胃癌組織中CyclinD1、CDC25B的表達變化及意義

王軍，趙醒，趙宇陽，趙楊，劉成一，申興斌，李春輝（承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院，河北承德067000）

胃癌組織中CyclinD1、CDC25B的表達變化及意義

王軍，趙醒，趙宇陽，趙楊，劉成一，申興斌，李春輝
（承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院，河北承德067000）

目的 觀察胃癌組織中CyclinD1、CDC25B mRNA及蛋白的表達變化，并探討其意義。方法 收集手術切除胃癌組織標本42例份，同時取距腫瘤邊緣＞5 cm處作為正常黏膜組織。采用RT-PCR法檢測胃癌及正常胃黏膜組織中CyclinD1、CDC25B mRNA表達，采用Western blotting法檢測胃癌及正常胃黏膜組織中CyclinD1、CDC25B蛋白表達，分析CyclinD1、CDC25B表達與胃癌患者臨床病理特征的關系。結(jié)果 CyclinD1、CDC25B mRNA及蛋白在正常胃黏膜組織中的相對表達量均顯著低于胃癌組織（P均＜0.05），CyclinD1、CDC25B蛋白表達與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關（P均＜0.05），胃癌組織中CyclinD1、CDC25B蛋白表達呈正相關（r=0.513，P＜0.05）。結(jié)論胃癌組織中CyclinD1、CDC25B呈高表達，且與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關；檢測二者水平有助于胃癌預后判斷。

胃腫瘤；CyclinD1基因；CDC25B基因

細胞周期素D1（CyclinD1）是調(diào)控細胞周期的重要蛋白，在許多組織的癌變過程中，均檢測到CyclinD1表達上調(diào)，在食管癌［9］、膽管癌［10］等消化道腫瘤中均提示CyclinD1高表達。細胞分裂周期蛋白25B（CDC25B）與人類多種惡性腫瘤相關，在不同腫瘤組織中的檢測證實，在腫瘤生長和細胞惡性轉(zhuǎn)化過程中，CDC25B基因活性增強，過量表達，在消化道腫瘤中亦有類似研究。2014年1月，我們觀察了CyclinD1、CDC25B在胃癌組織中的表達變化，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集本院病理科2008～2014年手術切除胃癌組織標本42例份，患者男31例、女11例，年齡34～84歲，平均59.35歲。患者均為首次接受手術治療，術前未行任何放療及化療，術后病理檢查證實均為胃腺癌。高分化15例、中分化13例、低分化14例。同時取距腫瘤邊緣（＞5 cm）處組織作為正常黏膜組織。標本均液氮保存。

1.2 胃癌及正常胃黏膜組織中CyclinD1、CDC25B mRNA表達檢測 采用RT-PCR法。β-actin上游引物為5′-CATGTACGTTGCTATCCAGGC-3′，下游引物為5′-CTCCTTAATGTCACGCACGAT-3′，β-actin擴增片段大小為250 bp。CyclinD1上游引物為5′-CACACGGACTACAGGGGAGTT-3′，下游引物為5′-GCTCTTTTTCACGGGCTCCA-3′，CyclinD1擴增片段大小為313 bp。CDC25B上游引物為5′-GACAGCGACTTGCTGCTCAA-3′，下游引物為5′-ATAGGGCTGGGGGAATCCAT-3′，CDC25B擴增片段大小為416 bp。用細胞裂解液將各組細胞裂解，用TRIzol、氯仿和異丙醇提取各組細胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。逆轉(zhuǎn)錄反應條件：30℃、10 min；42℃、30 min；99℃、5 min；5℃、5 min。逆轉(zhuǎn)錄反應體系10 μL。DNA Ladder 6 μL及擴增產(chǎn)物20 μL進行4%瓊脂糖凝膠電泳（120 V，45 min），采用ZF型紫外透射反射分析儀攝像，采用Quantity one4.62軟件統(tǒng)計各條帶的積分光密度值，以積分光密度值比值分析兩組間差異。

1.3 胃癌及正常胃黏膜組織中CyclinD1、CDC25B蛋白表達檢測 采用Western blotting法。將新鮮胃及胃癌組織剪碎，加入苯甲基磺酰氟，提取總蛋白，SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，半干轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉的TTBS封閉液中封閉，一抗結(jié)合，過夜，室溫洗膜，每次10 min，共3次，二抗結(jié)合，室溫孵育2 h后曝光，觀察并計算CyclinD1、CDC25B蛋白相對表達量。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件。計量數(shù)據(jù)用±s表示，采用兩獨立樣本t檢驗；胃癌組織中CyclinD1、CDC25B蛋白表達的相關性采用直線相關分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌及正常胃黏膜組織中CyclinD1、CDC25B mRNA表達比較 胃癌及正常胃黏膜組織中CyclinD1 mRNA相對表達量分別為0.85±0.05、0.41 ±0.03，CDC25B mRNA相對表達量分別為0.92± 0.06、0.33±0.02，兩種組織中CyclinD1、CDC25B mRNA表達比較，P均＜0.05。

2.2 胃癌及正常胃黏膜組織中CyclinD1、CDC25B蛋白表達比較 胃癌及正常胃黏膜組織中CyclinD1蛋白相對表達量分別為0.649±0.052、0.267±0.026，CDC25B蛋白相對表達量分別為0.945±0.059、0.385 ±0.044，兩種組織中CyclinD1、CDC25B蛋白表達比較，P均＜0.05。

2.3 CyclinD1、CDC25B蛋白表達與胃癌患者臨床病理特征的關系 詳見表1。胃癌組織中CyclinD1、CDC25B蛋白表達均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關（P均＜0.05）。

表1 CyclinD1、CDC25B蛋白表達與胃癌患者臨床病理特征的關系（±s）

表1 CyclinD1、CDC25B蛋白表達與胃癌患者臨床病理特征的關系（±s）

臨床病理特征nCyclinD1tpCDC25B tp性別男31 0.641±0.0551.026 0.1500.912±0.0890.651 0.355 女11 0.652±0.0470.965±0.089年齡（歲）≤5922 0.639±0.0450.614 0.1300.948±0.0760.085 0.585 ＞5920 0.657±0.0480.941±0.077組織分化程度高分化15 0.636±0.0350.871±0.082中分化13 0.643±0.047 1.639 0.220 0.915±0.052 1.493 0.963低分化14 0.653±0.0520.991±0.090組織浸潤深度未見全層15 0.639±0.0403.812 0.1490.872±0.0493.863 0.581全層27 0.657±0.0590.981±0.051淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無24 0.416±0.0594.281 0.0010.785±0.0393.143 0.043 有18 0.981±0.0621.121±0.094

2.4 胃癌組織中CyclinD1、CDC25B蛋白表達的相關性 CyclinD1、CDC25B蛋白表達呈正相關（r= 0.513，P＜0.05）。

3 討論

胃癌的發(fā)生是一個涉及多種致癌因素的復雜過程，最終導致正常細胞的異常增殖，形成腫瘤包塊。CDC25B是CDC25家族中的重要成員，CDC25B屬于蘇/酪氨酸功能酶，主要發(fā)揮維持細胞正常生理功能的作用，可能與胚胎發(fā)育有關。CDC25家族在1986年被證實為有絲分裂的啟動因子［1，2］，該家族還包括CDC25A和CDC25C。CDC25B基因位于人類染色體20p13，其主要作用體現(xiàn)在細胞周期中，在各種致瘤因素的作用下，CDC25基因被活化，CDC25B蛋白合成增加，使CDK1去磷酸化，進而活化CDK1/CyclinB復合物，結(jié)果是使CDK1/CyclinB復合物由細胞質(zhì)和中心體移到細胞核，通過正反饋作用，細胞核內(nèi)的CDK1/CyclinB復合物完全激活，促進細胞周期由G2期向M期轉(zhuǎn)化［3］。陳彩萍等［4］應用免疫組化染色技術檢測92例三陰性浸潤性導管癌石蠟標本中的CDC25B表達情況，并分析其與三陰性浸潤性導管癌患者的年齡、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預后間的關系，結(jié)果顯示，三陰性浸潤性導管癌中CDC25B存在高表達，與乳腺癌的發(fā)展及預后有關，提示CDC25B有望在判斷三陰性浸潤性導管癌預后方面有重要參考價值。張國君等［5］檢測了CDC25B蛋白在膀胱永生化細胞SV-HUC-1細胞系和膀胱癌BIU-87和T24細胞系中的表達，證實膀胱癌細胞系中CDC25B表達較高。腎癌及大腸癌中亦有研究證實CDC25B高表達［6，7］。本實驗結(jié)果顯示，CDC25B在胃癌組織中表達較正常胃黏膜組織中高，且CDC25B在胃癌組織中的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關，提示高CDC25B可能與胃癌的不良預后有關。

細胞周期紊亂是腫瘤形成的重要決定因素，CyclinD1是調(diào)控細胞周期的重要蛋白，在許多組織的癌變過程中，均檢測到CyclinD1的表達上調(diào)，目前認為，CyclinD1的主要作用是促進細胞周期由G1期進入S期，促進細胞增殖［8］。在食管癌［9］、膽管癌［10］等消化道腫瘤中均提示CyclinD1高表達，與本實驗檢測結(jié)果一致。本研究結(jié)果顯示，CyclinD1在胃癌組織中的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關，進一步證實CyclinD1與胃癌的惡性程度相關。CyclinD1、CDC25B蛋白表達呈正相關說明二者在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能起到協(xié)同作用。

綜上所述，CyclinD1及CDC25B在胃癌組織中呈高表達，且與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關；檢測二者水平可為預后判斷提供信息。

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10.3969/j.issn.1002-266X.2016.25.016

R735.2

B

1002-266X（2016）25-0049-03

河北省醫(yī)學科學研究重點課題暨河北省政府資助優(yōu)秀臨床人才計劃基金項目（ZL20140103）；承德市科學技術研究與發(fā)展計劃項目（20132408）。

李春輝（E-mail：chli612@126.com）

2016-01-24）