結腸癌相關轉錄因子-1在胃腺癌中的表達及意義

趙云波,呂紅梅

(1.佳木斯大學附屬第一醫院 普外三科，黑龍江 佳木斯154002;2.黑龍江中醫藥大學佳木斯學院)

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結腸癌相關轉錄因子-1在胃腺癌中的表達及意義

趙云波1,呂紅梅2*

(1.佳木斯大學附屬第一醫院 普外三科，黑龍江 佳木斯154002;2.黑龍江中醫藥大學佳木斯學院)

在世界范圍內，胃癌是第四大最常見的癌癥，也是癌癥死亡的第二大原因，近年來我國胃癌發病率逐年增加[1，2]。結腸癌相關轉錄因子-1(CCAT-1)是一個擁有2628核苷酸分子的長鏈非編碼RNA，新近發現CCAT-1在胃癌組織、癌旁組織中高度表達[3]。目前國內還沒有關于正常胃組織、胃癌組織、癌旁組織、幽門螺桿菌陰性和陽性及腫瘤分期患者中CCAT-1表達方面的研究，并且本研究排除新輔助化療的病人，以消除化療對CCAT-1表達的潛在影響。

1　資料與方法

1.1一般資料

35例胃腺癌標本(均經術后病理證實并進行回顧，以確定腫瘤分期)取自2013年1月-2014年12月接受手術切除的病人，其中男26例，女9例，年齡24-89歲(平均56.1±8.5歲)，取胃腺癌病人的腫瘤組織和癌旁組織，T2期11例，T3期18例，T4期6例；30例正常胃組織(正常對照組)取自同期患上消化道穿孔行胃大部切除術的病人，其中男11例，女19例，年齡18-39歲(平均24.4±7.2歲)，幽門螺旋桿菌感染陽性12例，陰性18例。

1.2方法

標本取材后，先置于液氮中冷凍1h,快速取出后置于-80 ℃冰箱中保存待測.實時定量PCR試劑盒(南京生興生物技術有限公司),單鏈cDNA合成試劑盒(上海碩盟生物科技有限公司)，RNA提取(TRIzol,GibcoBRL)DNA純化試劑盒(北京博大生物科技有限公司),實時定量PCR儀(Rocher)。引物由美國應用生物系統公司合成，產物長度為176bp。GAPDH作為對照基因。

CCAT-1：5′-TCACTGACAACATCGACTTTGAAG-3′,3′-GGAGAAAACGCTTAGCCATACAG-5′。用TRIzol提取組織總RNA[4]。總RNA提取之后,測得各管內所提總RNA的濃度和純度[5]。各管均取2μg總RNA,逆轉錄總反應體系25μl,用M-MLV逆轉錄酶42 ℃逆轉錄1h,合成cDNA。PCR反應用美國應用生物系統公司QRT-PCR熱循環儀進行。QRT-PCR程序運行40個循環，之后在95℃ 10min的初始孵育。每個循環包括95℃×15s。和60℃×1min。結果進行了分析CCAT-1的相對量(RQ)的表達。

1.3統計學方法

數據應用SSPS18.0軟件進行統計學處理,組間統計采用獨立樣本t檢驗及單因素方差分析進行比較。以P<0.05為差異具有統計學意義。

2　結果

2.1CCAT-1mRNA在胃腺癌組織、癌旁組織和正常胃組織中的表達

胃腺癌組織、癌旁組織中CCAT-1mRNA水平顯著高于正常胃組織,具有統計學差異(見表1)；30例正常胃組織中幽門螺桿菌陰性和陽性患者中CCAT-1mRNA表達無顯著差異，見圖1；在35例胃腺癌病人的CCAT-1mRNA表達與TNM分期沒有達到統計學意義，見圖2。

表1　CCAT-1mRNA在胃腺癌、癌旁組織和正常胃組織中的表達水平

圖1　胃組織中CCAT-1 mRNA的水平與Hp感染的關系

圖2　胃癌組織中CCAT-1 mRNA的水平與分期的關系

3　討論

胃癌預后同早期診斷、早期治療、腫瘤分期密切相關，但是在我國，超過80%的患者在診斷時已是中晚期胃癌，病人預后差[6,7]。故生存率的提高取決于密切監測患癌高風險人群和新治療策略的應用。近年來，全基因組和轉錄組測序的證據表明，長鏈非編碼RNA(lncRNAs)屬于基因組中非編碼部分，其非編碼部分在腫瘤發生、發展中起到關鍵作用[8]。lncRNAs在各種癌癥中過度表達，能夠起到基因樣的作用的lncRNAs是結腸癌相關轉錄-1(CCAT-1)[9]。崔戈發現CCAT-1在結腸癌顯著過度表達。最近的一項研究顯示，在胃癌組織中，發現在CCAT-1的啟動子區域c-MYC直接結合E-box元素，并且當CCAT-1異位表達時，能增加啟動子活性和CCAT-1的表達[11]。此外，c-MYC是一種重要的原癌基因,它具有促進細胞增殖和腫瘤血管生成的作用[12],可降低基因組穩定性,并且與細胞分化、凋亡及周期調控密切相關,CCAT-1可能為c-MYC誘導核抗原,是Myc的靶基因,異常表達能促進細胞增殖和遷移[13]。

本研究結果表明，胃癌組織中CCAT-1的表達水平大約是健康胃組織中的12倍(RQ=21.91±5.31和1.58±0.48,P<0.001)，胃癌組織中CCAT-1的表達水平與癌旁組織比較無統計學意義(21.91±5.31、18.22±1.50， P=0.243)。雖然幽門螺桿菌感染的存在被認為是一個胃癌發生、發展的主要危險因素[14]，但本研究顯示，正常胃組織中幽門螺桿菌陰性和陽性患者中CCAT-1mRNA表達無顯著差異(RQ= 2.22±0.27與1.92±0.47，P=0.061)。因在我們的研究中沒有進行癌前病變及早期胃癌組織中CCAT-1表達水平的測定，病人均為中晚期胃癌，故導致本研究結果胃癌病人的CCAT-1mRNA表達與TNM分期沒有達到統計學意義(T4-RQ=23.42±2.07，T3-RQ=22.57±3.46，T2-RQ=22.15±2.59，P>0.05)。

我們相信，CCAT-1具有成為一種胃癌生物標志物的潛力，對提高胃癌的早期診斷和動態監測以及靶向分子治療有重要作用，但需要大規模的研究胃癌的各個階段CCAT-1的表達水平，并研究CCAT-1參與胃癌癌變的確切分子機制。

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