結腸癌組織中Mcl-1蛋白的表達變化及意義

趙靜，呂小梅，楊玉華，劉焱，劉宏遠（石家莊市第一醫院，石家莊050011）

結腸癌組織中Mcl-1蛋白的表達變化及意義

趙靜，呂小梅，楊玉華，劉焱，劉宏遠
（石家莊市第一醫院，石家莊050011）

目的 觀察Mcl-1在結腸癌組織及癌旁正常組織中的表達變化，并探討其意義。方法 選取80例結腸癌組織標本及癌旁（距離癌組織邊緣10 cm以上）正常結腸組織標本45例，應用免疫組化法檢測Mcl-1蛋白表達，分析Mcl-1蛋白表達與結腸癌患者臨床病理特征的關系。結果 Mcl-1蛋白在結腸癌組織及正常結腸黏膜組織中陽性表達率分別為77.5%、22.22%，兩者比較，P＜0.05。結腸癌組織中Mcl-1表達與腫瘤分化程度、臨床分期及淋巴結轉移有關（P＜0.05），與性別、年齡及腫瘤大小無關（P均＞0.05）。結論 Mcl-1蛋白在結腸癌組織中呈高表達，檢測Mcl-1蛋白表達有助于結腸癌預后判斷。

結腸腫瘤；Mcl-1蛋白；免疫組化法

結腸癌是我國常見惡性腫瘤之一，發病率較高［1］，受遺傳因素和環境因素等多種因素的影響。現有治療方法包括腫瘤切除術、藥物的化療等均未徹底阻止結腸癌的自然進展過程。腫瘤的基因治療是目前研究熱點。Mcl-1是新近發現的凋亡調控基因［2～4］，是bcl-2家族的成員之一。Mcl-1過表達可引起在人類造血系統的腫瘤及多種實體瘤，Mcl-1蛋白表達下調可促進腫瘤細胞的凋亡，提示Mcl-1是人類多種腫瘤的潛在治療靶點。2015年1～4月，我們應用免疫組化技術檢測大腸癌及其癌旁組織中抗凋亡基因Mcl-1蛋白的表達情況，探討Mcl-1在結腸癌發生發展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集石家莊市第一醫院2011～2013年間手術切除的結腸癌組織標本80例，癌旁（距離癌組織邊緣10 cm以上）正常結腸組織標本45例作為對照。結腸癌患者中男49例、女31例。年齡35～85歲，中位數年齡60歲。所選取病例術前均未進行放化療。結腸癌的臨床病理分期對照國際抗癌聯盟腫瘤TNM分期標準完成，其中Ⅰ期4例，Ⅱ期18例，Ⅲ期32例，Ⅳ期26例。組織學分級為高分化腺癌15例，中分化腺癌27例，低分化腺癌38例。無淋巴結轉移20例，有轉移40例。腫瘤直徑＞5 cm者34例，≤5 cm者46例。

1.2 Mcl-1蛋白檢測方法 取結腸癌組織及癌旁正常組織標本，應用免疫組化SP法檢測Mcl-1蛋白表達。Mcl-1蛋白染色以細胞質或細胞核中出現淡黃色至棕黃色顆粒為陽性，根據陽性細胞染色強度及陽性百分率分別計分，染色強度：不著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細胞百分率：每張切片隨機觀察5個視野，數500個細胞中陽性細胞所占比例，陽性細胞數＜10%計0分，10%～30%計1分，31%～60%計2分，陽性細胞≥60%為3分，兩項評分相加為綜合評分，綜合評分＞2分計為陽性，≤2分計為陰性。免疫組化結果由2位病理科醫師獨立閱片判定。

1.3 統計學方法 采用SPSS19.0統計軟件。率的比較采用卡方檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Mcl-1蛋白在結腸癌組織及癌旁正常組織中的表達比較 Mcl-1蛋白在結腸癌組織和癌旁正常結腸黏膜組織中均有表達（圖1），其中80例份結腸癌組織標本中有62例份Mcl-1蛋白陽性表達（陽性率為77.5%），45例份癌旁正常組織中有10例份Mcl-1蛋白陽性表達（陽性為22.22%），Mcl-1蛋白在結腸癌組織和癌旁正常黏膜組織中的陽性表達率比較差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 Mcl-1蛋白表達與結腸癌患者臨床病理特征的關系 Mcl-1蛋白表達與結腸癌患者的性別、年齡、腫瘤大小均無明顯相關性（P均＞0.05），但與腫瘤的分化程度、臨床分期及淋巴結轉移有關（P均＜0.05），見表1。

圖1 Mcl-1蛋白在結腸癌組織及癌旁正常結腸黏膜組織中的表達

表1 Mcl-1蛋白表達與結腸癌患者臨床病理特征的關系

3 討論

Mcl-1是Bcl-2家族成員的抗凋亡蛋白，其在用佛波酯誘導人髓系白血病細胞系ML-1沿單核/巨噬細胞途徑分化過程中，作為早期誘導基因被首次發現的，Mcl-1基因定位于人染色體1q21，含有3個外顯子和2個內顯子，其在細胞分化、凋亡中起重要作用，并在腫瘤疾病及其癌前病變中有重疊或重排現象［5］。Mcl-1主要功能是維持線粒體膜穩定，抑制細胞色素C的釋放，從而促進細胞的生存，阻止細胞凋亡，其具有在包括細胞毒制劑作用等各種誘導細胞凋亡的條件下，延長造血細胞的生存能力，同時亦是腫瘤細胞生存的關鍵因子。利用Mcl-1 ASO可引起表達Mcl-1腫瘤細胞的凋亡，表明Mcl-1過表達可促進惡性腫瘤細胞生存。研究表明，Mcl-1蛋白表達的調控可發生在多水平上，包括轉錄、轉錄后水平及翻譯、翻譯后水平的調節。不同的腫瘤細胞Mcl-1基因表達的調節及相關信號途徑亦不同。主要包括核內信號途徑JAK/STAT通路、MAPK通路和胞質內信號傳遞通路PI-3K信號途徑。阻斷信號途徑可致細胞凋亡并能減低Mcl-1表達，提示Mcl-1可作為臨床抗腫瘤治療新的靶點［6］。

Mcl-1在許多腫瘤組織如白血病、宮頸癌、肝癌中都存在過度表達現象，提示，Mcl-1與腫瘤的發生密切相關［7］。此外，Mcl-1與多發性骨髓瘤的復發、慢性淋巴細胞白血病和結腸癌肝轉移的耐藥有關。Fleischer等［8］研究表明，肝癌組織中Mcl-1表達過量，采用PI-3K/AKT抑制劑LY294002可迅速下調肝癌細胞內Mcl-1水平，并增加肝癌細胞對化療藥物的敏感性，提示Mcl-1與肝癌的發生和耐藥有關，并可能是肝癌基因治療的一個靶點。在正常宮頸組織向宮頸癌演變過程中Mcl-1表達水平逐漸增加，此實驗結果提示Mcl-1的抗凋亡及促生長作用。Mcl-1表達水平與宮頸癌的分化負相關，這說明Mcl-1的表達檢測可為宮頸癌的預后提供參考。Saxena等［9］使用Western blotting法檢測51例初治慢性淋巴細胞性白血?。–LL）患者和16例對照者，分析了Mcl-1表達情況，發現經治療完全緩解與部分緩解的患者較未緩解者Mcl-1水平明顯降低，提示Mcl-1可作為CLL潛在療效和預后的指標。

Puma、Bim、Bcl-2等在結腸癌中的表達及意義國內外均有相關報道［10，11］，而同為Bcl-2家族成員的Mcl-1蛋白在結腸癌中的表達國內外研究較少且結論不一。2010年，Evita等［12］在123例結腸組織中（103例結腸癌，8例腺瘤，14例正常組織）檢測了Mcl-1和p-akt，結果顯示兩種蛋白在結腸癌中的表達均高于正常和腺瘤組織，此結果與Krajewski等［13］的研究相反，Krajewski等［13］研究結果顯示Mcl-1在結腸癌中的表達低于正常和腺瘤組織，結果產生分歧的原因可能是選擇偏移，即他們所選病例均是分化差的結腸癌。Evita等［12］研究還顯示，Mcl-1與腫瘤分級、臨床分期及淋巴結轉移有關，但筆者認為此結果需更多的病例樣本進行證實，因為他們所選病例大部分為中分化，且僅9例有轉移。

本研究我們發現，Mcl-1蛋白在結腸癌組織中表達高于正常結腸黏膜組織，兩者差異有統計學意義，此外Mcl-1在不同的臨床分期、不同分化程度的結腸癌組織及有無淋巴結轉移病例中有不同程度的表達，且差異有統計學意義，此與Evita等［12］的研究結果基本一致。提示抑制Mcl-1基因的表達或阻斷調節Mcl-1基因表達的信號途徑能有效誘導細胞凋亡，此可能為臨床腫瘤治療提供了新的藥物干預靶點，Mcl-1蛋白檢測可能成為判斷預后的重要標記和預測因子。

［1］王文娟，高玉彤.PUMA和caspase-3在結直腸癌中的表達及意義［J］.天津醫科大學學報，2011，17（2）：158.

［2］陳文娟，袁長吉，劉念，等.抗凋亡基因MCL-1的研究進展［J］.吉林醫學，2010，31（5）：669.

［3］MaurerU，Charvet C.Glycogen synthase kinase-3 regulates mitochondrial outerm embrane pemeabilization and apoptosis by destabolization of MCL-1［J］.Mol Cell，2006，21（6）：749.

［4］Mills JR，Hippo Y.mTORC1 promotes survival through translational control of MCL-1［J］.Proc Natl Acad Sci RSA，2008，105 （31）：10853.

［5］Foiqht GW，Ryan JA.Designed BH3 peptides with high affinity and specificity for targeting Mcl-1 in cells［J］.ACS Chem Biol，2014，9（9）：1962-1968.

［6］Pennarun B，Kleibeuker JH.Targeting FLIP and Mcl-1 using a combination of aspirin and sorafenib sensitizes colon cancer cells to TRAIL［J］.Pathol，2013，229（3）：410-421.

［7］馮楠，張學軍.Mcl-1基因在腫瘤靶向治療中的研究進展［J］.中華臨床醫師雜志，2009，11（3）：1883-1887.

［8］Fleischer B，Schulze-Bergkamen H，Schuchmann M，et al.Mcl-1 is an anti-apoptotic factor for human hepatocellular carcinoma［J］. Int J Oncol，2006，28（1）：25-32.

［9］Saxena A，Viswanathan S，Moshynska O，et al.Mcl-1 and Bcl-2/ Bax ratio are associated with treatment response but not with Rai stage in B-cell chronic lymphocytic leukemia［J］.Am J Hematol， 2004，75（1）：22-33.

［10］Yuan H，Tu SL，He XJ.Relationship between PUMA and BIM expression in colorectal cancer and tumor invasion，metastasis and prognosis［J］.Zhonghua Wai Ke Za Zhi，2013，51（6）：547-551.

［11］Sinicrope FA，Rego RL.Prognostic impact of bim，puma，and noxa expression in human colon carcinomas［J］.Clin Cancer Res，2008，14（18）：5810-5818.

［12］Evita B Henderson-Jackson，James Helm，Masoumeh Ghayouri，et al.Correlation between Mcl-1 and pAKT protein expression in colorectal cancer［J］.Int J Clin Exp Pathol，2010，3（8）：768-774.

［13］Krajewski S，Bodrug S.Immunohistochemical analysis of Mcl-1 protein in human tissues.Differential regulation of Mcl-1 and Bcl-2 protein production suggests a unique role for Mcl-1 in control of programmed cell death in vivo［J］.Am J Pathol，1995，146（6）：1309-1319.

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.25.020

R735.35

B

1002-266X（2016）25-0059-03

石家莊市科學技術與發展指導計劃課題（141462183）。

2015-12-10）