胃癌組織中腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD44v6、CD133與OCT3/4的表達(dá)變化及意義

劉鵬軍，張利霞，葛亞強(qiáng)，張中平，薛志新，石紅建（江蘇大學(xué)附屬武進(jìn)醫(yī)院，江蘇常州213002）

胃癌組織中腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD44v6、CD133與OCT3/4的表達(dá)變化及意義

劉鵬軍，張利霞，葛亞強(qiáng)，張中平，薛志新，石紅建
（江蘇大學(xué)附屬武進(jìn)醫(yī)院，江蘇常州213002）

目的 觀察胃癌組織中腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD44v6、CD133與OCT3/4的表達(dá)變化，并探討其意義。方法 收集50例胃癌患者癌組織標(biāo)本及其對應(yīng)的癌旁正常組織標(biāo)本，采用免疫組化法檢測CD44v6、CD133與OCT3/4表達(dá)情況，并分析其與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 胃癌組織中CD44v6、CD133、OCT3/4陽性表達(dá)率高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.01）。CD44v6、CD133與OCT3/4在胃癌組織中的表達(dá)不存在相關(guān)性。CD44v6表達(dá)與胃癌細(xì)胞浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；CD133表達(dá)與胃癌組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；OCT3/4表達(dá)與胃癌細(xì)胞浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。結(jié)論 CD44v6、CD133與OCT3/4在胃癌組織中呈高表達(dá)，三者與胃癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及浸潤等存在一定關(guān)系。

胃癌；腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物；CD44v6；CD133；OCT3/4

腫瘤組織內(nèi)腫瘤干細(xì)胞（CSC）的篩選和鑒定在腫瘤發(fā)生、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮重要作用［1］。目前，已成功自人腦瘤、乳腺癌、肝癌、腎癌、胃癌等患者癌變組織內(nèi)分離、鑒定出CSC［2］。文獻(xiàn)報道胃癌干細(xì)胞表面標(biāo)志物有CD44、CD5、CD133、OCT4及SP等［3］，但尚未發(fā)現(xiàn)某一種標(biāo)記物在胃癌干細(xì)胞內(nèi)特異性表達(dá)，因此，篩選更多的CSC表面標(biāo)記物及標(biāo)記物組合有助于提高CSC篩選的準(zhǔn)確率。2014 年10月～2015年8月，我們采用免疫組化法檢測了胃癌組織中CSC標(biāo)志物CD44v6、CD133與OCT3/4的表達(dá)，探討其在胃癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移中的作用，以期為胃癌的診斷提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集江蘇大學(xué)附屬武進(jìn)人民醫(yī)院2013年12月～2014年12月住院確診的胃癌患者胃癌組織標(biāo)本及對應(yīng)的癌旁（距離癌組織2.5 cm）正常組織標(biāo)本。共納入患者50例，其中男22例、女28例，年齡32～69歲，平均45.2歲。術(shù)后標(biāo)本經(jīng)病理檢查首次確診，其中高分化13例，中分化19例，低分化18例。排除術(shù)前接受放化療或免疫治療的患者。患者均簽署知情同意書，本研究通過醫(yī)院倫理委員會審批。

1.2 CSC表面標(biāo)志物CD44v6、CD133與OCT3/4表達(dá)檢測 采用免疫組化法。鼠抗人CD44v6、CD133與OCT3/4購自Abcam公司，免疫組化按照SP試劑盒檢測，嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作，樣本經(jīng)福爾馬林（10.0%）固定，石蠟包埋，常規(guī)脫蠟、脫水，抗原修復(fù)，添加一抗、二抗后DAB顯色，對比染色封片，PBS代替一抗為陰性對照。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性結(jié)果，結(jié)果判斷由兩位培訓(xùn)過的病理學(xué)醫(yī)師根據(jù)染色強(qiáng)度進(jìn)行盲法評定。每張切片隨機(jī)選取低倍鏡（×200）下10個視野。染色強(qiáng)度評判根據(jù)既往文獻(xiàn)為基礎(chǔ)：0分，不著色；1分，淺粉色或黃色；2分，粉色或棕黃色；3分，紅色或黃褐色。1分以上即判為陽性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計數(shù)資料采用百分比表示，以卡方檢驗(yàn)進(jìn)行比較；胃癌組織中CD44v6、CD133與OCT3/4表達(dá)的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD44v6、CD133與OCT3/4在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)比較 CD44v6、CD133和OCT3/4主要表達(dá)于胃癌組織細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，而在癌旁組織內(nèi)不表達(dá)。CD44v6在胃癌組織中的陽性表達(dá)率為44.0%（22/ 50），明顯高于癌旁組織中的24.0%（12/50），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。CD133在胃癌組織中的陽性表達(dá)率為44.0%（22/50），明顯高于癌旁組織中的30.0%（15/50），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。OCT3/4在胃癌組織中的陽性表達(dá)率為38%（19/50），癌旁組織中陽性表達(dá)率為32%（16/ 50），二者比較，P＜0.05。

2.2 胃癌組織中CD44v6、CD133與OCT3/4表達(dá)的相關(guān)性分析 CD44v6與CD133（r=0.418）、CD44V6與OCT3/4（r=0.495）、CD133與OCT3/4 （r=0.648）間無明顯相關(guān)性（P均＞0.05）。

2.3 CD44v6、CD133與OCT3/4表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 CD44v6表達(dá)與胃癌患者年齡、癌細(xì)胞浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P均＜0.05）；CD133表達(dá)與胃癌患者癌組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P均＜0.05）；OCT3/4表達(dá)與胃癌患者癌細(xì)胞浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P均＜0.05）。見表1。

表1 CD44v6、CD133和OCT3/4表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系［例（%）］

3 討論

CSC具有高致瘤性、自我更新及分化潛能，在腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮重要作用。其自我更新和增殖能力對腫瘤細(xì)胞的增生、轉(zhuǎn)移尤為重要。此外，該類細(xì)胞還可長期處于休眠狀態(tài)，進(jìn)而對放化療產(chǎn)生抗性。

CD44與腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，參與胃癌淋巴管生成和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移［4，5］。CD44V6是一種CD44的變異體［6］，已證實(shí)其通過介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的黏附與轉(zhuǎn)移，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生［7］。研究表明，CD44v6基因敲除的胃癌細(xì)胞系轉(zhuǎn)移能力受到明顯抑制［8］。本研究結(jié)果顯示，CD44v6在胃癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織，此與既往研究相符。此外，CD44v6表達(dá)與胃癌患者癌細(xì)胞浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。

CD133為一類跨膜蛋白，最初被認(rèn)為是造血干細(xì)胞標(biāo)志物，有研究稱CD133為結(jié)腸癌干細(xì)胞的標(biāo)志物，但研究從人類胃癌組織中分離出胃癌干細(xì)胞的報道鮮見。目前，CD133是否可作為胃癌干細(xì)胞標(biāo)志物尚存在爭議［9］。本研究結(jié)果顯示，CD133在胃癌組織中的陽性表達(dá)率達(dá)到56%，與既往研究相符［10］。而在分化程度低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中CD133陽性表達(dá)率更高，與文獻(xiàn)［11］報道相似。此外，CD133陽性細(xì)胞與胃癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，而且與胃癌患者組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。李亞卓等［12］研究發(fā)現(xiàn)，CD133與Ki-67在胃癌組織中的表達(dá)顯著高于癌旁正常組織，且與腫瘤細(xì)胞分化程度、浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期相關(guān)。CD133可能成為篩選胃癌干細(xì)胞的標(biāo)志物，此為預(yù)測胃癌患者對化療的耐受性提供了依據(jù)。

OCT3/4信號通路在干細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞自我更新中均發(fā)揮一定作用。de Jong等［13］發(fā)現(xiàn)正常成體干細(xì)胞和CSC均能維持OCT3/4表達(dá)，且OCT3/4陽性細(xì)胞可能代表了腫瘤干細(xì)胞。有研究［14］表明，OCT3/4在神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝癌、肺癌等多種疾病癌組織中表達(dá)，參與維持腫瘤細(xì)胞的自我更新。OCT3/4的高表達(dá)可增加胚胎干細(xì)胞發(fā)生腫瘤惡化的可能性，而低表達(dá)可降低其發(fā)生幾率。本研究結(jié)果表明，OCT3/4表達(dá)與胃癌患者癌細(xì)胞浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。

綜上所述，CD44v6、CD133和OCT3/4主要在胃癌組織細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)，而在癌旁組織不表達(dá)或弱表達(dá)。CD133、CD44v6、OCT3/4表達(dá)與胃癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和侵襲能力密切相關(guān)，但其在胃癌腫瘤細(xì)胞多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的具體機(jī)制尚不明確，深入研究其機(jī)制對胃癌藥物的研發(fā)將會產(chǎn)生積極作用。

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常州市武進(jìn)區(qū)科技計劃自助項(xiàng)目（WS201421）。

劉鵬軍（E-mail：liupengjun138@163.com）

2016-01-11）