細胞數介于25%到50%之間者判定為2分；陽性細胞總數介于50%至75%之間者判定為3分；陽性細胞數大于75%判定為4分。兩項之和:0分為(-)，2分為(+)，3-4分為(++)，5-7分為(+++)。

1.4統計學方法

統計學軟件選用SPSS17.0對實驗數據進行統計學分析，等級資料采用秩和檢驗。P<0.05 為差異有統計學意義。

2　結果

HB-EGF在正常妊娠絨毛組織中表達顯著低于經黃體酮保胎治療后妊娠絨毛組織中表達，兩組間差異具有統計學意義(P<0.05)；結果見表1。

表1　HB-EGF在正常妊娠組與黃體酮保胎治療組妊娠絨毛組織中的表達

經計算 χ2=11.127，P<0.05。可以說明實驗組與對照組之間存在統計學差異。

3　討論

肝素結合性表皮生長因子(HB-EGF)廣泛分布于人體的多種組織中，它可以由平滑肌細胞、巨噬細胞等分泌產生，具有廣泛的生物學作用[5]。研究發現，HB-EGF與EGF有相類似的生物學活性，有著較強的促細胞分裂活性，和肝素親和性強[6]。肝素結合性表皮生長因子在子宮內膜、早孕絨毛等組織中均有表達，增加子宮內膜生長及分化，介導胚泡的黏附與著床、維持胎盤功能，并參與骨骼肌發育、腎小管形成及組織修復及多種腫瘤的形成[7]。

經研究早期妊娠流產患者滋養細胞中肝素結合性表皮生長因子表達顯著低于正常妊娠者，這與滋養細胞的增殖抗原PCNA表達正相關，這提示我們滋養細胞增殖被其抑制，而滋養細胞對缺氧的耐受及血管發育不良不利于胚胎及胎盤發育，直接影響早期妊娠流產[8]。可見，肝素結合性表皮生長因子是一種重要的妊娠相關蛋白，它通過參與孕早期的胚胎著床與植入、促進囊胚發育、維持胎盤功能，為早期妊娠成功發揮重要作用。目前HB-EGF通過什么樣的機理在異常妊娠流產中發揮作用，尚不明確，妊娠早期體內的HB-EGF表達不足，可導致胎盤形成不良，從而致流產。對妊娠流產患者體內肝素結合性表皮生長因子表達的研究仍處于起步探索階段，該因子是否為流產發病的決策性因素，其能否作為流產的預測性指標，未來人重組HB-EGF能否作為流產的治療手段等等，這些均有待于進一步探討與驗證。那些多次胚胎著床失敗所引起的不孕,是否存在肝素結合性表皮生長因子(HB-EGF)的缺陷，應用重組人肝素結合性表皮生長因子是否可以有效改善妊娠的結局,這也將是生殖醫學研究的新領域。

HB-EGF在妊娠中扮演者重要角色，而黃體酮治療通過某些機制促進該因子高表達，從而提高妊娠的成功率，從而為早期流產患者帶來福音。黃體酮作為臨床常用的一線保胎藥物之一，其作用機制除了目前我們已經掌握的機制外，是通過什么樣的途徑促進體內肝素結合性表皮生長因子(HB-EGF)高表達，促使早期妊娠的著床、粘附等，起到保胎意義，從而減少自然流產的發生，有待大樣本臨床研究進一步證實。

[1]HannaA,ArielR.Endometrialreceptivitymarkes,thejourneytosuccessfulembryoimplantation[J].HumanReproductionUpdate,2006,12(6):731-746.

[2]李巍,岳瑛,李杰,等.自然流產患者絨毛組織中肝素結合性表皮生長因子免疫組化分析[J].中國實驗診斷學,2008,12(10):1244.

[3]StavreusEversA,AghajanovaL,BrismarH,etal.Co-existenceOfheparinbindingepidermalgrowthfactor-likegrowthfactorandpinopodesinhumanendometriumatthetimeofimplantation[J].MolHumReprod,2002,8(8):765.

[4]HannaA.ArielR.Endometrialreceptivitymarkes.thejourneytosuccessfulembryoimplantation[J]HumanReproductionUpdate,2006.12(6):731．

[5]ZhengL,QiT,YangD,etal.MicroRNA-9suppressestheproliferation,invasionandmetastasisofgastriccancercellsthroughtargetingcyclinD1andEts1[J].PLoSOne,2013,8(1):50.

[6]GuoLM,PuY,HanZ,etal.MicroRNA-9inhibitsovariancancrcellgrowththroughregulationofNFkappaB1[J].FEBSJ,2009,276:5537-5546.

[7]BartelDP.MicroRNAs:genomics,biogenesis,mechanismandfunction[J].Cell,2004,116:281-297.

[8]胡昌東,歸綏琪.自然流產患者滋養細胞肝素表皮生長因子的表達及意義[J].上海醫學,2004,27(7):491.

1007-4287(2016)08-1329-02

2015-08-14)