人結腸癌組織中NIBP、CyclinE和CyclinD1蛋白表達變化及意義

陳楚杰，黃杰安，徐春燕（廣西醫科大學第一附屬醫院，南寧530007）

人結腸癌組織中NIBP、CyclinE和CyclinD1蛋白表達變化及意義

陳楚杰，黃杰安，徐春燕
（廣西醫科大學第一附屬醫院，南寧530007）

目的 觀察結腸癌患者癌組織中NIK-IKK結合蛋白（NIBP）、周期蛋白E（CyclinE）和周期蛋白D1（CyclinD1）表達變化，并探討其臨床意義。方法 收集經外科手術切除及消化內科腸鏡活檢的部分標本130例份，其中正常結腸黏膜、結腸癌各65例份，患者均未接受放化療。采用免疫組織化學SP法檢測結腸癌組織及正常結腸黏膜組織中NIBP、CyclinE和CyclinD1表達，并分析三者陽性細胞表達與結腸癌患者臨床病理特征的關系；采用Pearson或Spearman相關檢驗分析NIBP、CyclinE和CyclinD1表達的相關性。結果 正常結腸黏膜組織與結腸癌組織中NIBP陽性表達率分別為18.46%（12/65）、60.00%（39/65），CyclinD1陽性表達率分別為3.08%（2/65）、56.92%（37/65），CyclinE陽性表達率分別為43.08%（28/65）、89.23%（58/65），兩種組織中NIBP、CyclinD1及CyclinE陽性表達率比較差異有統計學意義（P均＜0.05）。NIBP、CyclinE和CyclinD1表達與結腸癌患者腫瘤浸潤深度、TNM臨床分期、淋巴結轉移和遠處轉移有關（P均＜0.05）。結腸癌組織中NIBP與CyclinE、CyclinD1表達呈正相關（rs分別為0.43、0.32，P均＜0.05），CyclinE、CyclinD1表達呈正相關（rs=0.23，P＜0.05）。結論 NIBP、CyclinE及CyclinD1在人結腸癌組織中呈高表達，三者可能參與了結腸癌的發生發展。

結腸癌；NIK-IKK結合蛋白；周期蛋白E；周期蛋白D1

2011年統計數據顯示，我國女性結腸癌發病率居第3位、男性居第5位，而結腸癌患者病死人數高居所有腫瘤第5位［1］。結腸癌的發生是黏膜上皮受到遺傳和環境等多種因素導致多基因改變及相互作用的結果，本質在于細胞周期調節失控，呈現無限制性的自主分裂與增殖，但其發生發展的確切機制至今尚不明確。細胞周期蛋白（Cyclins）是一個與細胞周期相關的核蛋白家族，其中細胞周期蛋白E （CyclinE）屬G1期的正調節因子，其通過促進G1向S期的轉變，調節組織細胞增殖的作用，研究［2］證實其在腫瘤組織中常表達增強；CyclinD1是細胞周期成分G1期中衡量表達的癌基因，如過量表達可導致G1期縮短、細胞分裂加快，與腫瘤的發生發展密切相關［3］。NIK-IKK結合蛋白（NIBP）是一種支架蛋白，其能將NF-κB經典途徑中的關鍵激活子-IKKp和非經典途徑中的關鍵酶-NIK連接成為三聚體，NIBP在NF-κB經典途徑中發揮激活劑的作用［4］，而NIKK/IKK/NF-κB可調控CyclinD1、D2、D3和E1的表達，但在結腸癌中NIBP是否通過Cyclin參與調控人結腸癌發生發展仍不明了。2015年2～12月，我們采用免疫組化SP方法檢測了NIBP、CyclinE 及CyclinD1在人結腸癌組織與正常腸黏膜中的表達，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集廣西醫科大學第一附屬醫院2015年2～12月未接受放、化療、經外科手術切除及消化內科腸鏡活檢的部分標本130例份，其中距離癌旁10 cm的正常結腸黏膜、結腸癌組織各65例份，患者年齡15～84（55.44±13.32）歲，標本均經病理學確診。其中腫瘤浸潤深度黏膜或肌層23例，深肌層以下42例；TNM分期Ⅰ期9例，Ⅱ期17例，Ⅲ期18例，Ⅳ期21例；淋巴結轉移27例；遠處轉移22例。

1.2 結腸癌組織及正常結腸黏膜組織中NIBP、CyclinE和CyclinD1表達檢測 采用免疫組化染色法。標本均經10%中性甲醛固定，石蠟包埋，連續4 μm切片。按SP法染色，具體步驟參考說明書進行抗原修復，分別用NIBP多克隆抗體、CyclinE和CyclinD1單抗作為一抗4℃過夜，二抗和辣根過氧化物酶孵育后，DAB顯色、蘇木素染核，封片。陽性對照由試劑公司提供，用PBS代替一抗作為陰性對照。用O-lympus顯微鏡及顯微攝像儀對染色組織切片進行觀察。每張切片分別取上、下、左、右及中央共5個區域進行細胞計數，每個區計數100個細胞，共計數500個細胞，對照陽性切片，計算染色陽性細胞（胞膜/胞質/胞核中出現明顯的黃色或黃褐色顆粒視為免疫組化染色陽性）所占比例，綜合染色強度及陽性細胞數量進行半定量分析。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。計數資料采用χ2檢驗或Fisher確切概率法，相關分析采用Pearson或Spearman相關檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 免疫組化染色結果 NIBP主要表達于細胞質和細胞膜，CyclinE和CyclinD1主要表達于細胞核，見圖1。

圖1 NIBP、CyclinE及CyclinD1在結腸癌組織及正常結腸黏膜組織中的表達

2.2 結腸癌組織及正常結腸黏膜組織中NIBP、CyclinE和CyclinD1陽性表達率比較 正常結腸黏膜組織與結腸癌組織中的NIBP陽性細胞表達率分別為18.46%（12/65）、60.00%（39/65），CyclinD1陽性細胞表達率分別為3.08%（2/65）、56.92%（37/ 65），CyclinE陽性細胞表達率分別為43.08%（28/ 65）、89.23%（58/65），兩種組織中NIBP、CyclinD1 及CyclinE陽性細胞表達率比較差異有統計學意義（P均＜0.05）。

2.3 NIBP、CyclinE和CyclinD1表達與結腸癌患者臨床病理特征的關系 NIBP、CyclinE及CyclinD1陽性表達與結腸癌患者腫瘤浸潤深度、TNM臨床分期、淋巴結轉移和遠處轉移有關（P均＜0.05）。見表1。

表1 NIBP、CyclinE及CyclinD1表達與結腸癌患者臨床病理特征的關系（例）

2.4 NIBP、CyclinE和CyclinD1在結腸癌組織中表達的相關性 結腸癌組織中NIBP與CyclinE、CyclinD1表達呈正相關（rs分別為0.43、0.32，P均＜0.05），CyclinE、CyclinD1表達呈正相關（rs=0.23，P ＜0.05）。

3 討論

結腸癌是常見的消化道惡性腫瘤，主要好發于直腸與結腸交界處。近年來數據提示，結腸癌在我國的發病率逐年增加。在腫瘤的惡性增殖中，常伴隨原癌基因的激活，腫瘤細胞內大量周期蛋白的調控失衡［5］。目前已發現Cyclin家族成員A～J10大類，15種亞型。其中CyclinE是參與細胞周期G1/S轉換的重要正性調節因子。柴大敏等［6］研究發現，喉鱗狀細胞癌侵襲轉移的標本中，CyclinE基因表現為強陽性。姚坦等［7］研究膽囊癌患者發現，癌組織中CyclinE陽性表達導致細胞周期的調控異常可能是疾病發生發展的重要特征。而Hanashiro等［8］認為CyclinE對中心體復制起始激酶復合物發揮關鍵調控作用，過度表達則干擾有絲分裂，形成不穩定的染色體，這是誘發腫瘤形成的可能機制之一。Cyclin家族中，CyclinD1是G1期細胞增殖信號的關鍵蛋白，常被視為一種原癌基因。在正常組織中CyclinD1呈恒定表達，在膀胱癌、肺癌、卵巢癌及膽道腫瘤中均呈高表達［9～12］，同時在膽囊癌中CyclinE表達與CyclinD1呈正相關，提示二者可能有一定協同作用［13］。

NIBP是一種支架蛋白，其能將NF-κB經典途徑中的關鍵激活子-IKKp和非經典途徑中的關鍵酶-NIK連接成為三聚體。研究發現，NIK/IKK/NF-κB信號通路在腫瘤發生發展中發揮重要作用，其中重要特征之一就是調控細胞周期蛋白的表達［14］。在本研究中同樣證實，人結腸癌組織中NIBP、 CyclinE及CyclinD1表達明顯高于正常結腸黏膜組織，同時NIBP、CyclinE及CyclinD1陽性表達與腫瘤浸潤深度、TNM臨床分期、淋巴結轉移和遠處轉移有關。NIBP、CyclinE及CyclinD1陽性表達越強，癌組織浸潤深度越深、TNM分期越高、淋巴結轉移和遠處轉移越多，提示NIBP、CyclinE及CyclinD1參與了人結腸癌的侵襲轉移。研究還發現NIBP、CyclinE 及CyclinD1陽性表達三者之間互為正相關。CyclinD1和CyclinE正相關提示CyclinE亦可能是腫瘤發生的早期事件，而NIBP與CyclinE、CyclinD1呈正相關，可能提示NIBP通過NF-κB通路干預了細胞周期，調控CyclinE及CyclinD1表達而參與結腸癌的侵襲轉移與發生發展。

總之，NIBP、CyclinE及CyclinD1在結腸癌組織中高表達提示其參與了結腸癌的發生發展及侵襲轉移過程，NIBP可能通過NF-κB通路調控CyclinE及CyclinD1介導結腸癌的發生發展和侵襲轉移。NIBP、CyclinE及CyclinD1未來可能作為結腸癌預后參考指標及腫瘤的抑制靶點。

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Expression and clinical significance of NIBP，CyclinE and CyclinD1 proteins in human colon carcinoma

CHEN Chujie，HUANG Jiean，XU Chunyan
（The First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University，Nanning 530007，China）

Objective To observe the expression of NIK-IKK binding protein（NIBP），CyclinE and CyclinD1 in the tissues of patients with colon cancer，and to explore its clinical significance.Methods We collected 130 cases of samples from surgical resection and enteroscope biopsy of digestive internal medicine，65 cases of normal colon mucosa and 65 cases of cancer tissues in each group，all patients did not receive radiotherapy and chemotherapy.The expression of NIBP，CyclinE and CyclinD1 was detected by immunohistochemistry SP method，and then we analyzed the relationship between the positive expression of proteins and the clinicopathologic features in patients with colon cancer.The correlations between expression of NIBP，CyclinE and CyclinD1 were determined by Pearson or Spearman tests.Results The positive expression rates of NIBP in the normal colonic mucosa and colon cancer tissues were 18.46%（12/65）and 60.00%（39/65），respectively；the positive expression rates of CyclinD1 were 3.08%（2/65）and 56.92%（37/65），respectively；and the positive expression rates of CyclinE were 43.08%（28/65）and 89.23%（58/65），respectively.Significant differences were found in the positive expression rates of NIBP，CyclinE and CyclinD1 between these two groups（all P＜0.05）.The expression of NIBP，CyclinE and CyclinD1 was significantly related with the depth of tumor invasion，TNM staging，lymph node metastasis and distant metastasis in patients with colon cancer（all P＜0.05）.In the colon cancer tissues，the expression of NIBP was positively correlated with CyclinE and CyclinD1 expression（r=0.43，0.32，all P＜0.05），and the expression of CyclinD1 and CyclinE was positively correlated（r=0.23，P＜0.05）.Conclusion NIBP，CyclinE and CyclinD1 is highly expressed in the human colon cancer tissues，and they may participate in the occurrence and developmentof colon cancer tissues.

colon carcinoma；NIK-IKK binding protein；CyclinE；CyclinD1

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.25.004

R735.35

A

1002-266X（2016）25-0013-04

廣西自然科學基金資助項目（2013GXNSFAA019159）。

陳楚杰（1989-），在讀碩士，主要研究方向為消化道腫瘤的基礎與臨床。E-mail：397538840@qq.com

簡介：黃杰安（1965-），教授，主要研究方向為消化道腫瘤的基礎與臨床。E-mail：1404991727@qq.com

2016-03-21）